基于RABV糖蛋白膜外区的阻断ELISA抗体检测方法建立及应用
发布时间：2021-11-23 23:41
狂犬病（Rabies）是由狂犬病病毒（Rabies virus,RABV）引起的一种具有极高致死性的人兽共患传染病,能够感染人和温血动物。全球每年因该病死亡的人数在60000人左右。目前该病尚无有效的治疗方法,感染人一旦出现症状,病死率100%。但只要进行有效的暴露后处置,就可100%预防本病的发生。由于犬是本病的重要贮存和传播宿主,针对犬进行免疫可有效预防本病的发生,防止其向人群的传播。业已证明,70%的犬只免疫覆盖率即可有效阻止狂犬病的传播。评价免疫效果及免疫覆盖率的指标是机体内RABV中和抗体的水平。目前针对狂犬病中和抗体测定的方法有多种,国际上认可的金标准方法包括动物体内中和试验和细胞中和试验。由于动物中和试验常采用较多动物,花费周期较长,目前已不多用。细胞中和试验方法有荧光抗体病毒中和试验（Fluorescent antibody virus neutralization,FAVN）和快速荧光灶抑制试验（Rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT）两种。但这两种方法通常需要在23个工作日才能完成,并涉及活毒...
【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒pCMV-Ge的酶切鉴定Fig.1-1RestrictionenzymedigestionofrecombinantplasmidpCMV-Ge
0、400、500、600、700、800μg/ml）后，在 1-3 天时，高浓出现明显的生长减慢现象，在 4-5 天后细胞开始皱缩，破 天时，600μg/ml以及更高浓度的各孔细胞全部死亡，镜下3 细胞；而不加压孔细胞铺满底壁。即 600μg/ml的 zeocin的生长。为更精确的筛选到阳性克隆，笔者最终选取略高g/ml作为转染后筛选阳性克隆的最佳药物浓度；在完成阳用 600μg/ml的药物浓度维持阳性细胞系在加压条件下的的筛选后的细胞与正常细胞混合铺板并施加以 zeocin药物压力后到部分存活下来并有分裂能力的疑似阳性细胞，到第 20依靠自身不断分裂聚成一小块细胞集合，镜下观察如图 此类细胞克隆，不断维持其生长传代后，收集表达产物作A B
图 1-3 表达产物的 ELISA 检测1-3 Detection of the reactivity of expression products using 物的 Western Blot 检测 ELISA 方法检测到部分能够同时与抗 his 标签单抗与抗 应的细胞株后，选取细胞株 3 的表达上清，进行 Wester白的大小。反应结果如图 1-4，两抗体的 WB 结果均显示了特异性条带，与预期相符，证明 RABV 糖蛋白膜外区样品名称M 1 2M 1 2 3A B
【参考文献】：
期刊论文
[1]狂犬病病毒不同毒株糖蛋白免疫原性的比较研究[J]. 陈腾,张锦霞,张静远,陈奇,张菲,米丽娟,张守峰,扈荣良. 中国兽医科学. 2016(04)
[2]狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区的原核表达及纯化[J]. 鞠美芳,殷相平,柳纪省. 生物技术通报. 2012(09)
[3]狂犬病病毒N蛋白主要抗原区的表达及SPA-ELISA抗体检测方法的建立[J]. 曾妮,宫苗苗,郭李平,邱文英,李刚. 生物工程学报. 2011(08)
[4]狂犬病病毒糖蛋白膜外区基因在大肠埃希氏菌中的高效表达[J]. 蔡月琴,叶菊秀,李玲燕,周继勇. 中国兽医科学. 2006(06)
硕士论文
[1]两株狂犬病病毒糖蛋白的杆状病毒表达及其免疫原性研究[D]. 陈奇.中国人民解放军军事医学科学院 2013
本文编号：3514848
【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒pCMV-Ge的酶切鉴定Fig.1-1RestrictionenzymedigestionofrecombinantplasmidpCMV-Ge
0、400、500、600、700、800μg/ml）后，在 1-3 天时，高浓出现明显的生长减慢现象，在 4-5 天后细胞开始皱缩，破 天时，600μg/ml以及更高浓度的各孔细胞全部死亡，镜下3 细胞；而不加压孔细胞铺满底壁。即 600μg/ml的 zeocin的生长。为更精确的筛选到阳性克隆，笔者最终选取略高g/ml作为转染后筛选阳性克隆的最佳药物浓度；在完成阳用 600μg/ml的药物浓度维持阳性细胞系在加压条件下的的筛选后的细胞与正常细胞混合铺板并施加以 zeocin药物压力后到部分存活下来并有分裂能力的疑似阳性细胞，到第 20依靠自身不断分裂聚成一小块细胞集合，镜下观察如图 此类细胞克隆，不断维持其生长传代后，收集表达产物作A B
图 1-3 表达产物的 ELISA 检测1-3 Detection of the reactivity of expression products using 物的 Western Blot 检测 ELISA 方法检测到部分能够同时与抗 his 标签单抗与抗 应的细胞株后，选取细胞株 3 的表达上清，进行 Wester白的大小。反应结果如图 1-4，两抗体的 WB 结果均显示了特异性条带，与预期相符，证明 RABV 糖蛋白膜外区样品名称M 1 2M 1 2 3A B
【参考文献】：
期刊论文
[1]狂犬病病毒不同毒株糖蛋白免疫原性的比较研究[J]. 陈腾,张锦霞,张静远,陈奇,张菲,米丽娟,张守峰,扈荣良. 中国兽医科学. 2016(04)
[2]狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外区的原核表达及纯化[J]. 鞠美芳,殷相平,柳纪省. 生物技术通报. 2012(09)
[3]狂犬病病毒N蛋白主要抗原区的表达及SPA-ELISA抗体检测方法的建立[J]. 曾妮,宫苗苗,郭李平,邱文英,李刚. 生物工程学报. 2011(08)
[4]狂犬病病毒糖蛋白膜外区基因在大肠埃希氏菌中的高效表达[J]. 蔡月琴,叶菊秀,李玲燕,周继勇. 中国兽医科学. 2006(06)
硕士论文
[1]两株狂犬病病毒糖蛋白的杆状病毒表达及其免疫原性研究[D]. 陈奇.中国人民解放军军事医学科学院 2013
本文编号：3514848
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