磁性介孔硅纳米探针的构建及其在新城疫病毒检测中的研究
发布时间：2021-12-12 02:17
新城疫（Newcastle disease,ND）也称为亚洲鸡瘟或伪鸡瘟,是由新城疫病毒（Newcastle disease Virus,NDV）引起的一种急性、热性和高度接触性禽传染病。新城疫主要特征为呼吸困难、神经症状及浆膜和黏膜出血。近年来,检测NDV的方法不断更新,但规模化养殖模式需要更灵敏或更快捷的检测技术检测NDV的早期感染,以便更好地防控NDV。传统的NDV检测方法主要包括病原的分离与培养鉴定、PCR（Polymerase chain reaction）、LAMP（Loop-mediated Isothermal Amplification）及 ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）等技术。这些检测技术各有其优缺点:病原学诊断方法为检测NDV的金标准,但检测时间长、成本高。PCR技术灵敏度高,但需要对样品进行核酸提取,对实验人员技术要求高,样品易污染。LAMP是一种等温扩增技术,但其扩增效率低,灵敏度与PCR相差甚远,还没有被广泛认可。ELISA是用酶联抗体与底物放大信号的技术,灵敏度较高,易于进行大批量样本检测,但由于其需要几步...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１不同形状的磁性纳米颗粒／二氧化硅介孔材料纳米复合材料２３??
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ＥＩ的量。??２＿３．４?ＰＥＩ／ＰＯＤ／Ｍ－ＭＳＮ?的?ＴＥＭ?表征方法??由于原本的Ｍ－ＭＳＮ为带有空隙的介孔材质，而包裹了?ＰＥＩ的ＰＯＤ／Ｍ－ＭＳＮ??纳米颗粒会由于ＰＥＩ的包封原因，将Ｍ－ＭＳＮ原本的孔隙封锁，在电镜下会看到??无介孔状态的纳米粒子，将准备好的样品（Ｍ－ＭＳＮ、ＰＯＤ／Ｍ－ＭＳＮ／ＰＥＩ）制样后??于电镜下观察，具体制样过程同第一章２．１．１。??２．４抗体（Ａｂ）与单链核酸（ｓｓＤＮＡ）的合成方法??Ｙ??Ａｎｔｉ－ＮＤＶ?Ａｂ??Ｎ３??广丨??图２－２抗体链接ｓｓＤＮＡ的原理示意图??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｏｆ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ｌｉｎｋｅｄ?ｓｓＤＮＡ??抗体的本质为蛋白质，蛋白质上有许多的氨基与羧基。利用抗体分子表面的??化学基团进行ｓｓＤＮＡ的连结己经非常常见。叠氮化合物（Ａｚｉｄｏ－ｄＰＥＧ４－ＮＨＳ?ｅｓｔｅｒ）??是一种水脂双溶性的交联试剂，其一端为ＮＨＳ酯基团，可通过形成酰胺键与交??联分子的氨基反应；另一端为叠氮官能团，常见于点击化学反应中，其通过铜离??子催化的环化加成反应与炔烃进行偶联。本实验通过抗体分子上氨基与叠氮化合??物结合而后叠氮化合物与ＤＮＡ分子上炔基结合的两步交联反应以生成抗体核酸??偶联物。??１８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]上转换介孔二氧化硅多功能肝癌诊疗纳米复合体系的构建[J]. 杨涵,陈星濛,高俊潇,武晓丽,常津. 生物医学工程研究. 2019(01)
[2]鸡新城疫病临床表现及诊治[J]. 张小翠,刘钊辉. 中国畜禽种业. 2019(02)
[3]新城疫病毒M蛋白通过自身核定位信号介导进入宿主细胞核[J]. 段云兵,汪军卿,仇旭升,谭磊,丁铲,张源淑. 南京农业大学学报. 2014(02)
[4]实时荧光定量PCR的原理及应用研究进展[J]. 尹兵. 科技信息. 2010(17)
[5]利用RNAi技术靶向新城疫病毒P基因抑制其在鸡胚成纤维细胞上的复制[J]. 母连志,丁壮,丛彦龙,尹仁福,刘美,王昌庆,李少丽,邱蜜蜜. 中国兽医学报. 2009(07)
[6]新城疫病毒检测技术研究进展[J]. 刘宇,徐春志,岳筠,陈红. 畜牧兽医科技信息. 2007(08)
[7]新城疫诊断技术研究进展[J]. 温文彦,王臣,张玉慧. 安徽农学通报. 2006(05)
[8]应用新城疫诊断试剂盒快速诊断非典型鸡新城疫的研究[J]. 吴长新,张之文,徐福亮,刘慧谋,华世金,张如宽,刘秀梵. 江苏农学院学报. 1997(01)
[9]琼脂扩散试验检测鸡新城疫抗体的研究[J]. 韦玉珠. 动物检疫. 1991(05)
[10]应用离子交换捕捉电镜技术对几种动物类冠病毒形态的观察[J]. 李成. 病毒学杂志. 1988(04)
本文编号：3535821
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１不同形状的磁性纳米颗粒／二氧化硅介孔材料纳米复合材料２３??
