空肠弯曲菌鞭毛合成中FlhF蛋白的结构域影响及转录调控机制解析
发布时间：2021-11-24 23:20
空肠弯曲菌（Campylobacterjejuni,C.jejuni）为革兰氏阴性菌,是近十几年来受到国内外学者广泛重视的一种重要的人兽共患病原菌。其中,鞭毛及其介导的运动性被认为是该菌重要的毒力因素。目前,空肠弯曲菌鞭毛结构已被广泛研究,但对其基因合成及调控机制知之甚少。其中,FlhF是影响空肠弯曲菌鞭毛合成以及运动力的关键蛋白,其失活导致鞭毛及运动力完全缺失,具体影响机制并未阐明。考虑FlhF对鞭毛合成的重要性,推测FlhF对鞭毛合成除了间接调控作用,还可能作为一个转录因子,直接调控鞭毛基因表达,但FlhF转录功能及机制也未见报道。本研究成功构建flhF缺失株和回复株,以及B、N、G结构域回复株,通过运动力实验及透射电镜观察进一步分析FlhF蛋白结构域对鞭毛合成的影响;利用转录组测序技术探究了 FlhF在鞭毛合成通路中影响效应;利用EMSA、ChIP-qPCR及LacZ报告质粒检测实验等技术筛选并验证FlhF转录调控靶标,进一步解析FlhF在空肠弯曲菌鞭毛合成中的转录调控通路。一、空肠弯曲菌FlhF蛋白结构域对鞭毛合成的影响分析FlhF蛋白具有B、N、G 3个结构域。为探究FlhF...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１空肠弯曲菌８１－１７６＿／７／？尸突变株＆＿／７／！／；Ｂ／Ｎ／Ｇ?ｄｏｍａｉｎ回复株的鉴定??
?扬州大学硕士学位论文???３．２?Ｂ／Ｎ／Ｇ单结构域回复对鞭毛合成及运动力表型的影响??通过运动力实验以及透射电子显微镜观察，本研究初步分析了?Ｂ／Ｎ／Ｇ单结构域对空肠??弯曲菌鞭毛及运动力表型的影响。我们首先将野生株８１－１７６?（ＷＴ）与Ｂ／Ｎ／Ｇ单结构域回??复株穿刺接种至ＭＨ半固体平板上来比较其运动力差异。结果发现，野生株８１－１７６从接种??处向四周扩散进而形成圆环状，而与其运动力相比，Ｂ、Ｎ及Ｇ单结构域回复株均呈现无??运动力表型（图１－２）。通过透射电子显微镜观察发现野生株８１－１７６鞭毛表型正常（图??１－３Ａ），其中细菌鞭毛表型正常占９１％，包括极鞭毛（１３％）和两极鞭毛（７８％）（表１－５）；??极少部分无鞭毛表型可能是因为在操作过程中细菌鞭毛脱落。与之相比，Ｂ、Ｎ及Ｇ单结??构域回复株均无法观察到鞭毛（图１－３Ｂ－Ｄ）。考虑ＦｌｈＦ缺失导致鞭毛及运动力完全消失，??综合结果，我们推测Ｂ、Ｎ及Ｇ单结构域回复无法回复鞭毛及运动力表型。??图１－２空肠弯曲菌菌株运动力比较??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｍｏｔｉｌｉｔｙ?ｂｅｔ＾?ｅｅｎ?Ｃ．?ｊｅｊｕｎｉ?ｓｔｒａｉｎｓ??１８??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]空肠弯曲菌FlhF单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 任方哲,王楠,商宇伟,焦新安,黄金林. 细胞与分子免疫学杂志. 2013(12)
[2]空肠弯曲菌鞭毛研究进展[J]. 任方哲,王楠,商宇伟,焦新安,黄金林. 中国人兽共患病学报. 2013(08)
[3]空肠弯曲杆菌感染的研究现状[J]. 张佩鑫. 畜牧兽医科技信息. 2012(09)
博士论文
[1]空肠弯曲菌FlhF调节鞭毛合成分子机制及其对细菌毒力的影响分析[D]. 任方哲.扬州大学 2019
[2]溶藻弧菌中σE和群体感应系统介导的毒力调控机制[D]. 顾丹.华东理工大学 2016
硕士论文
[1]肠炎沙门菌转录因子SEN2967和SEN3610调控基因的筛选与鉴定[D]. 陈韵.扬州大学 2017
本文编号：3516946
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１空肠弯曲菌８１－１７６＿／７／？尸突变株＆＿／７／！／；Ｂ／Ｎ／Ｇ?ｄｏｍａｉｎ回复株的鉴定??
