CTSB、CTSS基因表达与绵羊卵丘细胞凋亡及卵母细胞发育能力相关性研究
发布时间：2021-12-18 19:48
本研究通过qRT-PCR技术检测成年绵羊和羔羊卵丘细胞内组织蛋白酶（CTSB、CTSS）基因表达规律，Tunel染色并结合流式细胞仪检测卵丘细胞凋亡，研究成熟培养液中添加不同浓度组织蛋白酶特异性抑制剂E-64对卵丘细胞凋亡及卵母细胞发育能力的影响。探究CTSB、CTSS基因表达、绵羊卵丘细胞凋亡与卵母细胞发育能力相关性，以期探索提高绵羊卵母细胞成熟及发育潜能的新途径。研究结果如下：成年绵羊与羔羊卵母细胞体外成熟液中添加不同浓度的E-6（40μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L），分别于体外成熟（IVM）的0h、8h、16h、24h检测组织蛋白酶基因表达量，结果表明：成年绵羊及羔羊卵丘细胞内CTSB、CTSS基因表达量在体外成熟过程中，随时间的延长而逐渐下降；E-64添加组卵丘细胞内CTSB、CTSS基因表达量均在不同程度上低于对照组，其中5μmol/L和10μmol/L组于IVM8h、16h、24h基因表达量与对照组相比，被显著下调（p<0.05），5μmol/L和10μmol/L组间差异不显著（P>0.05）。卵母细胞体外成熟液中添加不同浓度E-...
【文章来源】：河北农业大学河北省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
哺乳动物的卵泡发育阶段（改自Edson等，2009）
）对研究细胞凋亡的指导性作用。很多实验研究也证明了组织蛋白酶与细。Smith Basil[32]等研究发现 camalexin（一种植物抗毒素，模式植物拟南芥过改变组织蛋白酶（cathepsin)D 的表达及活动减少前列腺癌细胞生存能力有抗增殖和防御癌症的效果，推测其可以作为治疗前列腺癌的新药剂。还 D 通过激活 caspase-8 诱导中性粒细胞凋亡, 减轻炎症反应[33]。Gao C[34]等e（一种特定的组织蛋白酶 B 抑制剂）做预处理，可非常明显但不是全部组织蛋白酶 B 的活性与细胞凋亡呈正相关的关系。肿瘤的发生、发展与生发现在肿瘤当中加入 cathepsins 能够增强肿瘤药物的敏感性，加速肿瘤细
细胞凋亡的过程大致可分为以下几个阶段：接受凋亡信号→凋亡调控分子间的相互作用→解酶的活化（Caspase）→进入连续反应过程。尽管凋亡过程的详细机制尚不完全清楚，但在细胞凋亡的启动阶段还是凋亡执行阶段，Caspase 家族即半胱天冬蛋白酶在凋亡过程中都非常关键的作用，是多细胞动物体内所有凋亡蛋白中最主要、最核心的死亡执行者[56-58]。细胞凋亡过程实际是 Caspase 不可逆水解有限水解底物的级联放大反应过程。 Caspas有很多种类，如 caspase2、3、6、7、8、9、10，它们的分子有很高的同源性，结构相似，活性位点均包含半胱氨酸残基，能够特异性的切割靶蛋白天冬氨酸残基上的肽键。这些 ca家族成员在细胞生长的不同阶段选择性地切割某些蛋白质，使细胞正常的生命活动无法进而造成细胞凋亡。图 1-3（引自[59]）为线粒体内外凋亡通路，细胞表面死亡受体和细胞内线介导半胱天冬酶（caspase）级联反应，最终导致死亡的执行。而组织蛋白酶又在各个级联程中起到调控作用，如：组织蛋白酶 B（CTSB）在特定的环境下酶切 Bid（一种仅含有 B构域的 Bcl-2 家族蛋白）产生活性片段，进而增大线粒体外膜通透性，促进线粒体中细胞色释放及 caspase 活化，最终激活介导细胞凋亡的“溶酶体-线粒体途径”， 组织蛋白酶 C（CT组织蛋白酶 D（CTSD）、组织蛋白酶 L（CTSL）等多种组织蛋白酶也在细胞凋亡过程中用[60-65]。