毒害艾美耳球虫纳米PCR检测方法的建立及初步应用

发布时间：2021-12-19 00:56

　　毒害艾美耳球虫（Eimeria necatrix）是引起鸡急性小肠球虫病最重要的病原,为了对毒害艾美耳球虫进行快速特异性检测,本研究基于毒害艾美耳球虫ITS-2基因序列,通过退火温度、引物用量等反应条件的优化,建立了鸡毒害艾美耳球虫特异性纳米PCR检测方法。结果显示,该方法成功扩增出毒害艾美耳球虫约380 bp的特异性片段,其最低检出质量浓度为3.64μg/L,敏感性是普通PCR的100倍;进一步对毒害艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫、贝氏隐孢子虫等多种病原的DNA样品进行扩增,该方法仅能扩增出毒害艾美耳球虫的目的片段。利用所建立的纳米PCR检测方法对40份鸡的粪便样品进行检测,发现受检样品中毒害艾美耳球虫阳性率为35.0%（14/40）,与普通PCR检测结果一致。结果表明,本研究建立的毒害艾美耳球虫纳米PCR检测方法能够实现对毒害艾美耳球虫的快速准确检测,且与普通PCR相比具有更高的敏感性和特异性,为毒害艾美耳球虫感染的临床鉴别诊断和防控提供了技术基础。 

【文章来源】：中国兽医学报. 2020,40(11)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

纳米PCR扩增结果

通过对纳米PCR反应条件中的退火温度进行优化,结果显示,当退火温度为60℃时,扩增条带最亮(图2)。进一步对体系中的引物用量进行优化,结果显示当引物用量为12 pmol(即分别加入0.6 μL浓度为10 μmol/L的上、下游引物)时,扩增条带最亮(图3)。图3 纳米PCR引物用量优化

纳米PCR引物用量优化

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3543478