表达密码子优化H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白重组新城疫病毒的研究

发布时间：2021-12-16 16:31

　　禽流感(Avian influenza, AI)是由禽流感病毒引起禽类神经系统、呼吸系统、消化系统乃至全身性感染,甚至死亡的一种烈性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物传染病。2003年,高致病禽流感(Highly pathogenic avian influenza, HPAI)的爆发出现于东南亚的一些国家。HPAIV H5N1在欧洲、亚洲以及非洲的频频爆发已经导致了数以万计禽类的死亡,给养殖业带来了不可估计的损失。AIV的难以控制也让人们越发担心新型禽流感病毒会在人与人之间传播,而大多数人感染HPAIV的病例均有与病死禽接触的历史。人们通常通过大面积的扑杀病禽来控制疫情,但事实证明,HPAI快速的传播速度决定了扑杀并不能从根本上消灭病毒,因此在高危地区进行预防性疫苗接种已经成为当今最有效手段之一。目前,已经有许多种类的疫苗被研制成功,包括基因工程亚单位疫苗、DNA疫苗、灭活疫苗等,它们都具有较好的免疫保护作用以及安全性,但也有各自的局限性。 新城疫病毒(Newcastle Disease Virus, NDV)像AIV一样,可以在禽类中广泛传播并引起高致死率。新...

【文章来源】： 中国农业科学院北京市

【文章页数】：43 页

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摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 引言
    1.1 禽流感病毒概述
        1.1.1 禽流感病毒的一般特性
        1.1.2 禽流感病毒的HA蛋白
        1.1.3 禽流感病毒的临床症状
        1.1.4 禽流感病毒的流行病学
        1.1.5 禽流感病毒的防控
        1.1.6 禽流感疫苗的研究现状
            1.1.6.1 禽流感病毒灭活全病毒疫苗
            1.1.6.2 禽流感病毒亚单位疫苗
            1.1.6.3 禽流感病毒DNA疫苗
            1.1.6.4 禽流感病毒重组活载体疫苗
            1.1.6.5 新型疫苗的新走向—密码子优化
        1.1.7 NDV作为活载体疫苗的研究现状
        1.1.8 研究的目的及意义
第二章 实验部分
    2.1 材料
        2.1.1 病毒株和细胞
        2.1.2 质粒
        2.1.3 高免血清和实验动物
        2.1.4 主要试剂和仪器
    2.2 方法
        2.2.1 表达两种HA基因的重组病毒基因组全长cDNA克隆的构建
            2.2.1.1 引物的设计与合成
            2.2.1.2 表达两种HA基因的重组病毒全长cDNA的构建
        2.2.2 重组病毒的拯救
        2.2.3 重组病毒的鉴定
            2.2.3.1 RT-PCR鉴定
            2.2.3.2 利用激光共聚焦显微镜检测重组病毒的蛋白的表达
            2.2.3.3 Western blot检测重组病毒的NDV蛋白以及HA蛋白的表达
        2.2.4 两种重组病毒在鸡胚成纤维细胞中的生长曲线测定
        2.2.5 重组病毒的免疫效果评估
    2.3 结果
        2.3.1 两种重组病毒基因组全长cDNA克隆的构建与病毒的拯救
        2.3.2 RT-PCR鉴定
        2.3.3 HA蛋白的表达和定位
        2.3.4 western blot鉴定HA蛋白表达的差异
        2.3.5 生长动力学实验比较重组病毒生长差异
        2.3.6 重组病毒对SPF鸡的免疫反应
    2.4 讨论
第三章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简介



本文编号：3538461