因此组织蛋白酶在细胞内的表达规律及与细胞凋亡的相关性研究是非常必要的，律的揭示将为细胞凋亡与存活调控机制的探究提供更多的参考价值。凋亡相关基因及蛋白的发掘与生产也将为凋亡相关疾病的预防、治疗指引方向。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Ghrelin参与FSH对牛卵丘细胞体外增殖的调节[J]. 米焱,张伶俐,李海军,杜晨光,曹贵方,王秀梅. 畜牧兽医学报. 2013(08)
[2]鸭肉中组织蛋白酶B的特性研究[J]. 陆应林,徐幸莲,周光宏. 畜牧与兽医. 2012(10)
[3]组织蛋白酶对成年绵羊卵母细胞体外发育能力的影响[J]. 刘志涛,田树军,孙树春,陈晓勇,张艳普,胡媛媛,郭军艾. 畜牧兽医学报. 2011(12)
[4]溶酶体与细胞凋亡[J]. 赵凯,卫涛涛. 生命科学. 2011(11)
[5]保留卵丘细胞对短时受精结果的影响[J]. 金海霞,孙莹璞,辛志敏,宋文妍,戴善军. 实用医学杂志. 2011(21)
[6]细胞凋亡检测方法的研究进展[J]. 佟俊杰,张广耘,袁晓. 口腔医学. 2010(07)
[7]白毒鹅膏菌毒素诱导小鼠肝细胞凋亡的DNA凝胶电泳分析[J]. 李春丰,江清林,庄树文,薛勇. 科技信息. 2010(11)
[8]溶酶体组织蛋白酶参与细胞凋亡过程的分子机制[J]. 李志刚,张智博. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2009(06)
[9]NF-κB与cox-2在胃癌细胞增殖与凋亡的研究进展[J]. 宿连政,靳祥云. 科技信息. 2009(29)
[10]水牛卵丘颗粒细胞凋亡与卵母细胞体外发育潜能的研究[J]. 王晓丽,杨娟,陈玉,成俊萍,潘红平,韦精卫,陆凤花,石德顺. 畜牧兽医学报. 2009(09)
硕士论文
[1]绵羊CTSB基因克隆及其活性与卵母细胞发育能力相关性研究[D]. 祁昕.河北农业大学 2013
[2]绵羊卵丘细胞中组织蛋白酶基因表达及其对卵母细胞发育能力影响[D]. 刘志涛.河北农业大学 2011
本文编号：3543069
【文章来源】：河北农业大学河北省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
哺乳动物的卵泡发育阶段（改自Edson等，2009）
）对研究细胞凋亡的指导性作用。很多实验研究也证明了组织蛋白酶与细。Smith Basil[32]等研究发现 camalexin（一种植物抗毒素，模式植物拟南芥过改变组织蛋白酶（cathepsin)D 的表达及活动减少前列腺癌细胞生存能力有抗增殖和防御癌症的效果，推测其可以作为治疗前列腺癌的新药剂。还 D 通过激活 caspase-8 诱导中性粒细胞凋亡, 减轻炎症反应[33]。Gao C[34]等e（一种特定的组织蛋白酶 B 抑制剂）做预处理，可非常明显但不是全部组织蛋白酶 B 的活性与细胞凋亡呈正相关的关系。肿瘤的发生、发展与生发现在肿瘤当中加入 cathepsins 能够增强肿瘤药物的敏感性，加速肿瘤细
