CD40抗体的制备及对奶牛EPF B细胞表位肽免疫增强效果分析
发布时间：2021-11-25 19:58
CD40（cluster of differention 40）是肿瘤坏死因子受体超家族成员之一,属于I型跨膜糖蛋白,主要表达在上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞、造血细胞、一些肿瘤细胞以及免疫细胞表面。免疫细胞表面的CD40与活化的T细胞产生的CD40L结合,可促进树突状细胞（Dendritic cells,DCs）增殖、分化和成熟,增强其抗原提呈能力和吞噬凋亡细胞的能力;也可作为B细胞活化的第二信号,参与了B细胞的活化、增殖和分化过程,促进抗体的产生和类型转换,并能使即将凋亡的B细胞存活并增殖,形成生发中心;还可明显上调APC细胞表达CD80和CD86分子,来作为T细胞活化的第二信号,能有效刺激机体免疫系统。一直以来,缺乏有效的早期受孕检测手段是制约奶牛行业发展的一大问题,可导致奶牛空怀期长、繁殖率低以及成本提高等问题。奶牛早孕因子（EPF）是最早被确认为妊娠期的生化标志之一,故EPF的有无可作为早期是否受孕的可靠指标。本课题前期根据EPF表位序列设计合成了由14个氨基酸组成的B细胞表位肽,该B细胞表位肽属于小分子半抗原。由于小分子免疫原性弱,免疫过程需偶联到大的载体蛋白上,且常用的弗...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CD40蛋白二级结构的预测
第二篇研究内容第1章小鼠CD40胞外段的抗原性分析、原核表达及纯化25暴露的几率不大，不易形成B细胞抗原表位，亲水区一般暴露在外面的几率较大，形成B细胞抗原表位的概率也较大[106]。K-D法预测的蛋白亲水性区域主要位于5～106、118～122、135～163、170～173位氨基酸残基（见图1.2）。通过对以上蛋白质结构预测分析，B细胞抗原表位主要位于β转角、无规则卷曲、表面可及性高的区域、蛋白亲水区和抗原性区域，约有6个抗原表位位点，即5～29、32~49、50～101、114～130、136～163、168～173位氨基酸残基处，分段较多、较分散，且占胞外段全序列的83.2%，抗原性较强，因此小鼠CD40胞外段可作为制备抗体良好的免疫原。本实验选取小鼠CD40胞外段全长共173个氨基酸所对应序列进行原核表达。图1.2CD40蛋白二级结构分析Fig.1.2SecondarystructureanalysisofCD40protein1.3.3CD40基因胞外段的扩增在1.3.2中预测的抗原表位区氨基酸个数占胞外段CDS区总数的83.2%，分段多，较分散，用link连接表达效果不如直接取全长表达，且胞外段全长免疫原性较强。故提取小鼠脾脏总RNA，反转录成cDNA作为模板，用针对胞外全长的CDS区设计合成的引物进行PCR扩增，产物用1%琼脂糖凝胶电泳，结果显示在522bp处有明亮的条带（见图1.3），与理论大小相符。PCR产物测序结果(见图1.4)与Genbank比对完全一致。
第二篇研究内容第1章小鼠CD40胞外段的抗原性分析、原核表达及纯化26图1.3CD40目的基因PCR扩增结果Fig.1.3PCRamplificationresultofCD40targetgeneM：DL2000DNAMarker；1、2：CD40目的基因片段图1.4PCR产物测序结果Fig.1.4PCRproductsequencingresult
【参考文献】：
期刊论文
[1]HPV感染合并子宫内膜癌对人附睾蛋白4和 Th1/Th2细胞因子的影响[J]. 田秀芳,武乃倩,陈红晓,栾雅静,卢慧. 中华医院感染学杂志. 2019(22)
[2]人跨膜蛋白39A原核表达载体构建、条件优化及可溶性表达[J]. 李向茸,马瑞仙,李倩,王兴陇,李生军,张海霞,冯若飞. 基础医学与临床. 2019(07)
[3]奶牛早期妊娠诊断技术简述[J]. 滕月. 中国畜禽种业. 2019(02)
[4]归脾汤对血小板减少性紫癜模型小鼠脾中CD80及CD86表达的影响[J]. 李杨,姜开运,马贤德. 中华中医药学刊. 2018(12)
[5]CD138在尿路上皮及浆细胞样尿路上皮癌中的表达及其意义[J]. 王见璋,黄金凤,李炜霞,何志明. 中国当代医药. 2017(20)
[6]新型免疫佐剂研究进展[J]. 赵思俊,孙晓亮,曲志娜,王娟,曹旭敏,王淑婷,王晓茵,李雪莲. 中国动物检疫. 2016(07)
[7]免疫佐剂研究进展[J]. 高明,邵军军,常惠芸,张永光. 安徽农业科学. 2015(34)
[8]婴幼儿IgM抗体产生趋势及其与CD19、CD20关系的探讨[J]. 周根水,徐秀云,吴红,童小燕,刘昕. 中国输血杂志. 2015(09)
[9]奶牛早孕因子重组蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备[J]. 刘云,贾斌,石峰,李鑫,李洪涛,张永生,宁梦影,纪俊明,秦炳燕. 中国畜牧兽医. 2015(04)
