鹦鹉热衣原体质粒Pgp3基因的克隆表达及抗原性研究
发布时间：2021-12-02 11:12
鹦鹉热衣原体属于衣原体科衣原体属,是一种专性细胞内寄生的革兰氏阴性菌。是引起人类、家禽、鸟类及多种哺乳动物感染的一种人兽共患病病原体。鹦鹉热衣原体不仅对家禽业的有序发展造成严重的干扰,也对人类的健康形成严重的威胁。目前国内对动物衣原体病的诊断主要依赖于间接血凝试验（IHA）,由于衣原体感染动物具有自身的的抗体消长规律,通过IHA检测时可能出现假阴性现象。为避免抗体消长造成的检测假阴性结果,针对该病原体开发新的诊断方法显得尤为重要。根据沙眼衣原体质粒PGP3蛋白在感染人期间持续分泌的特性,选择该鹦鹉热衣原体质粒PGP3蛋白基因作为研究的靶点,为准确检测鹦鹉热衣原体病提供理论依据。以兰州广场观赏鸽粪便中提取总基因组DNA为模板,根据GenBank鹦鹉热衣原体Pgp3基因序列（DQ414846.1）设计合成1对特异性引物,对目的片段进行PCR扩增,连接到pMD-18T载体并进行测序鉴定。对测序无误的序列进行生物信息学分析,显示鹦鹉热衣原体PGP3蛋白与沙眼衣原体PGP3蛋白具有相似的二级、三级结构,表明鹦鹉热衣原体PGP3蛋白可能具有与沙眼衣原体PGP3蛋白相似的特性。将Pgp3基因构建至p...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
鹦鹉热衣原体的双相发育周期Fig.1-1developmentcycleofCpsittaci(KNITTLERetal.,2015)
的呼吸道人畜共患病的病原，尤其是鹦鹉和长尾小鹦鹉，但也有来自食品行业的鸡以及野生鸽子(LONGBOTTOMetal.,2003)。流产衣原体主要寄生于猪、牛、羊等多种动物生殖道黏膜表面的上皮细胞，造成生殖道黏膜受损，母畜流产、死胎、弱胎，公畜睾丸炎、包皮炎，严重威胁畜牧业的发展，孕妇与感染的动物直接接触可能会造成感染(ALVAREZetal.,2015)。因此，找到衣原体感染快速、准确的诊断方法至关重要。1.2鹦鹉热衣原体病鹦鹉热衣原体是一种专性细胞内寄生，能感染包括人在内的多种哺乳动物及禽类鸟类，是一种人兽共患病病原体（图1-2）。目前，有7种已知的基因型（A-F和E/B）。所有的基因型均可传播给人类，引起鹦鹉病或鹦鹉热(ANDERSENetal.,2000)。鹦鹉热衣原体能感染跨越30种不同鸟类目的至少465种鸟类，其中至少153种为雀形目(KALETAetal.,2003)，尤其是鹦鹉科（凤头鹦鹉、鹦鹉、长尾鹦鹉）以及鸽类。鹦鹉热衣原体的主要传播方式是通过吸入了来自病畜或无症状带菌者尿液、呼吸道和眼部分泌物或干燥粪便的污染气溶胶。人类与患病的鸟类及其粪便、羽毛等密切接触时极有可能会感染鹦鹉热衣原体，引起严重的疾病(MAIR-JENKINSetal.,2018；VANROMPAYetal.,2007)。鹦鹉病有可能在人与人之间传播，但较为罕见(HUGHESetal.,1997；ITOetal.,2002)。图1-2衣原体的人兽共患潜力Fig.1-2Zoonoticpotentialoftheanimalpathogens(LONGBOTTOMandCOULTER,2003)鹦鹉热衣原体主要引起人类呼吸道感染，临床症状千变万化。可从最初的呼吸系统的上皮细胞和巨噬细胞扩散到全身，影响不同的器官（心脏、肝脏和胃肠道）。人类鹦鹉热衣原体疾病的发病通常遵循5-14天的潜伏期，但是根据血清学的检测结果报告的潜伏期更长(YUNGetal.,1988)。严重程度从轻微的非特异性疾病到带有
