不同克隆效率水牛体细胞染色质开放度与ATP含量的初步分析
发布时间：2021-12-11 07:10
水牛体细胞克隆是良种水牛快速扩繁的一种有效技术手段,但因其效率较低,尚无法推广应用。研究表明,来自不同水牛个体细胞的克隆效率存在明显差异,但导致这种差异的机理尚不清楚。体细胞的克隆效率主要取决于其重编程的效率,而重编程的效率可能与细胞的染色质开放度和重塑难易程度密切相关。为此,本研究拟通过比较不同克隆效率细胞系的染色质重塑相关基因表达、染色质开放程度和转录水平的差异,并探讨ATP含量对染色质重塑相关基因表达的影响,以便初步探明不同个体水牛体细胞克隆效率差异的机制,为提高水牛体细胞克隆效率奠定基础。研究取得如下结果:1.不同克隆效率的水牛体细胞特征分析选择本实验室建立的克隆效率存在明显差异的2个水牛胎儿体细胞系(克隆效率较高的BFF3和克隆效率较低的BFF1),分析它们之间的染色质重塑SWI/SNF ATP依赖性的核心酶基因SMARCA4表达差异。结果发现,BFF1中SMARCA4表达水平显著低于BFF3(P<0.05)。两株细胞的生长特征检测发现,在对数期的增殖速度并无明显差异,平台期后的BFF1细胞增殖速度低于BFF3;接触抑制后,两株细胞G0/G1期所占比例分别为90.75%...
【文章来源】： 广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：75 页
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩写-中文对照表
第一章 文献综述
1.1 动物体细胞克隆技术研究进展
1.1.1 影响体细胞克隆效率的因素
1.2 表观遗传修饰的重编程研究进展
1.2.1 组蛋白修饰
1.2.2 DNA甲基化
1.2.3 染色质重塑
1.3 细胞重编程中的能量代谢
1.3.1 氧化磷酸化途径
1.3.2 糖酵解途径
1.4 高通量测序技术
1.4.1 转录组测序技术
1.4.2 染色质可及性高通量测序(ATAC-seq)
1.5 研究目的及意义
第二章 不同克隆效率水牛体细胞染色质开放度及转录水平分析
前言
2.1 试验材料
2.2 试验方法
2.3 结果
2.3.1 不同克隆效率细胞SMARCA4基因表达分析
2.3.2 不同克隆效率细胞生长曲线的绘制
2.3.3 不同克隆效率细胞周期分析
2.3.4 GO/G1期细胞SWI/SNF家族基因的表达分析
2.3.5 BFF1、BFF3细胞ATAC-seq分析
2.3.6 染色质开放度分析
2.3.7 RNA-seq分析
2.4 分析讨论
2.5 小结
第三章 ATP含量对不同克隆效率细胞SWI/SNF家族主要基因表达的影响
前言
3.1 试验材料
3.2 试验方法
3.3 结果
3.3.1 鱼藤酮对细胞增殖的影响
3.3.2 鱼藤酮处理对细胞凋亡的影响
3.3.3 鱼藤酮处理对细胞线粒体膜电位的影响
3.3.4 鱼藤酮处理对细胞ATP含量的影响
3.3.5 鱼藤酮处理对细胞SWI/SNF家族特定基因表达的影响
3.3.6 2-DG处理细胞ATP含量的检测
3.3.7 2-DG处理细胞对SWI/SNF家族基因表达的影响
3.4 分析与讨论
3.5 小结
全文总结
参考文献
致谢
发表论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]转录组测序的发展和应用 [J]. 王楚彪,卢万鸿,林彦,罗建中. 桉树科技. 2018(04)
[2]22-脱氧葡萄糖通过激活AMPK通路抑制类风湿关节炎血管新生 [J]. 王颖,韦颖梅,程秀,孙小锦,马琳艳,宋宜宁,周静,魏芳,刘浩. 南方医科大学学报. 2018(08)
[3]SWI/SNF复合物相关基因在肿瘤中的研究进展 [J]. 贾彩虹,陈吉. 世界最新医学信息文摘. 2018(45)
[4]表观遗传学研究进展 [J]. 丁勇,许超,吴季辉,施蕴渝,臧建业,蔡刚. 中国科学:生命科学. 2017(01)
[5]精子的表观遗传学与胚胎发育关系的研究进展 [J]. 何燕芳,马洁桦,潘连军,黄宇烽. 中华男科学杂志. 2014(08)
[6]供体细胞形态、直径和传代次数对猪体细胞核移植效果的影响 [J]. 黄雅琼,石德顺,陈旭健,李家洲,曾诗媛,詹萍,阮桂文,赵仕花. 中国兽医科学. 2011(05)
[7]表观遗传学研究进展 [J]. 李光雷,喻树迅,范术丽,宋美珍,庞朝友. 生物技术通报. 2011(01)
[8]完整的供体细胞膜及供体胞质对小鼠体细胞克隆胚发育的影响 [J]. 王二耀,于洋,李雪梅,焦丽红,周琪,王柳. 遗传. 2007(02)
[9]Production of transgenic blastocyst by nuclear transfer from different types of somatic cells in cattle [J]. GONG Guochun1, DAI Yunping1, FAN Baoliang1, ZHU Huabing2, WANG Haiping3, WANG Lili1, FANG Changge1, WAN Rong3, LIU Ying3, LI Rong3 & LI Ning1 1. State Key Laboratory for Agrobiotechnology, China Agricultural University, Beijing 100094, China; 2. Institute of Animal Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100094, China; 3. Gentitan Biotechnology Ltd., Beijing 100084, China. Science in China(Series C:Life Sciences). 2004(02)
[10]利用核移植技术生产人类疾病大鼠模型的研究 [J]. 周琪. 中国科学院院刊. 2003(06)
博士论文
