鹅GATA-4l-6基因克
发布时间：2021-12-12 06:28
GATA家族是能与核酸共同序列（A/T）GATA（A/G）相结合的转录因子,包括6个成员,即GATA-1,-2,-3,-4,-5,-6.目前研究表明,GATA家族中只有GATA-4和GATA-6在卵巢中共表达,GATA-4与人、小鼠、猪等的卵巢颗粒细胞增殖、分化、凋亡以及卵泡闭锁等关系密切；但有关GATA-6在卵巢中的功能还未知。目前有关探讨GATA-4和GATA-6在鹅卵巢功能的研究还未报道。本文以天府肉鹅母系为试验材料,从分子水平研究了鹅GATA-4和GATA-6基因的结构差异性,并检测GATA-4和GATA-6 mRNA在三种不同类型的卵泡以及不同等级卵泡中的表达量,探讨GATA-4和GATA-6在卵泡发育中的作用；其次通过构建GATA-4真核表达载体,培养鹅颗粒细胞,分析过表达GATA-4基因后,对下游靶基因、类固醇合成、颗粒细胞增殖的影响,初步探讨GATA-4在鹅卵泡颗粒细胞中的作用；最后通过药物25-羟基胆固醇（25-hydroxycholesterol）构建颗粒细胞凋亡模型,分析诱导凋亡后,过表GATA-4抵制药物对可颗粒细胞凋亡的能力,和平衡药物抑制颗粒细胞生成类固醇的...
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
常用词语英文缩写
前言
1 文献综述
1.1 GATA家族简介
1.2 GATA家族在内分泌组织中的作用
1.2.1 下丘脑和垂体(Hypothalamus and Pituitary)
1.2.2 胎盘(Placenta)
1.2.3 甲状腺和甲状旁腺(Thyroid and Parathyroid)
1.2.4 胰腺(Pancreas)
1.2.5 睾丸(Testis)
1.3 GATA家族在生殖系统中的作用
1.3.1 调控下游靶基因
1.3.2 激素负反馈调节GATA
1.3.3 性别决定和分化的作用
1.4 卵巢GATA-4和GATA-6功能研究
1.4.1 GATA-4和GATA-6定位研究
1.4.2 GATA-4信号途径
1.4.3 GATA-4靶基因
1.5 有关GATA-6研究总结
1.6 本研究的目的意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 样品的采集
2.1.2 主要试剂及试剂盒
2.1.3 主要试剂配制
2.1.4 主要仪器设备
2.1.5 应用的生物学软件
2.2 试验方法
2.2.1 总RNA提取及引物设计
2.2.2 GATA-4和GATA-6片段的克隆及序列测定
2.2.3 GATA-4真核表达载体构建及鉴定
2.2.4 颗粒细胞原代培养
2.2.5 GATA-4真核表达载体瞬时转染鹅颗粒细胞
2.2.6 25-hydroxycholesterol诱导颗粒细胞凋亡
2.2.7 细转染GATA-4抵抗25-hydroxycholesterol毒性
2.2.8 实时荧光定量PCR
3 结果与分析
3.1 鹅GATA-4和GATA-6编码区序列克隆与分析
3.1.1 卵巢RNA提取结果
3.1.2 PCR扩增结果
3.1.3 编码区序列拼接
3.2 鹅GATA-4和GATA-6编码区序列分析
3.2.1 GATA-4和GATA-6编码区氨基酸序列分析
3.2.2 鹅GATA-4和GATA-6蛋白结构域分析
3.3 鹅GATA-4和GATA-6表达模式
3.3.1 鹅GATA-4和GATA-6在3种类型的卵泡中表达情况
3.3.2 鹅GATA-4和GATA-6在不同等级卵泡中的表达情况
3.4 GATA-4真核表达载体构建
3.4.1 GATA-4载体构建
3.4.2 GATA-4转染颗粒细胞及表达鉴定
3.4.3 转染GATA-4对下游靶基因影响及与颗粒细胞增殖关系
3.5 25HC诱导颗粒细胞凋亡鉴定
3.5.1 普通形态学观察
3.5.2 TURNEL绿色荧光鉴定凋亡细胞
3.5.3 检测类固醇通路上关键基因表达
3.6 过表达GATA-4缓解25HC诱导颗粒细胞凋亡和25HC降低类固醇生成
3.6.1 25HC处理细胞过表达GATA-4基因的表达量情况