中国农业科学院硕士学位论文第一章绪论6TARP-CPAF）ELISA与MikrogenrecomLine免疫印迹法检测沙眼衣原体血清抗体IgG，从而对输卵管因素不孕（ITF）进行预测。两种方法检测临床样本有很好的一致性。1.3.3.3微量间接免疫荧光试验(Microindirectimmunofluorescencetest,MIF)微量间接免疫荧光试验，曾被推荐为诊断肺炎衣原体的最可靠的血清学方法(DOWELLetal.,2001)，DONATIetal.,(2009)将纯化的衣原体原体（EB）建立的MIF作为检测是否有衣原体感染的标准。但该诊断方法技术要求高，耗时长，因此并没有成为肺炎衣原体的常用检测项目(MIYASHITAetal.,2008)。王菲等（2018）对肺炎衣原体和肺炎支原体临床血清学检测试剂研发中发现，rCpn-MOMP存在属特异性抗原表位，有较强的抗原性，是临床检验肺炎衣原体的一个好手段。1.4衣原体质粒糖蛋白3（PGP3）衣原体质粒是一种大小约为7.5kb、高度保守的、非结合的、非整合的DNA分子，在许多衣原体物种中存在，其中包括沙眼衣原体、鼠衣原体、猫衣原体、豚鼠衣原体、鹦鹉热衣原体、反刍动物衣原体。在大多数生物系统中，自主复制的质粒可作为遗传变异的工具。许多严重疾病都是质粒携带的毒力因子直接导致的。Ct与Cps质粒含有8个开放阅读框（ORF），Cm含有7个。质粒糖蛋白1、2、6、8即PGP1、PGP2、PGP6、PGP8与质粒的维护和复制相关。质粒糖蛋白4、5即PGP4、PGP5参与染色体基因的表达(CARLSONetal.,2008)，PGP3是唯一一个能分泌到宿主细胞质的质粒糖蛋白（图1-3）(BUDRYSetal.,2012；LIetal.,2008)。图1-3衣原体的生长和质粒的结构Fig.1-3Chlamydiagrowthandplasmidstructure(ROCKEY,2011)
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪流产衣原体实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J]. 周丹娜,李文浩,阮征,刘威,郭锐,杨克礼,段正赢,袁芳艳,刘泽文,陈文杰,孟丽,焦祖武,田永祥. 动物医学进展. 2018(09)
[2]羊衣原体LAMP检测方法的初步建立[J]. 杨茂生,杨莉,龙庆河,CHANG Yungfu. 黑龙江畜牧兽医. 2018(14)
[3]新发衣原体研究进展[J]. 陈芊,吴移谋. 中南医学科学杂志. 2018(03)
[4]肺炎衣原体及肺炎支原体临床血清学检测试剂的研发及应用[J]. 王菲,李岩伟,黄小兰,韩雪莲,贾楠,崔小岱,端青,张宝元. 标记免疫分析与临床. 2018(05)
[5]动物衣原体RPA检测方法的建立[J]. 费媛媛,李兆才,娄忠子,Muhammed MUSTAFA,张志君,赵宏涛,祁世荣,李长云,周继章. 中国兽医科学. 2018(02)
[6]基于重组外膜蛋白的猪流产嗜性衣原体病抗体ELISA检测方法的建立[J]. 周丹娜,杨克礼,闫少侠,刘泽文,段正赢,郭锐,袁芳艳,刘威,孟丽,田永祥. 中国预防兽医学报. 2015(09)
[7]CPSITp7重组表达产物免疫原性检测及其在鹦鹉热嗜衣原体持续性感染中表达的研究[J]. 贺庆芝,曾怀才,黎知青,王川,胡艳群,陈芝喜,吴移谋. 中华微生物学和免疫学杂志. 2014 (08)
[8]羊衣原体的分离鉴定及PCR诊断方法的建立[J]. 王光华,叶成玉,周继章,陆艳,马利青. 黑龙江畜牧兽医. 2013(23)
[9]奶牛流产衣原体OmpA抗原间接ELISA检测方法的建立[J]. 宋竹青,邱昌庆,周继章,郑福英,蔺国珍,曹小安,王光华,宫晓炜,魏彦明. 中国兽医科学. 2010(07)
