猪肺泡巨噬细胞（PAM）极化模型的建立及PRRSV感染过程中动态变化研究

发布时间：2021-11-23 08:51

　　为了建立猪肺泡巨噬细胞（PAMs）不同亚型及研究不同亚型与PRRSV之间的关系,本试验在体外通过IFN-y/LPS诱导PAMs分化成M1型巨噬细胞,通过IL-4诱导分化成M2型巨噬细胞。通过Calcein-AM染色和电镜观察不同组细胞形态学变化。通过M1型巨噬细胞相关标志分子NO、IL-12鉴定M1型巨噬细胞诱导分化成功,通过M2型巨噬细胞相关标志分子Arg-1、IL-10鉴定M2型巨噬细胞诱导分化成功。正常的PAMs感染PRRSV后,测定M1、M2相关性分子的表达量,拟研究PAMs感染PRRSV后极化类型。体外成功刺激M1和M2不同亚型的PAMs与PRRSV共培养,通过测定M1、M2相关性分子,拟研究PRRSV对M1和M2两种亚型PAMs的影响。为了检测NO的表达量,不同组细胞24h后提取上清,Griess法检测各组NO表达量显示,IFN-γ/LPS刺激的PAMs组相比较未刺激组和IL-4刺激组高表达,显示出极显著差异（P<0.01）。不同组细胞培养刺激24～72h,48h提取蛋白,Western结果显示,IL-4刺激的PAMs组相比较IFN-γ/LPS刺激组和未刺激组高表达,... 

【文章来源】：延边大学吉林省 211工程院校

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
    1 猪繁殖与呼吸综合征概述
        1.1 猪繁殖与呼吸综合征概述
    2 PRRSV概述
        2.1 PRRSV分子生物学与病原学概述
        2.2 HP-PRRSV概述
    3 巨噬细胞概述
        3.1 巨噬细胞来源及特异性标志
        3.2 巨噬细胞的分类
        3.3 巨噬细胞的免疫调节作用
    4. 巨噬细胞亚型研究现状
        4.1 巨噬细胞不同亚型分类及其差异性研究概述
        4.2 影响巨噬细胞极化的分子机制研究概述
        4.3 M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞作用研究
    5 PRRSV与猪肺泡巨噬细胞之间的关系
    6 本试验研究的目的和意义
材料与方法
    1 材料
        1.1 病毒株与试验动物
        1.2 试验用主要药品及试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 试验所需主要试剂的配制
    2 方法
        2.1 PAMs的制取及纯度鉴定
        2.2 PAMs Calcein-AM染色形态学观察
        2.3 各组PAMs电镜观察
        2.4 M1和M2两种亚型PAMs体外诱导试验
        2.5 Griess试剂检测NO的浓度
        2.6 Western blotting法检测不同刺激组PAMs Arg-1,IL-10,IL-12蛋白的表达
        2.7 PAMs感染PRRSV后细胞极化类型研究试验
        2.8 PRRSV对M1和M2型两种PAMs影响研究
        2.9 数据统计及分析
结果
    1 PAMs纯度鉴定
    2 M1和M2两种亚型PAMs模型的建立
    3 PAMs感染PRRSV前后形态变化
    4 PAMs感染PRRSV后极化类型试验结果
    5 PRRSV对M1和M2两种亚型PAMs影响研究
讨论
结论
参考文献
致谢
作者简介
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]Heat Shock Protein and Innate Immunity[J]. Min-Fu Tsan.  Cellular & Molecular Immunology. 2004(04)



本文编号：3513539