狂犬病病毒结构基因的克隆及犬瘟热病毒N蛋白基因与eGFP基因重组质粒的构建

发布时间：2021-11-21 00:49

　　本研究从BHK-21细胞培养的狂犬病病毒SRV9株病毒液中提取病毒总RNA，通过反转录PCR（Reverse transcript PCR，RT-PCR）技术进行狂犬病病毒结构基因的扩增，得到1352bp的N基因（核蛋白基因，nucleoprotein gene，N），893bp的P基因（磷酸化蛋白基因，phosphoprotein gene，P），608bp的M基因（基质基因，matrix protein gene，M），1574bp的G基因（糖蛋白基因，glycoprotein gene，G），3372bp的L1基因（大转录蛋白1，large protein gene1，L1）以及3012bp L2基因（大转录蛋白2，large protein gene2，L2），并将其分别连接于pMD19-T载体，进行测序并与SAD B19株比对，实验结果如下：N基因、P基因、M基因、G基因、L1基因以及L2基因的核苷酸序列与SAD B19株的核苷酸同源性分别为100%、99.66%、99.67%、99.04%、100%及98.70%，氨基酸序列的同源性分别为100%、98.99%、100%、9... 

【文章来源】：新疆农业大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

RV形态和结构(引自Jackson，2003)

图1.2 RV基因组结构图Fig.1.2 Genome structure of rabies virusN蛋白即核蛋白(nucleoprotein)，其编码基因高度保守，不同的狂犬病病毒株间的同源性高达98%~99.6%。N蛋白有3个主要抗原位点且具有高度一致性。N蛋白在病毒复制过程中与核酸紧密结合，形成核糖核蛋白，可以保护核酸不被核酸酶降解。有研究表明，N蛋白可作为病毒转录和复制的模板，还可维持核衣壳转录所需的螺旋对称结构[10]，因此，N蛋白是转录和复制过程中的关键性因子。P蛋白即磷酸化蛋白(phosphoprotein)，具有广泛的疏水区。狂犬病病毒不同毒株之间磷酸化蛋白基因的同源性在92%~98%之间。P蛋白可与L蛋白形成具有转录酶活性的复合物[11]，约950个P蛋白分子、150个L蛋白分子与N蛋白组成具有转录和复制活性的核衣壳，该结构可独立完成RNA的转录和复制过程[12]。M蛋白即基质蛋白(matrix protein)，连接核衣壳和病毒膜。该蛋白1~72位氨基酸间存在一个抗原决定簇，可诱导病毒的免疫反应；第89~107位氨基酸具有疏水性，起锚定作

图1.3 CDV形态及结构Fig.1.3 Shape and construction of canine distemper virus组由一条单股负链 RNA 组成，全长约 15kb~16kb，从磷酸化蛋白 P、基质蛋白 M、融合蛋白 F、吸附蛋白3’端和 5’端存在着由 50 个非编码核苷酸组成的引导序制和转录调控[43-44](见图 1.4)。图1.4 CDV基因组结构图Fig.1.4 Genome structure of canine distemper virus衣壳蛋白(nucleoprotein)，由 523 个氨基酸组成，包录和复制时充当模板。N 蛋白具有一个完整的开放性转录、复制、装配中起重要作用[45]，是 CDV 中相当

【参考文献】：
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本文编号：3508425