细胞凋亡的过程大致可分为以下几个阶段：接受凋亡信号→凋亡调控分子间的相互作用→解酶的活化（Caspase）→进入连续反应过程。尽管凋亡过程的详细机制尚不完全清楚，但在细胞凋亡的启动阶段还是凋亡执行阶段，Caspase 家族即半胱天冬蛋白酶在凋亡过程中都非常关键的作用，是多细胞动物体内所有凋亡蛋白中最主要、最核心的死亡执行者[56-58]。细胞凋亡过程实际是 Caspase 不可逆水解有限水解底物的级联放大反应过程。 Caspas有很多种类，如 caspase2、3、6、7、8、9、10，它们的分子有很高的同源性，结构相似，活性位点均包含半胱氨酸残基，能够特异性的切割靶蛋白天冬氨酸残基上的肽键。这些 ca家族成员在细胞生长的不同阶段选择性地切割某些蛋白质，使细胞正常的生命活动无法进而造成细胞凋亡。图 1-3（引自[59]）为线粒体内外凋亡通路，细胞表面死亡受体和细胞内线介导半胱天冬酶（caspase）级联反应，最终导致死亡的执行。而组织蛋白酶又在各个级联程中起到调控作用，如：组织蛋白酶 B（CTSB）在特定的环境下酶切 Bid（一种仅含有 B构域的 Bcl-2 家族蛋白）产生活性片段，进而增大线粒体外膜通透性，促进线粒体中细胞色释放及 caspase 活化，最终激活介导细胞凋亡的“溶酶体-线粒体途径”， 组织蛋白酶 C（CT组织蛋白酶 D（CTSD）、组织蛋白酶 L（CTSL）等多种组织蛋白酶也在细胞凋亡过程中用[60-65]。因此组织蛋白酶在细胞内的表达规律及与细胞凋亡的相关性研究是非常必要的，律的揭示将为细胞凋亡与存活调控机制的探究提供更多的参考价值。凋亡相关基因及蛋白的发掘与生产也将为凋亡相关疾病的预防、治疗指引方向。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Ghrelin参与FSH对牛卵丘细胞体外增殖的调节[J]. 米焱,张伶俐,李海军,杜晨光,曹贵方,王秀梅. 畜牧兽医学报. 2013(08)
[2]鸭肉中组织蛋白酶B的特性研究[J]. 陆应林,徐幸莲,周光宏. 畜牧与兽医. 2012(10)
[3]组织蛋白酶对成年绵羊卵母细胞体外发育能力的影响[J]. 刘志涛,田树军,孙树春,陈晓勇,张艳普,胡媛媛,郭军艾. 畜牧兽医学报. 2011(12)
[4]溶酶体与细胞凋亡[J]. 赵凯,卫涛涛. 生命科学. 2011(11)
[5]保留卵丘细胞对短时受精结果的影响[J]. 金海霞,孙莹璞,辛志敏,宋文妍,戴善军. 实用医学杂志. 2011(21)
[6]细胞凋亡检测方法的研究进展[J]. 佟俊杰,张广耘,袁晓. 口腔医学. 2010(07)
[7]白毒鹅膏菌毒素诱导小鼠肝细胞凋亡的DNA凝胶电泳分析[J]. 李春丰,江清林,庄树文,薛勇. 科技信息. 2010(11)
[8]溶酶体组织蛋白酶参与细胞凋亡过程的分子机制[J]. 李志刚,张智博. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2009(06)
[9]NF-κB与cox-2在胃癌细胞增殖与凋亡的研究进展[J]. 宿连政,靳祥云. 科技信息. 2009(29)
[10]水牛卵丘颗粒细胞凋亡与卵母细胞体外发育潜能的研究[J]. 王晓丽,杨娟,陈玉,成俊萍,潘红平,韦精卫,陆凤花,石德顺. 畜牧兽医学报. 2009(09)
硕士论文
[1]绵羊CTSB基因克隆及其活性与卵母细胞发育能力相关性研究[D]. 祁昕.河北农业大学 2013
[2]绵羊卵丘细胞中组织蛋白酶基因表达及其对卵母细胞发育能力影响[D]. 刘志涛.河北农业大学 2011
本文编号：3543069
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