[10]斑点酶联A蛋白免疫吸附试验（Dot-PPA-ELISA）检测猪衣原体抗体方法的建立[J]. 张焕容,文心田,曹三杰. 中国预防兽医学报. 2007(08)
硕士论文
[1]动物衣原体病通用LAMP方法的建立[D]. 杨军.四川农业大学 2013
[2]猪流产嗜性衣原体主要外膜蛋白的表达及ELISA诊断方法的建立[D]. 李西玉.西北农林科技大学 2010
[3]猪流产嗜性衣原体病间接ELISA抗体检测方法的建立[D]. 梅仕林.华中农业大学 2009
本文编号：3528315
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
鹦鹉热衣原体的双相发育周期Fig.1-1developmentcycleofCpsittaci(KNITTLERetal.,2015)
的呼吸道人畜共患病的病原，尤其是鹦鹉和长尾小鹦鹉，但也有来自食品行业的鸡以及野生鸽子(LONGBOTTOMetal.,2003)。流产衣原体主要寄生于猪、牛、羊等多种动物生殖道黏膜表面的上皮细胞，造成生殖道黏膜受损，母畜流产、死胎、弱胎，公畜睾丸炎、包皮炎，严重威胁畜牧业的发展，孕妇与感染的动物直接接触可能会造成感染(ALVAREZetal.,2015)。因此，找到衣原体感染快速、准确的诊断方法至关重要。1.2鹦鹉热衣原体病鹦鹉热衣原体是一种专性细胞内寄生，能感染包括人在内的多种哺乳动物及禽类鸟类，是一种人兽共患病病原体（图1-2）。目前，有7种已知的基因型（A-F和E/B）。所有的基因型均可传播给人类，引起鹦鹉病或鹦鹉热(ANDERSENetal.,2000)。鹦鹉热衣原体能感染跨越30种不同鸟类目的至少465种鸟类，其中至少153种为雀形目(KALETAetal.,2003)，尤其是鹦鹉科（凤头鹦鹉、鹦鹉、长尾鹦鹉）以及鸽类。鹦鹉热衣原体的主要传播方式是通过吸入了来自病畜或无症状带菌者尿液、呼吸道和眼部分泌物或干燥粪便的污染气溶胶。人类与患病的鸟类及其粪便、羽毛等密切接触时极有可能会感染鹦鹉热衣原体，引起严重的疾病(MAIR-JENKINSetal.,2018；VANROMPAYetal.,2007)。鹦鹉病有可能在人与人之间传播，但较为罕见(HUGHESetal.,1997；ITOetal.,2002)。图1-2衣原体的人兽共患潜力Fig.1-2Zoonoticpotentialoftheanimalpathogens(LONGBOTTOMandCOULTER,2003)鹦鹉热衣原体主要引起人类呼吸道感染，临床症状千变万化。可从最初的呼吸系统的上皮细胞和巨噬细胞扩散到全身，影响不同的器官（心脏、肝脏和胃肠道）。人类鹦鹉热衣原体疾病的发病通常遵循5-14天的潜伏期，但是根据血清学的检测结果报告的潜伏期更长(YUNGetal.,1988)。严重程度从轻微的非特异性疾病到带有
中国农业科学院硕士学位论文第一章绪论6TARP-CPAF）ELISA与MikrogenrecomLine免疫印迹法检测沙眼衣原体血清抗体IgG，从而对输卵管因素不孕（ITF）进行预测。两种方法检测临床样本有很好的一致性。1.3.3.3微量间接免疫荧光试验(Microindirectimmunofluorescencetest,MIF)微量间接免疫荧光试验，曾被推荐为诊断肺炎衣原体的最可靠的血清学方法(DOWELLetal.,2001)，DONATIetal.,(2009)将纯化的衣原体原体（EB）建立的MIF作为检测是否有衣原体感染的标准。但该诊断方法技术要求高，耗时长，因此并没有成为肺炎衣原体的常用检测项目(MIYASHITAetal.,2008)。