猪瘟病毒QuantiGene ViewRNA原位杂交方法的建立及初步应用

发布时间：2021-11-21 16:03

　　猪瘟（Classical Swine Fever，CSF）是由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus，CSFV）引起的猪的高度接触性、致死性传染性疾病，给养猪业造成巨大威胁和经济损失。本研究建立了CSFV QuantiGene ViewRNA原位杂交检测方法；并采用建立的CSFV QuantiGene ViewRNA原位杂交方法初步应用于CSFV RNA在体外感染细胞中的增殖动态研究和体内感染组织的CSFVRNA检测。为了高效检测和准确定位CSFV并探究CSFV RNA在体外感染细胞中的复制动态和分布规律，本研究分别设计并合成了CSFV RNA和猪内参基因β-actin的多条特异性探针，对培养于PK15细胞系中的CSFV中等致病力毒株HeBHH1/95（TCID-.550为104/200μL）进行研究。并采用正交试验方法优化反应条件，根据检测结果、荧光强度、重复性等因素，确定CSFV QuantiGeneViewRNA原位杂交反应的关键要素，蛋白酶K最优浓度为1:1000，甲醛最优固定时间为30min。在荧光共聚焦显微镜下，阳性样本可检测到明亮的红色荧光。通过... 

【文章来源】：中国兽医药品监察所北京市

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

CSFV基因结构模式图（图片引自MartinBetal.2007）

QuantiGeneViewRNA技术工作原理图解

CSFVQuantiGeneViewRNA原位杂交方法建立结果图

【参考文献】：
期刊论文
[1]猪瘟流行现状及中国猪瘟净化策略[J]. 王琴.  中国猪业. 2012(10)
[2]9株猪瘟分离毒株的致病特性[J]. 王琴,宁宜宝,赵耘,王在时,张广川,范学政,宋立,秦玉明,沈青春,丘惠深,余兴龙,吕宗吉,徐兴然,涂长春.  中国兽医学报. 2007(02)
[3]H9N2亚型禽流感病毒原位杂交检测方法的建立[J]. 张万坡,程国富,谷长勤,李德学,宋念华,毕丁仁,胡薛英,胡思顺,胡智斌.  中国兽医学报. 2005(04)
[4]生物芯片技术及其应用概述[J]. 白丽荣.  生物学教学. 2003(12)
[5]鸡包涵体肝炎病毒DNA探针的制备及其原位杂交的应用[J]. 王凤龙,葛金英,郝先谱,刘月焕.  中国预防兽医学报. 2003(06)
[6]固定液对原位杂交的影响[J]. 马云,张燕,孙长华,李冰,刘同慎.  中国组织化学与细胞化学杂志. 2002(03)
[7]猪瘟病毒流行株与疫苗株主要抗原编码基因差异研究[J]. 王在时,丘惠深,郎洪武,李博,王琴,赵耘.  中国兽药杂志. 2001(01)
[8]荧光原位杂交技术的发展与应用[J]. 王玲,宁顺斌,宋运淳,吕应堂.  植物学报. 2000(11)
[9]荧光原位杂交法检测双歧杆菌[J]. 修淑丽,熊德鑫,杨义,陆莲蓉.  中国微生态学杂志. 2000(01)
[10]猪瘟兔化弱毒疫苗与我国近年猪瘟野毒的免疫保护相关性试验[J]. 丘惠深,郎洪武,王在时.  中国兽药杂志. 1997(03)

博士论文
[1]猪瘟慢性感染对猪免疫功能影响的细胞与分子机制研究[D]. 陈锴.四川农业大学 2012

硕士论文
[1]CSFV SM株感染对猪外周血白细胞的影响以及在猪体内的分布[D]. 周远成.四川农业大学 2009
[2]猪瘟病毒原位RT-PCR检测方法的建立及分子致病机理的初步研究[D]. 秦玉明.中国兽医药品监察所 2003



本文编号：3509808