猪伪狂犬病病毒变异株TK/gE/gI三基因缺失突变株在小鼠体内的免疫原性
发布时间：2021-12-02 20:01
应用PCR方法扩增了猪伪狂犬病病毒（PRV）NY株TK基因两侧序列,克隆至pUC-19载体,同时插入绿色荧光蛋白标记基因,构建转移质粒pUC-TKLRE,并与PRV变异株gE/gI双基因缺失突变株rPRV NY-gE-/gI-的基因组DNA共转染ST细胞,通过蚀斑纯化,获得表达荧光蛋白的PRV三基因缺失突变株。分别用PRV三基因缺失突变株、rPRV NY-gE-/gI-、PRV商品活疫苗Bartha-K61株、DMEM细胞培养液免疫6周龄雌性小鼠,2周后对小鼠进行第2次免疫,且首免后6周用PRV强毒NY株对小鼠进行攻毒试验。结果显示,成功拯救PRV三基因缺失突变株rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+,且对小鼠是安全的。间接ELISA试验和病毒中和试验证实rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+使小鼠机体...
【文章来源】：中国兽医学报. 2020,40(10)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
PRV三基因缺失株rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+的构建示意图
应用间接ELISA检测方法对每周采集的各组小鼠血清进行PRV抗体检测,所测得的数据使用GraphPad Prism 6.0绘制成折线图并计算P值,结果如图2所示,第1次免疫7 d后Bartha-K61(B组)和rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+(C组)已有效地刺激小鼠产生了抗PRV的抗体(P<0.001);之后Bartha-K61免疫组(B组)和rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+免疫组(C组)抗体水平均保持稳定升高,在整个试验过程rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+免疫组(C组)抗体水平略高于Bartha-K61免疫组(B组),但两组抗体水平差异并不显著(P>0.05)。DMEM免疫组并未刺激小鼠产生PRV抗体。2.5 血清中和试验检测PRV抗体结果
通过流式细胞技术检测小鼠外周血T淋巴细胞亚群的分布情况,所测得的数据使用GraphPad Prism 6.0绘制成柱状图并计算P值。由图3可见,与DMEM免疫的对照组(A组)相比,Bartha-K61(B组)和rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+(C组)免疫的试验组小鼠的外周血T淋巴细胞亚类CD3+、CD4+和CD8+的数量较多,且rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+(C组)免疫组的T淋巴细胞亚类CD3+、CD4+和CD8+的数量最多。2.7 攻毒保护试验
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪伪狂犬病病毒流行株gE/gI双基因缺失突变株的构建及纯化[J]. 张宇,郑慧华,田润博,赵宇,徐朋丽,韩昊莹,张鸿鑫,崔建涛,陈红英. 中国兽医学报. 2020(02)
[2]云南省某规模化猪场不同日龄猪伪狂犬病病毒抗体的检测[J]. 杨依波,高洪,严玉霖,赵汝,景麟稀,单春兰,刘超英. 黑龙江畜牧兽医. 2019(06)
[3]猪伪狂犬病疫苗的研究现状与展望[J]. 李国新,童光志. 中国预防兽医学报. 2018(09)
[4]猪伪狂犬病病毒流行毒株gE/gI缺失突变株的构建及生物学特性研究[J]. 潘慧,李艳华,向柯宇,唐栋,程珍珠,罗永文,琚春梅. 华南农业大学学报. 2018(02)
[5]猪伪狂犬病的诊断与净化方案的建立[J]. 文双云,李国江,沙万里,刘东旭,闫满,卢松岩,王喜伟. 黑龙江畜牧兽医. 2018(01)
[6]猪伪狂犬病病毒河南株的分离及鉴定[J]. 潘鑫龙,高晓云,张宇,杨兴武,杨明凡,崔保安,陈红英. 中国兽医学报. 2017(06)
[7]猪伪狂犬病毒变异株（Fujian-LY）对免疫仔猪的致病性研究[J]. 范克伟,戴爱玲,吴德峰,方来杉,黄元华,黄思琼,杨小燕. 中国兽医学报. 2015(11)
