猪miR-124调控Cav1基因表达及miR-124在乙脑病毒感染中作用的研究
发布时间：2021-11-21 11:22
疾病已成为现代养猪业的最大威胁,特别是一些人畜共患病的流行也严重影响着人类的健康。开展抗病育种特别是对抗病候选基因的挖掘是摆在育种工作者面前的最为急迫的任务。在本实验室前期工作中,将猪Cav1基因作为一般抗病力的候选基因,对该基因的结构进行了解析,并研究了该基因的转录调控机制,同时分析了该基因在副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis）感染猪的过程中的表达变化规律,探究了该基因在Glasser’s病的发病过程中的作用机制。本研究在前期研究的基础上对猪Cav1基因的转录后调控做进一步的探索,并选择乙脑病毒作为感染材料,探究了调控猪Cav1基因的niRNA在乙脑病毒感染PK15细胞中的作用机制,主要取得了以下结果：1.用Targetscan在线软件预测了靶向猪Cav1基因的miRNA,并选择具有保守靶向位点的rniRNA进行生物学验证。双荧光素酶报告基因实验结果表明,miR-124、miR-199a-5p和：miR-199b-5p可以显著降低海肾荧光素酶活性；通过Q-PCR的方法检测到在转染miR-124和niR-199a-5p的细胞中的Cav1基因的mRNA表达显著降低,同...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：103 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
Caveolse结构示意图CPartOnandSimans,2007)
.3.3 microRNA的基本功能miRNA的沉默复合物由多种蛋白组成，其中研究的较为清楚的是ArgonauteGO)蛋白家族。哺乳动物的AGO家族包括四种蛋白：AG01-AG04。它们的作与miRNA发挥功能直接相关，当miRNA序列和mRNA的3’UTR相结合时，都可以制革in蛋白的合成(Liu et al., 2004; Meister et al., 2004; Pillai et al., 2004)。其中AG02以降解mRNA，所以在RNAi中发挥重要作用。而其他的AGO却不能降解mRNA，能抑制翻译。在植物中，miRNA通常和祀基因的mRNA完全配对，以RNAi机制的方式降解内mRNA(Jones-Rhoades et al., 2006)。miRNA的这种作用机制在脊椎动物和病毒中极出现(Du and Zamore, 2005)。在动物当中，通过实验和生物信息学预测发现，miRNA基因mRNA通常是不完全配对的，miRNA的2-8nt这段序列和mRNA完全配对，作miRNA的“种子序列（seed region) ”。大多数的miRNA的结合位点都在勒i基
确定祀向猪CavJ基因的候选miRNA。最后选择了其中的5个miRNA进行下一步验证(图3-1，表3-1)。表3-1预测到的miRNA得分情况Table 3-1 Scores of predicted miRNAmiRNA ScoremiR-203 80miR-124 67miR-375 81miR-199a/b-5p 72：!< OU oik 0 5k oik 6.§k O.&k 0)k 0 S< 6 6 k iV iik 15 k itk l4k 1? i.6k l.SkGeneConserved sitts for miRNA families broadly conserved among vertebratesm R-203rr'R-375 rr. R-124/124ao/506 miR-199ab-5pI I ? I图3-1预测到的祀向猪CflW基因的miRNAFigure 3-1 miRNA that were predicted to target porcine Cavl gene3.1.2双劳光素酶报告基因结果(1)根据猪CflW基因的3’UTR序列设计引物，将猪CflW基因的3’UTR全长扩增出来，将其插入到psi-CHECK2载体的海肾焚光素酶基因的3’UTR中，得到重组载体Cav73'UTR-psi-CHECK2,然后将Cflv/3’UTR-psi-CHECK2载体和miRNA mimics共转染BHK-21细胞，同时设置阴性对照（NC) , 24h后测定双焚光素酶活性。结果显37
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪抗病和免疫相关候选基因的研究进展[J]. 杨海玲,曾勇庆,王慧. 猪业科学. 2010(01)
[2]猪动脉内皮细胞胞膜小窝的电子断层三维结构分析[J]. 孙书锋,张凯,徐伟,王刚,陈建军,孙飞. 生物化学与生物物理进展. 2009(06)
[3]30年来我国猪育种工作进展与展望[J]. 彭中镇. 猪业科学. 2008(01)