?第一章Ｍ－ＭＳＮ纳米探针的制备与表征???Ｍ－ＭＳＮ?ＰＯＤ／Ｍ－ＭＳＮ?ＰＯＤ／Ｍ－ＭＳＮ／ＰＥＩ?ＰＯＤ／Ｍ－ＭＳＮ／ＰＥＩ／Ａｂ－ＤＮＡ??ｂ＿待检海病原?＿納米探针??Ｉ病原－抗?４?＃?（＇、镰??孵育?—＜?孵宵??洗板＆?洗板??争?：：：：：ｖ?ｆ?＾?＾??Ｙ?Ｙ?Ｙ?？?？?？?■?ｆ?ｆ?ｆ??￣洗板??加入ＴＭＢ洛液??ｖｔ?＾?＾?终止?５?－?显色?４?＾??ｆ?ｆ?ｆ?Ｙ?＾?ｙ?ｉ?＾?＾?＾??黄色?蓝色??图２－１纳米免疫探针设计原理图（ａ）及其应用原理图（ｂ）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｎａｎｏ－ｉｍｍｕｎｅ?ｐｒｏｂｅ?（ａ）?ａｎｄ?ｉｔｓ?ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ?ｉｎ?ＥＬＩＳＡ?（ｂ）??１、实验材料与设备仪器??ｉ．ｉ主要试剂和耗材??表２－１主要试剂和耗材??Ｔａｂｌｅ?２－１?Ｍａｉｎ?ｒｅａｇｅｎｔｓ?ａｎｄ?ｃｏｎｓｕｍａｂｌｅｓ??试剂名称?购买公司???磁性介孔二氧化硅纳米颗粒?上海羧菲生物医药科技有限公司??过氧化物酶?北京索莱宝科技有限公司??聚乙烯亚胺?赛默飞世尔科技公司??新城疫单克隆抗体?北京博奥森生物技术有限公司??单链ＤＮＡ?北京全式金生物公司??叠氮化合物?西安瑞禧生物科技有限公司??盐酸胍?合肥白鲨生物科技有限公司???１０??
ＥＩ的量。??２＿３．４?ＰＥＩ／ＰＯＤ／Ｍ－ＭＳＮ?的?ＴＥＭ?表征方法??由于原本的Ｍ－ＭＳＮ为带有空隙的介孔材质，而包裹了?ＰＥＩ的ＰＯＤ／Ｍ－ＭＳＮ??纳米颗粒会由于ＰＥＩ的包封原因，将Ｍ－ＭＳＮ原本的孔隙封锁，在电镜下会看到??无介孔状态的纳米粒子，将准备好的样品（Ｍ－ＭＳＮ、ＰＯＤ／Ｍ－ＭＳＮ／ＰＥＩ）制样后??于电镜下观察，具体制样过程同第一章２．１．１。??２．４抗体（Ａｂ）与单链核酸（ｓｓＤＮＡ）的合成方法??Ｙ??Ａｎｔｉ－ＮＤＶ?Ａｂ??Ｎ３??广丨??图２－２抗体链接ｓｓＤＮＡ的原理示意图??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｏｆ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ｌｉｎｋｅｄ?ｓｓＤＮＡ??抗体的本质为蛋白质，蛋白质上有许多的氨基与羧基。利用抗体分子表面的??化学基团进行ｓｓＤＮＡ的连结己经非常常见。叠氮化合物（Ａｚｉｄｏ－ｄＰＥＧ４－ＮＨＳ?ｅｓｔｅｒ）??是一种水脂双溶性的交联试剂，其一端为ＮＨＳ酯基团，可通过形成酰胺键与交??联分子的氨基反应；另一端为叠氮官能团，常见于点击化学反应中，其通过铜离??子催化的环化加成反应与炔烃进行偶联。本实验通过抗体分子上氨基与叠氮化合??物结合而后叠氮化合物与ＤＮＡ分子上炔基结合的两步交联反应以生成抗体核酸??偶联物。??１８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]上转换介孔二氧化硅多功能肝癌诊疗纳米复合体系的构建[J]. 杨涵,陈星濛,高俊潇,武晓丽,常津. 生物医学工程研究. 2019(01)
[2]鸡新城疫病临床表现及诊治[J]. 张小翠,刘钊辉. 中国畜禽种业. 2019(02)
[3]新城疫病毒M蛋白通过自身核定位信号介导进入宿主细胞核[J]. 段云兵,汪军卿,仇旭升,谭磊,丁铲,张源淑. 南京农业大学学报. 2014(02)
[4]实时荧光定量PCR的原理及应用研究进展[J]. 尹兵. 科技信息. 2010(17)
[5]利用RNAi技术靶向新城疫病毒P基因抑制其在鸡胚成纤维细胞上的复制[J]. 母连志,丁壮,丛彦龙,尹仁福,刘美,王昌庆,李少丽,邱蜜蜜. 中国兽医学报. 2009(07)
[6]新城疫病毒检测技术研究进展[J]. 刘宇,徐春志,岳筠,陈红. 畜牧兽医科技信息. 2007(08)
[7]新城疫诊断技术研究进展[J]. 温文彦,王臣,张玉慧. 安徽农学通报. 2006(05)
[8]应用新城疫诊断试剂盒快速诊断非典型鸡新城疫的研究[J]. 吴长新,张之文,徐福亮,刘慧谋,华世金,张如宽,刘秀梵. 江苏农学院学报. 1997(01)
[9]琼脂扩散试验检测鸡新城疫抗体的研究[J]. 韦玉珠. 动物检疫. 1991(05)
[10]应用离子交换捕捉电镜技术对几种动物类冠病毒形态的观察[J]. 李成. 病毒学杂志. 1988(04)
本文编号：3535821
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