东方田鼠巨噬细胞对日本血吸虫童虫杀伤作用研究
发布时间：2021-11-24 13:39
血吸虫病是一种存在广泛且危害严重的人畜共患寄生虫病。吡喹酮能杀死血吸虫成虫和尾蚴,是安全高效的治疗药物,但不能预防其感染。血吸虫病流行和传播的客观因素以及该病复燃的危险因素在某些地区仍然存在。新药和疫苗的研发仍然是该病防控技术研究的重点。东方田鼠是对日本血吸虫具有天然抗性的哺乳动物,对其抗性机制研究可为血吸虫病防控技术研究提供新的方向和线索。本文应用DMEM灌洗东方田鼠腹腔后快速水平振荡,分离培养并贴壁筛选纯化巨噬细胞,建立了一种东方田鼠腹腔巨噬细胞体外分离培养的简便方法。结果获得了大量高纯度的腹腔巨噬细胞,细胞形态正常,活细胞比例为98%。培养细胞吞噬墨汁颗粒功能的检测结果表明其具有良好的吞噬功能。细胞内酸性磷酸酶及非特异性α-醋酸奈酚酯酶染色结果显示获得的细胞胞质内含有较丰富的水解酶。结果表明快速震荡法是一种简易实用的体外分离培养东方田鼠腹腔巨噬细胞的方法。测定了东方田鼠感染日本血吸虫前后血清和肝肺组织中NO含量,结果显示感染0 d、3 d、7 d、15 d的东方田鼠血清NO含量呈上升趋势,分别为3.99μM、4.95μM、18.89μM、23.81μM,显著高于同时期BALB/c...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
明场下观察巨噬细胞
中国农业科学院硕士学位论文第二章东方田鼠腹腔巨噬细胞分离培养与鉴定8复染10min，PBS冲洗，甘油明胶封片。显微观察细胞胞浆中酶活性部位为弥漫性红棕色产物、胞核为绿色。光镜下每张爬片计数200个细胞并计算阳性率。2.4实验结果2.4.1巨噬细胞形态观察东方田鼠腹腔巨噬细胞培养明场下观察可见细胞核明显，胞质较丰富，活跃时内含有颗粒或空泡。东方田鼠巨噬细胞具有变形运动和吞噬能力，而且细胞的形状不一，外周多突起及伪足（图2-1）。HE染色后可见东方田鼠巨噬细胞呈圆形、椭圆形、三角形或不规则形，有伪足和突起，界限清楚。核大为卵圆形、肾形、马蹄型或不规则形，偏居于细胞的一端，着色较深（图2-2）。东方田鼠腹腔巨噬细胞和KM鼠腹腔巨噬细胞在外观形态上相似。(a)(b)图2-1明场下观察巨噬细胞(a):东方田鼠巨噬细胞(b):昆明鼠巨噬细胞Fig.2-1Macrophageobservationunderbrightfield(a):MacrophagesofMicrotusfortis(b):MacrophagesofKM(a)(b)图2-2巨噬细胞的HE染色观察(a):东方田鼠巨噬细胞(b):昆明鼠巨噬细胞Fig.2-2HEstainingofmacrophages(a):MacrophagesofMicrotusfortis(b):MacrophagesofKM
中国农业科学院硕士学位论文第二章东方田鼠腹腔巨噬细胞分离培养与鉴定92.4.2巨噬细胞的吞噬功能将分离培养5d腹腔巨噬细胞加印度墨汁培养3h后可见其吞噬功能被激活，培养细胞的胞质及伪足和突起均有密集的墨汁颗粒，吞噬率为98%，显示东方田鼠具有较强的吞噬功能。同样处理的KM鼠腹腔巨噬细胞的吞噬性也较强，两者无明显差异（图2-3）。(a)(b)图2-3巨噬细胞的墨汁吞噬试验(a):东方田鼠巨噬细胞(b):昆明鼠巨噬细胞Fig.2-3InkPhagocytosistestofmacrophages(a):MacrophagesofMicrotusfortis(b):MacrophagesofKM2.4.3巨噬细胞的酸性磷酸酶表达将培养3d的巨噬细胞制备细胞爬片，酸性磷酸酶染色后可见东方田鼠腹腔巨噬细胞的胞浆内有大量的棕黑色颗粒，阳性率为98%；KM鼠腹腔巨噬细胞胞浆的着色程度和东方田鼠类似（图2-4）。(a)(b)图2-4ACP染色观察巨噬细胞的酸性磷酸酶表达(a):东方田鼠巨噬细胞(b):昆明鼠巨噬细胞Fig.2-4ACPstainingtoobservetheexpressionofacidphosphataseinmacrophages(a):MacrophagesofMicrotusfortis(b):MacrophagesofKM2.4.4巨噬细胞的非特异性酯酶表达