[1]水牛供体细胞性别对其核移植胚胎发育及印记基因甲基化的影响[D]. 阮子芸.广西大学. 2017
[2]牛体细胞克隆中异常重编程的分析及提高重编程效率的研究[D]. 苏建民.西北农林科技大学. 2012
硕士论文
[1]鸡卵泡体细胞转录组研究及芳香化酶基因调控分析[D]. 景若曦.华中农业大学. 2018
[2]牛体外受精及显微注射的研究[D]. 张纬.内蒙古农业大学. 2016
[3]SWI/SNF染色质重塑复合物的不同组分在人类胚胎干细胞中的功能研究[D]. 李兵.华东师范大学. 2013
本文编号：3534234
【文章来源】： 广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：75 页
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩写-中文对照表
第一章 文献综述
1.1 动物体细胞克隆技术研究进展
1.1.1 影响体细胞克隆效率的因素
1.2 表观遗传修饰的重编程研究进展
1.2.1 组蛋白修饰
1.2.2 DNA甲基化
1.2.3 染色质重塑
1.3 细胞重编程中的能量代谢
1.3.1 氧化磷酸化途径
1.3.2 糖酵解途径
1.4 高通量测序技术
1.4.1 转录组测序技术
1.4.2 染色质可及性高通量测序(ATAC-seq)
1.5 研究目的及意义
第二章 不同克隆效率水牛体细胞染色质开放度及转录水平分析
前言
2.1 试验材料
2.2 试验方法
2.3 结果
2.3.1 不同克隆效率细胞SMARCA4基因表达分析
2.3.2 不同克隆效率细胞生长曲线的绘制
2.3.3 不同克隆效率细胞周期分析
2.3.4 GO/G1期细胞SWI/SNF家族基因的表达分析
2.3.5 BFF1、BFF3细胞ATAC-seq分析
2.3.6 染色质开放度分析
2.3.7 RNA-seq分析
2.4 分析讨论
2.5 小结
第三章 ATP含量对不同克隆效率细胞SWI/SNF家族主要基因表达的影响
前言
3.1 试验材料
3.2 试验方法
3.3 结果
3.3.1 鱼藤酮对细胞增殖的影响
3.3.2 鱼藤酮处理对细胞凋亡的影响
3.3.3 鱼藤酮处理对细胞线粒体膜电位的影响
3.3.4 鱼藤酮处理对细胞ATP含量的影响
3.3.5 鱼藤酮处理对细胞SWI/SNF家族特定基因表达的影响
3.3.6 2-DG处理细胞ATP含量的检测
3.3.7 2-DG处理细胞对SWI/SNF家族基因表达的影响
3.4 分析与讨论
3.5 小结
全文总结
参考文献
致谢
发表论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]转录组测序的发展和应用 [J]. 王楚彪,卢万鸿,林彦,罗建中. 桉树科技. 2018(04)
[2]22-脱氧葡萄糖通过激活AMPK通路抑制类风湿关节炎血管新生 [J]. 王颖,韦颖梅,程秀,孙小锦,马琳艳,宋宜宁,周静,魏芳,刘浩. 南方医科大学学报. 2018(08)
[3]SWI/SNF复合物相关基因在肿瘤中的研究进展 [J]. 贾彩虹,陈吉. 世界最新医学信息文摘. 2018(45)
[4]表观遗传学研究进展 [J]. 丁勇,许超,吴季辉,施蕴渝,臧建业,蔡刚. 中国科学:生命科学. 2017(01)
[5]精子的表观遗传学与胚胎发育关系的研究进展 [J]. 何燕芳,马洁桦,潘连军,黄宇烽. 中华男科学杂志. 2014(08)
[6]供体细胞形态、直径和传代次数对猪体细胞核移植效果的影响 [J]. 黄雅琼,石德顺,陈旭健,李家洲,曾诗媛,詹萍,阮桂文,赵仕花. 中国兽医科学. 2011(05)
[7]表观遗传学研究进展 [J]. 李光雷,喻树迅,范术丽,宋美珍,庞朝友. 生物技术通报. 2011(01)
[8]完整的供体细胞膜及供体胞质对小鼠体细胞克隆胚发育的影响 [J]. 王二耀,于洋,李雪梅,焦丽红,周琪,王柳. 遗传. 2007(02)
[9]Production of transgenic blastocyst by nuclear transfer from different types of somatic cells in cattle [J]. GONG Guochun1, DAI Yunping1, FAN Baoliang1, ZHU Huabing2, WANG Haiping3, WANG Lili1, FANG Changge1, WAN Rong3, LIU Ying3, LI Rong3 & LI Ning1 1. State Key Laboratory for Agrobiotechnology, China Agricultural University, Beijing 100094, China; 2. Institute of Animal Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100094, China; 3. Gentitan Biotechnology Ltd., Beijing 100084, China. Science in China(Series C:Life Sciences). 2004(02)
[10]利用核移植技术生产人类疾病大鼠模型的研究 [J]. 周琪. 中国科学院院刊. 2003(06)
博士论文
[1]水牛供体细胞性别对其核移植胚胎发育及印记基因甲基化的影响[D]. 阮子芸.广西大学. 2017
[2]牛体细胞克隆中异常重编程的分析及提高重编程效率的研究[D]. 苏建民.西北农林科技大学. 2012
硕士论文
[1]鸡卵泡体细胞转录组研究及芳香化酶基因调控分析[D]. 景若曦.华中农业大学. 2018
[2]牛体外受精及显微注射的研究[D]. 张纬.内蒙古农业大学. 2016
[3]SWI/SNF染色质重塑复合物的不同组分在人类胚胎干细胞中的功能研究[D]. 李兵.华东师范大学. 2013
本文编号：3534234
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