3.6.2 过表达GATA-4可以抵御25HC诱导细胞凋亡的能力
3.6.3 过表达GATA-4平衡25HC抑制类固醇合成
4、讨论
4.1 鹅GATA-4和GATA-6分子结构差异
4.2 鹅GATA-4和GATA-6表达模式分析
4.3 25HC诱导颗粒细胞凋亡、抑制类固醇合成基因表达
4.4 过表达GATA-4促进颗粒细胞增殖、上调靶基因
4.5 过表达GATA-4缓解25HC诱导凋亡和25HC抑制类固醇生成
5 结论
参考文献
致谢
硕士研究生学习期间发表的论文
本文编号：3536172
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
常用词语英文缩写
前言
1 文献综述
1.1 GATA家族简介
1.2 GATA家族在内分泌组织中的作用
1.2.1 下丘脑和垂体(Hypothalamus and Pituitary)
1.2.2 胎盘(Placenta)
1.2.3 甲状腺和甲状旁腺(Thyroid and Parathyroid)
1.2.4 胰腺(Pancreas)
1.2.5 睾丸(Testis)
1.3 GATA家族在生殖系统中的作用
1.3.1 调控下游靶基因
1.3.2 激素负反馈调节GATA
1.3.3 性别决定和分化的作用
1.4 卵巢GATA-4和GATA-6功能研究
1.4.1 GATA-4和GATA-6定位研究
1.4.2 GATA-4信号途径
1.4.3 GATA-4靶基因
1.5 有关GATA-6研究总结
1.6 本研究的目的意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 样品的采集
2.1.2 主要试剂及试剂盒
2.1.3 主要试剂配制
2.1.4 主要仪器设备
2.1.5 应用的生物学软件
2.2 试验方法
2.2.1 总RNA提取及引物设计
2.2.2 GATA-4和GATA-6片段的克隆及序列测定
2.2.3 GATA-4真核表达载体构建及鉴定
2.2.4 颗粒细胞原代培养
2.2.5 GATA-4真核表达载体瞬时转染鹅颗粒细胞
2.2.6 25-hydroxycholesterol诱导颗粒细胞凋亡
2.2.7 细转染GATA-4抵抗25-hydroxycholesterol毒性
2.2.8 实时荧光定量PCR
3 结果与分析
3.1 鹅GATA-4和GATA-6编码区序列克隆与分析
3.1.1 卵巢RNA提取结果
3.1.2 PCR扩增结果
3.1.3 编码区序列拼接
3.2 鹅GATA-4和GATA-6编码区序列分析
3.2.1 GATA-4和GATA-6编码区氨基酸序列分析
3.2.2 鹅GATA-4和GATA-6蛋白结构域分析
3.3 鹅GATA-4和GATA-6表达模式
3.3.1 鹅GATA-4和GATA-6在3种类型的卵泡中表达情况
3.3.2 鹅GATA-4和GATA-6在不同等级卵泡中的表达情况
3.4 GATA-4真核表达载体构建
3.4.1 GATA-4载体构建
3.4.2 GATA-4转染颗粒细胞及表达鉴定
3.4.3 转染GATA-4对下游靶基因影响及与颗粒细胞增殖关系
3.5 25HC诱导颗粒细胞凋亡鉴定
3.5.1 普通形态学观察
3.5.2 TURNEL绿色荧光鉴定凋亡细胞
3.5.3 检测类固醇通路上关键基因表达
3.6 过表达GATA-4缓解25HC诱导颗粒细胞凋亡和25HC降低类固醇生成
3.6.1 25HC处理细胞过表达GATA-4基因的表达量情况
3.6.2 过表达GATA-4可以抵御25HC诱导细胞凋亡的能力
3.6.3 过表达GATA-4平衡25HC抑制类固醇合成
4、讨论
4.1 鹅GATA-4和GATA-6分子结构差异
4.2 鹅GATA-4和GATA-6表达模式分析
4.3 25HC诱导颗粒细胞凋亡、抑制类固醇合成基因表达
4.4 过表达GATA-4促进颗粒细胞增殖、上调靶基因
4.5 过表达GATA-4缓解25HC诱导凋亡和25HC抑制类固醇生成
5 结论
参考文献
致谢
硕士研究生学习期间发表的论文
本文编号：3536172
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3536172.html