?扬州大学硕士学位论文???３．２?Ｂ／Ｎ／Ｇ单结构域回复对鞭毛合成及运动力表型的影响??通过运动力实验以及透射电子显微镜观察，本研究初步分析了?Ｂ／Ｎ／Ｇ单结构域对空肠??弯曲菌鞭毛及运动力表型的影响。我们首先将野生株８１－１７６?（ＷＴ）与Ｂ／Ｎ／Ｇ单结构域回??复株穿刺接种至ＭＨ半固体平板上来比较其运动力差异。结果发现，野生株８１－１７６从接种??处向四周扩散进而形成圆环状，而与其运动力相比，Ｂ、Ｎ及Ｇ单结构域回复株均呈现无??运动力表型（图１－２）。通过透射电子显微镜观察发现野生株８１－１７６鞭毛表型正常（图??１－３Ａ），其中细菌鞭毛表型正常占９１％，包括极鞭毛（１３％）和两极鞭毛（７８％）（表１－５）；??极少部分无鞭毛表型可能是因为在操作过程中细菌鞭毛脱落。与之相比，Ｂ、Ｎ及Ｇ单结??构域回复株均无法观察到鞭毛（图１－３Ｂ－Ｄ）。考虑ＦｌｈＦ缺失导致鞭毛及运动力完全消失，??综合结果，我们推测Ｂ、Ｎ及Ｇ单结构域回复无法回复鞭毛及运动力表型。??图１－２空肠弯曲菌菌株运动力比较??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｍｏｔｉｌｉｔｙ?ｂｅｔ＾?ｅｅｎ?Ｃ．?ｊｅｊｕｎｉ?ｓｔｒａｉｎｓ??１８??
?第一章空肠弯曲菌ＦｌｈＦ对鞭毛合成的影响分析???８１，１７６?Ｂ?ｄｏｍｉｉｓ?ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ?ｓｔｒａｉｓ??／??，Ａ?ｌｊ￡Ｐ?Ｂ??Ｎ?ｄｏｍａｉｎ?ｃｏｑ＾ｌｅｎｉｅｏｔｅｄ?ｓｔｒａｉｎ?’?Ｇ?ｄｏｍａｉｎ?ｃｏｍｐｌｅｍｅＢｌｅｄ?ｓｔｒｔｉａ??＼?＾??ｔ??４＊＇??２?ｐｍ?、Ｃ?Ｌｈｉｔ?ｆ?Ｄ??图１－３透射电子显微镜观察空肠弯曲菌鞭毛??Ｆｉｇ?１－３?Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ?ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｇｒａｐｈｓ?ｏｆ?Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ?ｆｌａｇｅｌｌａ??表１－５空肠弯曲菌鞭毛表型情况??Ｔａｂｌｅ?１－５?Ｔｈｅ?ｆｌａｇｅｌｌａ?ｐｈｅｎｏｔ＼ｐｅ?ｏｆ?Ｃ．?ｊｅｊｕｎｉ?ｓｔｒａｉｎｓ??＃?Ｆｌａｇｅｌｌｕｍ?ｎｕｍｂｅｒ??Ｓｔｒａｉｎ?日?Ｎｏｒｍａｌ?ｆｌａｇｅｌｌａ?ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ??菌株?￣￣－￣￣￣￣－—?正常鞭毛表型??８１－１７６?７８?１３?９?９１％??Ｂ／Ｎ／Ｇ?ｄｏｍａｉｎ?ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ??０?０?１００?０％??ｓｔｒａｉｎ??３Ｊ?ＢＮ／ＮＧ／ＢＧ双结构域回复株的构建与鉴定??为构建ＢＮ／ＮＧ／ＢＧ双结构域回复株，首先构建ｐＵＯＡ１８－Ｐｍｅ汉－ＢＮ／ＮＧ／ＢＧｄｏｍａｉｎ重??组质粒，在ＬＢ平板（含氯霉素）上进行筛选，选取单菌落并提取质粒进行鉴定。如图１－４??Ａ－Ｂ所示，回复载体ｐＵＯＡｌ?８－Ｐｗｅ／Ａ：－ＢＮ／ＮＧ／ＢＧ?ｄｏｍａｉｎ经５謂／／１单酶切后，电泳出现８．８５??ｋｂ、９．２?ｋｂ以及８．８?ｋｂ大小的片段；经５續／／１和＊Ｓａｃ?Ｉ双酶切后
【参考文献】：
期刊论文
[1]空肠弯曲菌FlhF单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 任方哲,王楠,商宇伟,焦新安,黄金林. 细胞与分子免疫学杂志. 2013(12)
[2]空肠弯曲菌鞭毛研究进展[J]. 任方哲,王楠,商宇伟,焦新安,黄金林. 中国人兽共患病学报. 2013(08)
[3]空肠弯曲杆菌感染的研究现状[J]. 张佩鑫. 畜牧兽医科技信息. 2012(09)
博士论文
[1]空肠弯曲菌FlhF调节鞭毛合成分子机制及其对细菌毒力的影响分析[D]. 任方哲.扬州大学 2019
[2]溶藻弧菌中σE和群体感应系统介导的毒力调控机制[D]. 顾丹.华东理工大学 2016
硕士论文
[1]肠炎沙门菌转录因子SEN2967和SEN3610调控基因的筛选与鉴定[D]. 陈韵.扬州大学 2017
本文编号：3516946
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