基于纳米磁珠与化学发光技术检测广西巴马小型猪PERV的研究
发布时间：2021-11-23 21:31
为解决人源器官严重短缺的问题,人们希望利用动物器官进行异种移植。经多方考虑,人们选择猪作为最合适的供体。而猪内源性反转录病毒（Porcine endogenous retrovirus, PERV）普遍存在于各类猪种中,且能够感染人类细胞,引起了人们的高度重视。广西巴马小型猪具有体型小、遗传稳定、遗传背景清晰等优点,是异种移植的良好供体。为开发巴马小型猪种资源,筛选PERV低拷贝猪,为异种移植提供安全可靠的猪源器官,本研究利用纳米磁珠（magnetic nanoparticles, MNPs）与化学发光（chemiluminescence, CL）技术,建立了一种基于纳米磁珠与化学发光的PERV检测方法,并应用该方法进行了广西巴马小型猪PERV前病毒的检测研究,主要内容包括：1、纳米磁珠的制备及其在血液DNA提取中的应用采用溶剂热法制备出Fe304纳米磁珠,在其表面进行Si02包覆,得到Fe3O4@SiO2复合磁珠,并进行氨基化及羧基化修饰,获得羧基功能化纳米磁珠（CMNPs）。经透射电子显微镜（TEM）、扫描电子显微镜（SEM）表征,粒径分析,化学基团的傅立叶变换红外光谱（FT-IR...
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
缩略词（Abbreviation）
第一章 综述
1.1 猪内源性反转录病毒及其检测方法研究进展
1.1.1 异种移植的安全性
1.1.2 PERV的生物学特性
1.1.3 PERV检测方法研究进展
1.2 纳米磁珠与化学发光在病原体检测中的应用研究进展
1.2.1 纳米磁珠及其功能化修饰
1.2.2 主要化学发光体系
1.2.3 基于纳米磁珠与化学发光的病原体检测技术研究进展
1.3 本研究的目的和意义
第二章 纳米磁珠的制备及其在血液DNA提取中的应用
2.1 前言
2.2 实验材料
2.3 实验方法
2.3.1 Fe_3O_4磁珠的制备
2.3.2 Fe_3O_4@SiO_2复合磁珠的制备
2.3.3 磁珠的氨基化修饰
2.3.4 磁珠的羧基化修饰
2.3.5 磁珠的表征
2.3.6 巴马小型猪血液基因组DNA的提取
2.4 结果与分析
2.4.1 磁珠的TEM图
2.4.2 磁珠的SEM图
2.4.3 磁珠的粒径分布
2.4.4 磁珠的FT-IR光谱图
2.4.5 磁珠的磁滞回归曲线
2.4.6 三种方法提取巴马小型猪血液基因组DNA的比较
2.5 讨论
2.5.1 纳米磁珠的制备
2.5.2 磁珠法提取DNA
2.6 本章小结
第三章 基于纳米磁珠与化学发光的PERV检测方法的建立与优化
3.1 前言
3.2 实验材料
3.3 实验方法
3.3.1 引物、探针的设计
3.3.2 探针修饰磁珠的制备
3.3.3 基因组DNA的提取
3.3.4 pol片段的生物素标记PCR扩增
3.3.5 固相杂交反应
3.3.6 化学发光检测
3.3.7 实验条件的优化
3.3.8 灵敏度实验
3.3.9 PERV亚型检测方法的建立
3.4 结果与分析
3.4.1 基因组DNA的提取
3.4.2 PCR扩增产物的电泳检测
3.4.3 特异性检测
3.4.4 实验条件的优化
3.4.5 检测灵敏度
3.4.6 PERV亚型检测方法的建立
3.5 讨论
3.5.1 目的片段的生物素标记PCR扩增
3.5.2 实验条件的优化
3.6 本章小结
第四章 广西巴马小型猪PERV相对拷贝数的化学发光检测
4.1 前言
4.2 实验材料
4.3 实验方法
4.3.1 内参GAPDH的引物、探针设计
4.3.2 探针修饰磁珠的制备
4.3.3 基因组DNA的提取
4.3.4 内参GAPDH片段的化学发光检测方法的建立
