检测日本脑炎病毒移码蛋白抗体的间接ELISA方法的建立及应用

发布时间：2021-12-11 09:48

　　日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）是一种单股正链RNA病毒,可以引起公猪睾丸炎和母猪流产,是一种人畜共患病病毒,蚊子叮咬带毒猪后可将病毒传播给人。JEV主要蛋白有核心蛋白C,膜蛋白PrM/M和囊膜蛋白E,以及（NS1,NS2A,NS2B,NS3,NS4A,NS4B和NS5）七个非结构蛋白。NS2A基因在翻译过程中会因为核糖体-1移码产生衍生物,与NS1蛋白C端融合,产生NS1’蛋白。JEV致弱株SA14-14-2由于NS2A基因的66位核苷酸由G变为A,无法形成核糖体移码所需的结构,因此失去了产生NS1’的能力。理论上NS1’抗体是JEV野毒感染的特征指标。本研究利用人工合成的纯度为95%的NS1’44aa建立检测猪日本脑炎病毒抗体的间接ELISA方法,并对华东地区2013年的猪群进行血清流行病学调查。同时,根据临床检测数据和实验室动物模型对NS1’多肽的检测对象进行分析,通过基因重组技术获得重组EDⅢ和Cap串联蛋白,利用制备的EDⅢ多克隆抗体和Cap多克隆抗体对串联蛋白进行鉴定。发现其与Cap蛋白存在交叉表位。具体内容如下：1.检测猪血... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：123 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文献综述
    第一章 日本脑炎病毒NS1’蛋白的研究进展
        1 概况
            1.1 乙脑病毒
            1.2 乙脑流行情况
            1.3 流行病学
            1.4 致病机制
            1.5 临床症状
            1.6 损伤
            1.7 诊断
            1.8 免疫
            1.9 防控措施
        2 病毒基因组及病毒蛋白
            2.1 病毒基因组
            2.2 病毒的生命周期
            2.3 病毒结构蛋白
            2.4 病毒非结构蛋白
        3 流行病学调查
            3.1 分子流行病学调查
            3.2 血清流行病学调查
        参考文献
第二篇 研究内容
    第一章 检测猪血清中日本脑炎病毒移码蛋白抗体的间接ELISA检测方法的建立与应用
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 间接ELISA方法反应条件优化
            2.2 猪乙脑血清流行病学调查
        3 讨论
        参考文献
    第二章 日本脑炎病毒核心蛋白基因与EDⅢ基因串联表达与鉴定
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 Cap基因扩增
            2.2 重组质粒pET32a-Cap-a双酶切鉴定
            2.3 重组质粒pET32a-Cap-b双酶切鉴定
            2.4 重组质粒pET32a-Cap-a及pET32a-Cap-b序列测定
            2.5 重组Cap-a蛋白及重组Cap-b蛋白的SDS-PAGE电泳结果
            2.6 重组Cap-b蛋白的可溶性鉴定
            2.7 重组Cap-b蛋白的纯化
            2.8 Cap多克隆抗体的纯化
            2.9 IFA鉴定Cap多克隆抗体
            2.10 重组EDⅢ蛋白的诱导及可溶性鉴定
            2.11 重组EDⅢ蛋白的纯化
            2.12 切胶制备的EDⅢ免疫原
            2.13 EDⅢ多克隆抗体的纯化
            2.14 IFA鉴定EDⅢ多克隆抗体
            2.15 EDⅢ-Cap基因扩增
            2.16 重组质粒pET28a-EDⅢ-Cap双酶切鉴定
            2.17 EDⅢ-Cap基因序列测定
            2.18 重组EDⅢ-Cap蛋白的SDS-PAGE电泳结果
            2.19 重组EDⅢ-Cap蛋白的一步复性纯化
            2.20 重组EDⅢ-Cap蛋白的WB鉴定
        3 讨论
        参考文献
    第三章 日本脑炎病毒NS1’蛋白与核心蛋白交叉表位的分析
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 NS1’间接ELISA方法与商品化试剂盒的符合率试验
            2.2 NS1’间接ELISA检测方法在小鼠模型上的检测效果
            2.3 NS1’44a多肽的同源性分析结果
            2.4 Cap蛋白与NS1’潜在交叉表位的实验验证
        3 讨论
        参考文献
全文总结
附录 常用试剂的配制
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]西尼罗河病毒病竞争ELISA检测方法的初步建立及应用[J]. 常娓娓,王淑娟,吴晓东,刘华雷,赵永刚,王志亮.  中国动物检疫. 2011(09)
[2]猪乙脑RT-PCR快速诊断方法的建立[J]. 冯永胜,江科,衣服德.  山东畜牧兽医. 2011(05)
[3]猪乙型脑炎间接ELISA与血凝抑制试验方法的比较[J]. 贾杏林,陈焕春,王祥,何启盖,吴斌.  中国畜牧兽医. 2011(02)
[4]乙脑病毒RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 高正琴,岳秉飞,贺争鸣.  药物分析杂志. 2010(10)
[5]流行性乙型脑炎病毒一步法RT-LAMP检测方法的建立[J]. 杜鹃,宋永,刘立科,华荣虹.  中国预防兽医学报. 2010(10)
[6]乙型脑炎病毒（JEV）ELISA检测方法的建立[J]. 王吉,卫礼,巩薇,高正琴,岳秉飞,贺争鸣.  中国比较医学杂志. 2010(08)
[7]检测猪乙型脑炎病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用[J]. 沈婷,周斌,陈溥言.  畜牧与兽医. 2010(04)
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[10]乙脑病毒嵌套式RT-PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 高正琴,贺争鸣,邢瑞昌,卫礼,王吉.  中国人兽共患病杂志. 2005(04)

博士论文
[1]乙型脑炎病毒分子流行病学、诊断及重组疫苗研究[D]. 刘昊.吉林大学 2013

硕士论文
[1]猪乙型脑炎病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制及猪源乙型脑炎病毒的分离鉴定[D]. 黄少梅.华中农业大学 2013
[2]乙型脑炎病毒双抗体夹心ELISA抗原检测方法的建立与应用[D]. 梅力.华中农业大学 2012
[3]猪流行性乙型脑炎病毒间接ELISA抗体检测试剂盒的研究[D]. 钟泽栋.四川农业大学 2012
[4]猪流行性乙型脑炎双抗夹心ELISA方法的建立与试剂盒的制备[D]. 张宁.吉林大学 2011
[5]猪乙型脑炎病毒RT-PCR检测方法的建立及乙脑病毒四川分离株PrM/E基因的序列分析[D]. 王伟杰.四川农业大学 2010
[6]猪乙型脑炎病毒检测方法的建立[D]. 崔奕杰.河北农业大学 2006



本文编号：3534459