【参考文献】：
期刊论文
[1]2017年全国血吸虫病疫情通报[J]. 张利娟,徐志敏,戴思敏,党辉,吕山,许静,李石柱,周晓农. 中国血吸虫病防治杂志. 2018(05)
[2]感染日本血吸虫前后东方田鼠血清补体的动态变化和杀虫作用[J]. 柴淑梅,张倩,翟颀,余新刚,洪炀,陆珂,李浩,林矫矫,谢建芸,傅志强. 中国动物传染病学报. 2019(01)
[3]东方田鼠在医学生物学研究与应用进展[J]. 柴淑梅,傅志强,谢建芸. 实验动物与比较医学. 2018(01)
[4]2015年全国血吸虫病疫情通报[J]. 张利娟,徐志敏,钱颖骏,党辉,吕山,许静,李石柱,周晓农. 中国血吸虫病防治杂志. 2016(06)
[5]日本血吸虫C1q结合蛋白基因的克隆表达及其免疫保护效果评估[J]. 贾秉光,洪炀,韩倩,吕超,王涛,柴淑梅,曹晓丹,陆珂,宰金丽,马帅,林矫矫,傅志强. 中国动物传染病学报. 2016(03)
[6]东方田鼠肝内巨噬细胞的分离和鉴定[J]. 胡媛,孙磊,徐馀信,曹建平. 中国血吸虫病防治杂志. 2015(03)
[7]日本血吸虫四跨膜孤儿受体（TOR）克隆及其第一个膜外区基因的表达[J]. 马帅,韩艳辉,洪炀,张旻,曹晓丹,韩倩,刘艳涛,陆看,马茜茜,陆珂,贾秉光,林矫矫,傅志强. 中国动物传染病学报. 2014(06)
[8]小鼠腹腔巨噬细胞的分离培养与鉴定[J]. 张淑莉,李素芬. 海南医学. 2014(19)
[9]东方田鼠感染日本血吸虫后的病理与相关基因表达改变[J]. 邵国艳,冯洁,柏熊,赵莹,刘大海,高捷,谢建云,高诚,胡建华. 中国实验动物学报. 2013(02)
[10]东方田鼠和小鼠感染日本血吸虫后组织与血清蛋白组分差异比较研究[J]. 成钢,王京仁,王兴平,李淑红. 中国畜牧兽医. 2012(07)
硕士论文
[1]利用芯片技术分析不同宿主感染日本血吸虫前后基因的差异性表达[D]. 蒋韦斌.上海师范大学 2009
本文编号：3516087
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
明场下观察巨噬细胞
中国农业科学院硕士学位论文第二章东方田鼠腹腔巨噬细胞分离培养与鉴定8复染10min，PBS冲洗，甘油明胶封片。显微观察细胞胞浆中酶活性部位为弥漫性红棕色产物、胞核为绿色。光镜下每张爬片计数200个细胞并计算阳性率。2.4实验结果2.4.1巨噬细胞形态观察东方田鼠腹腔巨噬细胞培养明场下观察可见细胞核明显，胞质较丰富，活跃时内含有颗粒或空泡。东方田鼠巨噬细胞具有变形运动和吞噬能力，而且细胞的形状不一，外周多突起及伪足（图2-1）。HE染色后可见东方田鼠巨噬细胞呈圆形、椭圆形、三角形或不规则形，有伪足和突起，界限清楚。核大为卵圆形、肾形、马蹄型或不规则形，偏居于细胞的一端，着色较深（图2-2）。东方田鼠腹腔巨噬细胞和KM鼠腹腔巨噬细胞在外观形态上相似。(a)(b)图2-1明场下观察巨噬细胞(a):东方田鼠巨噬细胞(b):昆明鼠巨噬细胞Fig.2-1Macrophageobservationunderbrightfield(a):MacrophagesofMicrotusfortis(b):MacrophagesofKM(a)(b)图2-2巨噬细胞的HE染色观察(a):东方田鼠巨噬细胞(b):昆明鼠巨噬细胞Fig.2-2HEstainingofmacrophages(a):MacrophagesofMicrotusfortis(b):MacrophagesofKM
