流感病毒包装并表达的外源基因特性研究

发布时间：2021-11-24 12:22

　　流感病毒各基因片段末端的包装信号对于病毒RNA有效地包装到病毒粒子中起着非常重要的作用,而包装信号之间的序列也与能否成功包装入具有复制能力的病毒粒子密切相关。本研究在PR8毒株反向遗传操作系统的基础上,将不同核苷酸序列插入到HA包装信号之间,进行病毒拯救,研究影响病毒基因包装的必须条件,并对表达外源基因重组病毒的生物学特性进行了研究。为了构建表达外源基因的流感病毒,首先将PR8病毒HA基因的包装信号序列插入到PolI启动子和终止子之间,然后在包装信号之间分别插入海肾荧光素酶基因（Renilla luciferase）、鸭坦布苏病毒（DTMUV） E基因或密码子优化后的E基因、E基因结构域Ⅲ （EDⅢ）序列或密码子优化后的EDin序列、H9N2亚型禽流感病毒SH441的HA基因或密码子优化后的HA基因,利用PR8流感病毒反向遗传操作系统拯救病毒。结果显示：插入Renilla、EDⅢ和SH441HA基因的重组病毒可以拯救成功,通过RT-PCR方法证明外源基因存在于重组病毒中。而其它几株重组病毒拯救不成功,没有检测到特异性的插入序列。利用mfold软件分析这几种插入基因的RNA二级结构,发现... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

禽流感病毒的粒子结构

质粒转染系统(Hoffmannetal.,2000b)

图2-1 RP8-HA包装信号序列表达外源基因质粒构建流程缩略图Fig. 2-1 The flow chart of expression foregin genes of PR8-HA packaging signals plasmids2.2.1流感病毒PR8的HA基因包装信号表达质粒构建2.2.1.1 PBD-PR8-HA质粒的小量抽提

【参考文献】：
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本文编号：3515972