[8]免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定[J]. 童武,张青占,郑浩,刘飞,姜一峰,单同领,周艳君,童光志. 中国动物传染病学报. 2013(03)
[9]猪伪狂犬病病毒新流行株的分离鉴定及抗原差异性分析[J]. 彭金美,安同庆,赵鸿远,刘益民,陈家锃,冷超粮,孙艳,常丹,田志军,童光志. 中国预防兽医学报. 2013(01)
[10]猪伪狂犬病病毒间接ELISA检测方法的建立[J]. 折尕才措. 动物医学进展. 2012(09)
本文编号：3529105
【文章来源】：中国兽医学报. 2020,40(10)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
PRV三基因缺失株rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+的构建示意图
应用间接ELISA检测方法对每周采集的各组小鼠血清进行PRV抗体检测,所测得的数据使用GraphPad Prism 6.0绘制成折线图并计算P值,结果如图2所示,第1次免疫7 d后Bartha-K61(B组)和rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+(C组)已有效地刺激小鼠产生了抗PRV的抗体(P<0.001);之后Bartha-K61免疫组(B组)和rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+免疫组(C组)抗体水平均保持稳定升高,在整个试验过程rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+免疫组(C组)抗体水平略高于Bartha-K61免疫组(B组),但两组抗体水平差异并不显著(P>0.05)。DMEM免疫组并未刺激小鼠产生PRV抗体。2.5 血清中和试验检测PRV抗体结果
通过流式细胞技术检测小鼠外周血T淋巴细胞亚群的分布情况,所测得的数据使用GraphPad Prism 6.0绘制成柱状图并计算P值。由图3可见,与DMEM免疫的对照组(A组)相比,Bartha-K61(B组)和rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+(C组)免疫的试验组小鼠的外周血T淋巴细胞亚类CD3+、CD4+和CD8+的数量较多,且rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+(C组)免疫组的T淋巴细胞亚类CD3+、CD4+和CD8+的数量最多。2.7 攻毒保护试验
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪伪狂犬病病毒流行株gE/gI双基因缺失突变株的构建及纯化[J]. 张宇,郑慧华,田润博,赵宇,徐朋丽,韩昊莹,张鸿鑫,崔建涛,陈红英. 中国兽医学报. 2020(02)
[2]云南省某规模化猪场不同日龄猪伪狂犬病病毒抗体的检测[J]. 杨依波,高洪,严玉霖,赵汝,景麟稀,单春兰,刘超英. 黑龙江畜牧兽医. 2019(06)
[3]猪伪狂犬病疫苗的研究现状与展望[J]. 李国新,童光志. 中国预防兽医学报. 2018(09)
[4]猪伪狂犬病病毒流行毒株gE/gI缺失突变株的构建及生物学特性研究[J]. 潘慧,李艳华,向柯宇,唐栋,程珍珠,罗永文,琚春梅. 华南农业大学学报. 2018(02)
[5]猪伪狂犬病的诊断与净化方案的建立[J]. 文双云,李国江,沙万里,刘东旭,闫满,卢松岩,王喜伟. 黑龙江畜牧兽医. 2018(01)
[6]猪伪狂犬病病毒河南株的分离及鉴定[J]. 潘鑫龙,高晓云,张宇,杨兴武,杨明凡,崔保安,陈红英. 中国兽医学报. 2017(06)
[7]猪伪狂犬病毒变异株（Fujian-LY）对免疫仔猪的致病性研究[J]. 范克伟,戴爱玲,吴德峰,方来杉,黄元华,黄思琼,杨小燕. 中国兽医学报. 2015(11)
[8]免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定[J]. 童武,张青占,郑浩,刘飞,姜一峰,单同领,周艳君,童光志. 中国动物传染病学报. 2013(03)
[9]猪伪狂犬病病毒新流行株的分离鉴定及抗原差异性分析[J]. 彭金美,安同庆,赵鸿远,刘益民,陈家锃,冷超粮,孙艳,常丹,田志军,童光志. 中国预防兽医学报. 2013(01)
[10]猪伪狂犬病病毒间接ELISA检测方法的建立[J]. 折尕才措. 动物医学进展. 2012(09)
本文编号：3529105
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