[10]用DNAStar软件预测Rv1410c结核分枝杆菌蛋白抗原表位[J]. 李江英,白雪娟,梁艳,张俊仙,阳幼荣,赵卫国,吴雪琼. 细胞与分子免疫学杂志. 2015(04)
博士论文
[1]共刺激分子CD40/CD40L和OX40/OX40L在乳腺癌中的表达及其生物学意义[D]. 施勤.苏州大学 2003
硕士论文
[1]猪源CD40L蛋白的真核表达及体外免疫活性的研究[D]. 原慧.山西农业大学 2016
[2]急性冠脉综合征患者血清可溶性CD40L的临床研究[D]. 傅宏杰.第四军医大学 2011
[3]孕牛乳汁中早孕因子的分离纯化及部分特性的研究[D]. 张宏玲.东北农业大学 2008
本文编号：3518697
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CD40蛋白二级结构的预测
第二篇研究内容第1章小鼠CD40胞外段的抗原性分析、原核表达及纯化25暴露的几率不大，不易形成B细胞抗原表位，亲水区一般暴露在外面的几率较大，形成B细胞抗原表位的概率也较大[106]。K-D法预测的蛋白亲水性区域主要位于5～106、118～122、135～163、170～173位氨基酸残基（见图1.2）。通过对以上蛋白质结构预测分析，B细胞抗原表位主要位于β转角、无规则卷曲、表面可及性高的区域、蛋白亲水区和抗原性区域，约有6个抗原表位位点，即5～29、32~49、50～101、114～130、136～163、168～173位氨基酸残基处，分段较多、较分散，且占胞外段全序列的83.2%，抗原性较强，因此小鼠CD40胞外段可作为制备抗体良好的免疫原。本实验选取小鼠CD40胞外段全长共173个氨基酸所对应序列进行原核表达。图1.2CD40蛋白二级结构分析Fig.1.2SecondarystructureanalysisofCD40protein1.3.3CD40基因胞外段的扩增在1.3.2中预测的抗原表位区氨基酸个数占胞外段CDS区总数的83.2%，分段多，较分散，用link连接表达效果不如直接取全长表达，且胞外段全长免疫原性较强。故提取小鼠脾脏总RNA，反转录成cDNA作为模板，用针对胞外全长的CDS区设计合成的引物进行PCR扩增，产物用1%琼脂糖凝胶电泳，结果显示在522bp处有明亮的条带（见图1.3），与理论大小相符。PCR产物测序结果(见图1.4)与Genbank比对完全一致。
第二篇研究内容第1章小鼠CD40胞外段的抗原性分析、原核表达及纯化26图1.3CD40目的基因PCR扩增结果Fig.1.3PCRamplificationresultofCD40targetgeneM：DL2000DNAMarker；1、2：CD40目的基因片段图1.4PCR产物测序结果Fig.1.4PCRproductsequencingresult
【参考文献】：
期刊论文
[1]HPV感染合并子宫内膜癌对人附睾蛋白4和 Th1/Th2细胞因子的影响[J]. 田秀芳,武乃倩,陈红晓,栾雅静,卢慧. 中华医院感染学杂志. 2019(22)
[2]人跨膜蛋白39A原核表达载体构建、条件优化及可溶性表达[J]. 李向茸,马瑞仙,李倩,王兴陇,李生军,张海霞,冯若飞. 基础医学与临床. 2019(07)
[3]奶牛早期妊娠诊断技术简述[J]. 滕月. 中国畜禽种业. 2019(02)
[4]归脾汤对血小板减少性紫癜模型小鼠脾中CD80及CD86表达的影响[J]. 李杨,姜开运,马贤德. 中华中医药学刊. 2018(12)
[5]CD138在尿路上皮及浆细胞样尿路上皮癌中的表达及其意义[J]. 王见璋,黄金凤,李炜霞,何志明. 中国当代医药. 2017(20)
[6]新型免疫佐剂研究进展[J]. 赵思俊,孙晓亮,曲志娜,王娟,曹旭敏,王淑婷,王晓茵,李雪莲. 中国动物检疫. 2016(07)
[7]免疫佐剂研究进展[J]. 高明,邵军军,常惠芸,张永光. 安徽农业科学. 2015(34)
[8]婴幼儿IgM抗体产生趋势及其与CD19、CD20关系的探讨[J]. 周根水,徐秀云,吴红,童小燕,刘昕. 中国输血杂志. 2015(09)
[9]奶牛早孕因子重组蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备[J]. 刘云,贾斌,石峰,李鑫,李洪涛,张永生,宁梦影,纪俊明,秦炳燕. 中国畜牧兽医. 2015(04)
[10]用DNAStar软件预测Rv1410c结核分枝杆菌蛋白抗原表位[J]. 李江英,白雪娟,梁艳,张俊仙,阳幼荣,赵卫国,吴雪琼. 细胞与分子免疫学杂志. 2015(04)
博士论文
[1]共刺激分子CD40/CD40L和OX40/OX40L在乳腺癌中的表达及其生物学意义[D]. 施勤.苏州大学 2003
硕士论文
[1]猪源CD40L蛋白的真核表达及体外免疫活性的研究[D]. 原慧.山西农业大学 2016
[2]急性冠脉综合征患者血清可溶性CD40L的临床研究[D]. 傅宏杰.第四军医大学 2011
[3]孕牛乳汁中早孕因子的分离纯化及部分特性的研究[D]. 张宏玲.东北农业大学 2008
本文编号：3518697
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