狂犬病病毒M基因功能探索及L基因聚合酶活性部位的多态性分析

发布时间：2021-12-02 19:51

　　狂犬病是由狂犬病病毒引起的一种死亡率达100%的神经性传染病,人和所有温血动物都易感。该病呈世界性分布,主要发生在亚、非、欧和美洲的未发达国家,中国、印度等最为严重。WHO公布的统计数据显示,145个国家中有100个国家报导有狂犬病疫情,全球每年有6万人死于狂犬病,严重威胁着人类健康。造成本病流行的主要原因是人们预防该病的意识不到位,家养动物的免疫密度低,暴露后未能及时进行免疫治疗。本研究以日本构建的狂犬病病毒株rRC-HL cDNA克隆为基础,用反向遗传技术将广西流行狂犬病病毒GX01株的M基因替换到rRC-HL cDNA克隆,构建出含有GX01毒株M基因的RC-HL（GX01M）感染性cDNA克隆,并在BSR细胞成功拯救出突变体重组病毒rRC-HL（GXO1M）。通过测定突变体重组病毒RC-HL（GXO1M）与亲本病毒rRC-HL的生物学特性,发现突变体重组病毒RC-HL（GXO1M）的病毒滴度比亲本病毒rRC-HL低,RNA转录水平、蛋白表达水平以及在细胞间的传播能力也比亲本病毒rRC-HL低。为进一步研究GX01株M基因的功能区域,将GX01病毒的M基因推定的氨基酸序列与RC-... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

【文章页数】：121 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图２－１狂犬病嵌合病毒的基因组结构示意图??Ｆｉ．?２－１?Ｇｅｎｏｍｉｃ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ?ｏｆ?ｃｈｉｍｅｒｉｃ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?Ｒａｂｉｅｓ?ｖｉｒｕｓ??

毒的拯救结果，免疫荧光结果显示在ＮＡ细胞中都可以见到清晰的病毒荧光灶，说明病??毒拯救成功，其中病毒ｒＲＣ－ＨＬ的荧光灶面积和荧光强度都比病毒ｒＲＣ－ＨＬ?（ＧＸ０１Ｍ）??的强（图２－３）。拯救的ｒＲＣ－ＨＬ和ｒＲＣ－ＨＬ（ＧＸＯｌＭ）病毒提取病毒的核酸，用ＲＭ１／ＲＣＭ２??弓丨物做ＲＴ－ＰＣＲ，克隆到ＰＭＤ１８－Ｔ载体并测序，测序结果表明拯救出来的病毒序列与预??期符合。??Ａ?Ｂ??ｃ??图２－３间接免疫荧光技术检测感染ＮＡ细胞的拯救病毒??Ａ：狂犬病病毒ｒＲＣ－ＨＬ?Ｂ：狂犬病病毒ｒＲＣ－ＨＬ?（ＧＸ０１Ｍ）?Ｃ：正常ＮＡ细胞??Ｆｉｇ．?２－３?ＩＦＡ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｒｅｓｃｕｅｄ?ＲＶｓ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ＮＡ?ｃｅｌｌｓ??Ａ：?Ｒｅｓｃｕｅ?ｏｆ?ｒａｂｉｅｓ?ｒＲＣ－ＨＬ?ｓｔｒａｉｎ?Ｂ：?Ｒｅｓｃｕｅ?ｏｆ?ｒＲＣ－ＨＬ?（ＧＸ０１Ｍ）?ｓｔｒａｉｎ?Ｃ：?Ｍｏ

ｒＲＣ－ＨＬ（ＧＸＯｌＭ）病毒的在?２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ?和?９６ｈ?毒价分别为?３Ｘ１０４、９．７Ｘ１０５、５Ｘ??１０６和８．３Ｘ１０６?ｆｆｂ／ｍｌ。ＧＸ０１病毒的毒价在各个时间点都比较低，分别为８Ｘ１０２、３．７??Ｘ１０３、８．３Ｘ１０３和１．３Ｘｌ〇４ｆｆｉｉ／ｍｌ?（图２－５?Ａ）。病毒的一步生长曲线和多步生长曲线相??似，ｒＲＣ－ＨＬ?（ＧＸ０１Ｍ）的毒价介于ｒＲＣ－ＨＬ和ＧＸ０１之间，感染后４８小时，??ｒＲＣ－ＨＬ（ＧＸＯｌＭ）病毒毒价比ｒＲＣ－ＨＬ毒价降低了?８３倍，但比ＧＸ０１病毒毒价增高了?６００??倍（图２－５?Ｂ）。结果表明，替换了?ＧＸ０１株的Ｍ基因后，影响了病毒的增殖速度，重??组病毒ｒＲＣ－ＨＬ?（ＧＸ０１Ｍ）比亲本病毒ｒＲＣ－ＨＬ的病毒生长曲线明显降低。??Ａ??ｍ．ｏ．ｉ．?＝?０．０１??＿?１０－．??｜?８－?＊???ｒＲＣ－ＨＬ??Ｈ：?ｒＲＣ－ＨＬ（ＧＸＯＩＭ）??｜?６－??＂’?ＧＸ０１??ｒ?４?????￡?＾???２?２＇??０?２０?４０?６０?８０?１００??Ｈｏｕｒ?ｐｏｓｔ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ??Ｂ??ｍ．ｏ．ｉ．?＝?５??＿＿＿?１０－，??｜?８－????＂?－ｍ－?ｒＲＣ－ＨＬ??＼ｔ??ａ?＋?ｒＲＣ－ＨＬ（ＧＸＯＩＭ）??１?６＇?一一?ＧＸ０１??ｆ４－?＿．??—??２?２＇??０?１０?２０?３０?４０?５０??Ｈｏｕｒ?ｐｏｓｔ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ??图２－５狂犬


本文编号：3529091