动物血清中SARS-CoV-2抗体检测方法的建立与评价

发布时间：2021-11-24 22:04

　　为针对不同动物开展SARS-CoV-2相关研究工作提供检测手段,针对SARS-CoV-2 S1蛋白建立了一种可检测不同动物血清中的SARS-CoV-2抗体的ELISA方法。通过构建表达SARS-CoV-2 S1蛋白的重组杆状病毒,收获重组杆状病毒培养上清纯化蛋白,建立SARS-CoV-2双抗原夹心ELISA抗体检测方法,并评价该方法的特异性、敏感性及临床适用性。结果显示,获得可表达SARS-CoV-2 S1蛋白的重组杆状病毒,表达纯化获得SARS-CoV-2 S1蛋白,并对该蛋白进行HRP标记,建立了SARS-CoV-2双抗原夹心ELISA抗体检测方法,该方法检测SPF小鼠、兔、猪及动物源性冠状病毒抗体阳性血清均为阴性;检测SARS-CoV-2 S1蛋白免疫兔血清,稀释至1∶320时仍为阳性;检测SARS-CoV-2人工感染雪貂灭活血清,感染前均为阴性,感染后13 d和20 d均为阳性。表明建立的SARS-CoV-2双抗原夹心ELISA抗体检测方法具有良好的特异性、敏感性和临床适用性,可用于多种动物血清中SARS-CoV-2抗体的检测。 

【文章来源】：动物医学进展. 2020,41(11)北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

rBacmid-S1的PCR鉴定

将P2代毒种接种Sf9细胞,72 h后可见细胞体积明显增大、细胞内颗粒增多甚至破裂、细胞增殖受阻、未形成致密的细胞单层,而正常Sf9细胞对照的细胞大小均一、折光性良好、轮廓清晰,并形成致密的细胞单层(图3)。图2 rBacmid-S1的PCR鉴定

图2 rBacmid-S1的PCR鉴定将P2代毒种提取核酸后,用PH-F和PH-R进行PCR鉴定,重组杆状病毒的扩增产物大小为988 bp,与预期大小相符,而感染杆状病毒野毒未扩增出条带,表明获得了重组杆状病毒,命名为重组新型冠状病毒S1蛋白毒种rnCov-S1株(图4)。


本文编号：3516836