[4]猪Nramp 1基因多态性与免疫功能的相关性[J]. 吴宏梅,王立贤,程笃学,马小军. 中国农业科学. 2008(01)
[5]猪β干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其对伪狂犬病毒的抑制作用[J]. 曹瑞兵,周国栋,周海霞,包晶晶,陈溥言. 微生物学报. 2006(03)
[6]猪FUT1基因对肉质和胴体性状的影响[J]. 姜勋平,刘永刚,熊远著,邓昌彦. 遗传. 2005(04)
本文编号：3509419
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：103 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
Caveolse结构示意图CPartOnandSimans,2007)
.3.3 microRNA的基本功能miRNA的沉默复合物由多种蛋白组成，其中研究的较为清楚的是ArgonauteGO)蛋白家族。哺乳动物的AGO家族包括四种蛋白：AG01-AG04。它们的作与miRNA发挥功能直接相关，当miRNA序列和mRNA的3’UTR相结合时，都可以制革in蛋白的合成(Liu et al., 2004; Meister et al., 2004; Pillai et al., 2004)。其中AG02以降解mRNA，所以在RNAi中发挥重要作用。而其他的AGO却不能降解mRNA，能抑制翻译。在植物中，miRNA通常和祀基因的mRNA完全配对，以RNAi机制的方式降解内mRNA(Jones-Rhoades et al., 2006)。miRNA的这种作用机制在脊椎动物和病毒中极出现(Du and Zamore, 2005)。在动物当中，通过实验和生物信息学预测发现，miRNA基因mRNA通常是不完全配对的，miRNA的2-8nt这段序列和mRNA完全配对，作miRNA的“种子序列（seed region) ”。大多数的miRNA的结合位点都在勒i基
确定祀向猪CavJ基因的候选miRNA。最后选择了其中的5个miRNA进行下一步验证(图3-1，表3-1)。表3-1预测到的miRNA得分情况Table 3-1 Scores of predicted miRNAmiRNA ScoremiR-203 80miR-124 67miR-375 81miR-199a/b-5p 72：!< OU oik 0 5k oik 6.§k O.&k 0)k 0 S< 6 6 k iV iik 15 k itk l4k 1? i.6k l.SkGeneConserved sitts for miRNA families broadly conserved among vertebratesm R-203rr'R-375 rr. R-124/124ao/506 miR-199ab-5pI I ? I图3-1预测到的祀向猪CflW基因的miRNAFigure 3-1 miRNA that were predicted to target porcine Cavl gene3.1.2双劳光素酶报告基因结果(1)根据猪CflW基因的3’UTR序列设计引物，将猪CflW基因的3’UTR全长扩增出来，将其插入到psi-CHECK2载体的海肾焚光素酶基因的3’UTR中，得到重组载体Cav73'UTR-psi-CHECK2,然后将Cflv/3’UTR-psi-CHECK2载体和miRNA mimics共转染BHK-21细胞，同时设置阴性对照（NC) , 24h后测定双焚光素酶活性。结果显37
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪抗病和免疫相关候选基因的研究进展[J]. 杨海玲,曾勇庆,王慧. 猪业科学. 2010(01)
[2]猪动脉内皮细胞胞膜小窝的电子断层三维结构分析[J]. 孙书锋,张凯,徐伟,王刚,陈建军,孙飞. 生物化学与生物物理进展. 2009(06)
[3]30年来我国猪育种工作进展与展望[J]. 彭中镇. 猪业科学. 2008(01)
[4]猪Nramp 1基因多态性与免疫功能的相关性[J]. 吴宏梅,王立贤,程笃学,马小军. 中国农业科学. 2008(01)
[5]猪β干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其对伪狂犬病毒的抑制作用[J]. 曹瑞兵,周国栋,周海霞,包晶晶,陈溥言. 微生物学报. 2006(03)
[6]猪FUT1基因对肉质和胴体性状的影响[J]. 姜勋平,刘永刚,熊远著,邓昌彦. 遗传. 2005(04)
本文编号：3509419
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3509419.html