中国农业科学院硕士学位论文第二章东方田鼠腹腔巨噬细胞分离培养与鉴定92.4.2巨噬细胞的吞噬功能将分离培养5d腹腔巨噬细胞加印度墨汁培养3h后可见其吞噬功能被激活，培养细胞的胞质及伪足和突起均有密集的墨汁颗粒，吞噬率为98%，显示东方田鼠具有较强的吞噬功能。同样处理的KM鼠腹腔巨噬细胞的吞噬性也较强，两者无明显差异（图2-3）。(a)(b)图2-3巨噬细胞的墨汁吞噬试验(a):东方田鼠巨噬细胞(b):昆明鼠巨噬细胞Fig.2-3InkPhagocytosistestofmacrophages(a):MacrophagesofMicrotusfortis(b):MacrophagesofKM2.4.3巨噬细胞的酸性磷酸酶表达将培养3d的巨噬细胞制备细胞爬片，酸性磷酸酶染色后可见东方田鼠腹腔巨噬细胞的胞浆内有大量的棕黑色颗粒，阳性率为98%；KM鼠腹腔巨噬细胞胞浆的着色程度和东方田鼠类似（图2-4）。(a)(b)图2-4ACP染色观察巨噬细胞的酸性磷酸酶表达(a):东方田鼠巨噬细胞(b):昆明鼠巨噬细胞Fig.2-4ACPstainingtoobservetheexpressionofacidphosphataseinmacrophages(a):MacrophagesofMicrotusfortis(b):MacrophagesofKM2.4.4巨噬细胞的非特异性酯酶表达
【参考文献】：
期刊论文
[1]2017年全国血吸虫病疫情通报[J]. 张利娟,徐志敏,戴思敏,党辉,吕山,许静,李石柱,周晓农. 中国血吸虫病防治杂志. 2018(05)
[2]感染日本血吸虫前后东方田鼠血清补体的动态变化和杀虫作用[J]. 柴淑梅,张倩,翟颀,余新刚,洪炀,陆珂,李浩,林矫矫,谢建芸,傅志强. 中国动物传染病学报. 2019(01)
[3]东方田鼠在医学生物学研究与应用进展[J]. 柴淑梅,傅志强,谢建芸. 实验动物与比较医学. 2018(01)
[4]2015年全国血吸虫病疫情通报[J]. 张利娟,徐志敏,钱颖骏,党辉,吕山,许静,李石柱,周晓农. 中国血吸虫病防治杂志. 2016(06)
[5]日本血吸虫C1q结合蛋白基因的克隆表达及其免疫保护效果评估[J]. 贾秉光,洪炀,韩倩,吕超,王涛,柴淑梅,曹晓丹,陆珂,宰金丽,马帅,林矫矫,傅志强. 中国动物传染病学报. 2016(03)
[6]东方田鼠肝内巨噬细胞的分离和鉴定[J]. 胡媛,孙磊,徐馀信,曹建平. 中国血吸虫病防治杂志. 2015(03)
[7]日本血吸虫四跨膜孤儿受体（TOR）克隆及其第一个膜外区基因的表达[J]. 马帅,韩艳辉,洪炀,张旻,曹晓丹,韩倩,刘艳涛,陆看,马茜茜,陆珂,贾秉光,林矫矫,傅志强. 中国动物传染病学报. 2014(06)
[8]小鼠腹腔巨噬细胞的分离培养与鉴定[J]. 张淑莉,李素芬. 海南医学. 2014(19)
[9]东方田鼠感染日本血吸虫后的病理与相关基因表达改变[J]. 邵国艳,冯洁,柏熊,赵莹,刘大海,高捷,谢建云,高诚,胡建华. 中国实验动物学报. 2013(02)
[10]东方田鼠和小鼠感染日本血吸虫后组织与血清蛋白组分差异比较研究[J]. 成钢,王京仁,王兴平,李淑红. 中国畜牧兽医. 2012(07)
硕士论文
[1]利用芯片技术分析不同宿主感染日本血吸虫前后基因的差异性表达[D]. 蒋韦斌.上海师范大学 2009
本文编号：3516087
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