王菲等（2018）对肺炎衣原体和肺炎支原体临床血清学检测试剂研发中发现，rCpn-MOMP存在属特异性抗原表位，有较强的抗原性，是临床检验肺炎衣原体的一个好手段。1.4衣原体质粒糖蛋白3（PGP3）衣原体质粒是一种大小约为7.5kb、高度保守的、非结合的、非整合的DNA分子，在许多衣原体物种中存在，其中包括沙眼衣原体、鼠衣原体、猫衣原体、豚鼠衣原体、鹦鹉热衣原体、反刍动物衣原体。在大多数生物系统中，自主复制的质粒可作为遗传变异的工具。许多严重疾病都是质粒携带的毒力因子直接导致的。Ct与Cps质粒含有8个开放阅读框（ORF），Cm含有7个。质粒糖蛋白1、2、6、8即PGP1、PGP2、PGP6、PGP8与质粒的维护和复制相关。质粒糖蛋白4、5即PGP4、PGP5参与染色体基因的表达(CARLSONetal.,2008)，PGP3是唯一一个能分泌到宿主细胞质的质粒糖蛋白（图1-3）(BUDRYSetal.,2012；LIetal.,2008)。图1-3衣原体的生长和质粒的结构Fig.1-3Chlamydiagrowthandplasmidstructure(ROCKEY,2011)
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪流产衣原体实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J]. 周丹娜,李文浩,阮征,刘威,郭锐,杨克礼,段正赢,袁芳艳,刘泽文,陈文杰,孟丽,焦祖武,田永祥. 动物医学进展. 2018(09)
[2]羊衣原体LAMP检测方法的初步建立[J]. 杨茂生,杨莉,龙庆河,CHANG Yungfu. 黑龙江畜牧兽医. 2018(14)
[3]新发衣原体研究进展[J]. 陈芊,吴移谋. 中南医学科学杂志. 2018(03)
[4]肺炎衣原体及肺炎支原体临床血清学检测试剂的研发及应用[J]. 王菲,李岩伟,黄小兰,韩雪莲,贾楠,崔小岱,端青,张宝元. 标记免疫分析与临床. 2018(05)
[5]动物衣原体RPA检测方法的建立[J]. 费媛媛,李兆才,娄忠子,Muhammed MUSTAFA,张志君,赵宏涛,祁世荣,李长云,周继章. 中国兽医科学. 2018(02)
[6]基于重组外膜蛋白的猪流产嗜性衣原体病抗体ELISA检测方法的建立[J]. 周丹娜,杨克礼,闫少侠,刘泽文,段正赢,郭锐,袁芳艳,刘威,孟丽,田永祥. 中国预防兽医学报. 2015(09)
[7]CPSITp7重组表达产物免疫原性检测及其在鹦鹉热嗜衣原体持续性感染中表达的研究[J]. 贺庆芝,曾怀才,黎知青,王川,胡艳群,陈芝喜,吴移谋. 中华微生物学和免疫学杂志. 2014 (08)
[8]羊衣原体的分离鉴定及PCR诊断方法的建立[J]. 王光华,叶成玉,周继章,陆艳,马利青. 黑龙江畜牧兽医. 2013(23)
[9]奶牛流产衣原体OmpA抗原间接ELISA检测方法的建立[J]. 宋竹青,邱昌庆,周继章,郑福英,蔺国珍,曹小安,王光华,宫晓炜,魏彦明. 中国兽医科学. 2010(07)
[10]斑点酶联A蛋白免疫吸附试验（Dot-PPA-ELISA）检测猪衣原体抗体方法的建立[J]. 张焕容,文心田,曹三杰. 中国预防兽医学报. 2007(08)
硕士论文
[1]动物衣原体病通用LAMP方法的建立[D]. 杨军.四川农业大学 2013
[2]猪流产嗜性衣原体主要外膜蛋白的表达及ELISA诊断方法的建立[D]. 李西玉.西北农林科技大学 2010
[3]猪流产嗜性衣原体病间接ELISA抗体检测方法的建立[D]. 梅仕林.华中农业大学 2009
本文编号：3528315
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