禽呼肠孤病毒σB和σC蛋白在昆虫细胞中的共表达

发布时间：2021-12-11 01:21

　　本研究旨在获得具有天然构象和活性良好的禽呼肠孤病毒（ARV）σB和σC蛋白,采用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中共表达σB和σC蛋白,并对其活性进行鉴定。根据NCBI数据库中ARVσB和σC基因序列设计引物,将两个基因克隆至pFast-Dual载体,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,筛选获得重组穿梭杆粒。通过转染sf9细胞,筛选到含有σB和σC基因的重组病毒。将重组病毒感染sf9细胞,通过优化接毒量和收获时间等参数,确定最佳表达条件,在sf9细胞中高效共表达σB和σC蛋白。Western blotting和间接免疫荧光（IFA）检测结果表明,成功在sf9细胞中共表达了ARVσB和σC蛋白,并具有很好的生物学活性。本试验结果为开发鉴别诊断试剂以及ARV颗粒疫苗的研究奠定了基础。 

【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(05)北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

ARV σB和σC基因序列扩增结果

重组质粒酶切结果

重组杆粒Bacmid-σB-σC PCR鉴定

【参考文献】：
期刊论文
[1]昆虫杆状病毒表达载体系统在疫苗研究中的应用进展[J]. 荣芮,李婷婷,张玉云,顾颖,夏宁邵,李少伟.  生物工程学报. 2019(04)
[2]PEDV分离株S1基因的重组杆状病毒真核表达[J]. 何海健,吴瑗,王鲁彦,李群景,巴少波,石林,邵春艳,孙静,姜胜,王晓杜.  中国畜牧兽医. 2019(03)
[3]禽呼肠孤病毒σB和σC蛋白二级结构及其细胞抗原表位预测[J]. 黄莉,谢芝勋,谢丽基,邓显文,谢志勤,范晴,罗思思,黄娇玲,曾婷婷,张艳芳,王盛.  中国畜牧兽医. 2016(11)
[4]禽呼肠孤病毒σ3基因在烟草中的表达与鉴定[J]. 王盛,谢芝勋,黄莉,谢丽基,邓显文,谢志勤,刘加波,罗思思,曾婷婷.  中国农业科学. 2015(09)
[5]兽用基因工程疫苗的研究现状及其生物安全性问题[J]. 王青,胡建和,杭柏林,计红芳.  中国畜牧兽医. 2012(05)
[6]安徽省禽呼肠孤病毒感染的血清学调查[J]. 赵圆圆,黄晓慧,王蓓,王汉清,孙裴,李郁,魏建忠,王桂军.  中国微生态学杂志. 2011(09)
[7]禽呼肠孤病毒σC基因在杆状病毒表达系统中的表达及其活性鉴定[J]. 孙美玉,秦立廷,高玉龙,祁小乐,高宏雷,王永强,王笑梅.  病毒学报. 2011(04)
[8]禽呼肠孤病毒σ2基因的真核表达及其免疫效果研究[J]. 邓显文,谢芝勋,谢丽基,谢志勤,刘加波,庞耀珊.  湖南农业科学. 2011(01)
[9]应用禽呼肠孤病毒σ3融合蛋白为抗原的ELISA检测方法的建立[J]. 谢芝勋,秦宇,谢丽基,刘加波,邓显文,庞耀珊,谢志勤,唐小飞.  畜牧与兽医. 2007(11)
[10]禽呼肠孤病毒σ2基因的克隆和表达[J]. 邓显文,谢芝勋,刘加波,庞耀珊,唐小飞.  中国兽医学报. 2006(02)

硕士论文
[1]禽呼肠孤病毒感染流行病学调查与广西地方分离株S1基因的测序和克隆[D]. 李斌.广西大学 2004



本文编号：3533750