4.3.5 pol与GAPDH片段的化学发光检测
4.3.6 env-A、env-B、env-C与GAPDH片段的化学发光检测
4.3.7 PERV相对拷贝数的分析
4.4 结果与分析
4.4.1 内参GAPDH片段的PCR扩增
4.4.2 内参GAPDH片段的特异性检测
4.4.3 PERV的化学发光检测
4.4.4 PERV三种亚型的化学发光检测
4.4.5 PERV相对拷贝数的分析
4.5 讨论
4.6 本章小结
第五章 总结与展望
5.1 论文工作总结
5.2 展望
参考文献
附录
致谢
本文编号：3514678
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
缩略词（Abbreviation）
第一章 综述
1.1 猪内源性反转录病毒及其检测方法研究进展
1.1.1 异种移植的安全性
1.1.2 PERV的生物学特性
1.1.3 PERV检测方法研究进展
1.2 纳米磁珠与化学发光在病原体检测中的应用研究进展
1.2.1 纳米磁珠及其功能化修饰
1.2.2 主要化学发光体系
1.2.3 基于纳米磁珠与化学发光的病原体检测技术研究进展
1.3 本研究的目的和意义
第二章 纳米磁珠的制备及其在血液DNA提取中的应用
2.1 前言
2.2 实验材料
2.3 实验方法
2.3.1 Fe_3O_4磁珠的制备
2.3.2 Fe_3O_4@SiO_2复合磁珠的制备
2.3.3 磁珠的氨基化修饰
2.3.4 磁珠的羧基化修饰
2.3.5 磁珠的表征
2.3.6 巴马小型猪血液基因组DNA的提取
2.4 结果与分析
2.4.1 磁珠的TEM图
2.4.2 磁珠的SEM图
2.4.3 磁珠的粒径分布
2.4.4 磁珠的FT-IR光谱图
2.4.5 磁珠的磁滞回归曲线
2.4.6 三种方法提取巴马小型猪血液基因组DNA的比较
2.5 讨论
2.5.1 纳米磁珠的制备
2.5.2 磁珠法提取DNA
2.6 本章小结
第三章 基于纳米磁珠与化学发光的PERV检测方法的建立与优化
3.1 前言
3.2 实验材料
3.3 实验方法
3.3.1 引物、探针的设计
3.3.2 探针修饰磁珠的制备
3.3.3 基因组DNA的提取
3.3.4 pol片段的生物素标记PCR扩增
3.3.5 固相杂交反应
3.3.6 化学发光检测
3.3.7 实验条件的优化
3.3.8 灵敏度实验
3.3.9 PERV亚型检测方法的建立
3.4 结果与分析
3.4.1 基因组DNA的提取
3.4.2 PCR扩增产物的电泳检测
3.4.3 特异性检测
3.4.4 实验条件的优化
3.4.5 检测灵敏度
3.4.6 PERV亚型检测方法的建立
3.5 讨论
3.5.1 目的片段的生物素标记PCR扩增
3.5.2 实验条件的优化
3.6 本章小结
第四章 广西巴马小型猪PERV相对拷贝数的化学发光检测
4.1 前言
4.2 实验材料
4.3 实验方法
4.3.1 内参GAPDH的引物、探针设计
4.3.2 探针修饰磁珠的制备
4.3.3 基因组DNA的提取
4.3.4 内参GAPDH片段的化学发光检测方法的建立
4.3.5 pol与GAPDH片段的化学发光检测
4.3.6 env-A、env-B、env-C与GAPDH片段的化学发光检测
4.3.7 PERV相对拷贝数的分析
4.4 结果与分析
4.4.1 内参GAPDH片段的PCR扩增
4.4.2 内参GAPDH片段的特异性检测
4.4.3 PERV的化学发光检测
4.4.4 PERV三种亚型的化学发光检测
4.4.5 PERV相对拷贝数的分析
4.5 讨论
4.6 本章小结
第五章 总结与展望
5.1 论文工作总结
5.2 展望
参考文献
附录
致谢
本文编号：3514678
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