副猪嗜血杆菌毒力菌株与非毒力菌株差异蛋白的筛选及鉴定

发布时间：2021-12-19 10:13

　　副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis, HPS）是正常猪群上呼吸道的一种常见的共生菌,但在特定的条件下可以侵入机体,并引发以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎等为主要特征的疾病,该病又被称为革拉瑟氏病（Glasser’s disease）。最近副猪嗜血杆菌病已经成为猪场保育仔猪死亡的一个主要原因,但是引起其致病的原因仍然还不是很清楚。HPS常在健康猪的鼻腔、扁桃体、气管中分离到,因此区分出正常栖生菌株与致病性菌株是确诊该病的关键所在。毒力因子是区分致病与非致病菌株的重要标志物,目前,副猪嗜血杆菌的毒力因子尚未被阐明。蛋白质是生命体发挥生物学功能的真正载体,因此在蛋白质水平研究副猪嗜血杆菌的毒力因子将为建立区分致病性生菌株和非致病性菌株的鉴别诊断方法及致病机理提供了新的线索。本研究针对副猪嗜血杆菌临床分离株血清13型14A7-2和血清不定型20A3-2开展差异蛋白研究。根据其引起的临床症状、潜在毒力基因检测和动物感染实验的结果,确定14A7-2和20A3-2菌株分别为毒力菌株和非毒力菌株。提取14A7-2菌株和20A3-2菌株的菌体蛋白,优化HPS菌体蛋白双向电泳条件... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
目录
摘要
ABSTRACT
符号说明
上篇 文献综述
    第一章 副猪嗜血杆菌研究进展
        1 生物学特性
        2 流行病学
        3 致病机理
        4 毒力因子
            4.1 血清型与毒力
            4.2 外膜蛋白(Outer Membrane Protein,OMP)
            4.3 脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)
            4.4 三聚自身转运子(virulence-associated trimeric autotransporters,VtaA)
            4.5 神经氨酸酶(Neuramidinase,NA)
            4.6 荚膜多糖(CPS)
            4.7 其它毒力因子
        5 诊断
        参考文献
    第二章 蛋白质组学研究进展
        1 蛋白质组学研究技术
            1.1 双向电泳技术
            1.2 质谱技术
            1.3 生物信息学分析
        2 比较蛋白质组学在细菌学研究中的应用
            2.1 比较蛋白质组学
            2.2 比较蛋白质组学在细菌学研究中的应用
        3 蛋白质组学在副猪嗜血杆菌上的应用
        4 总结与展望
        参考文献
下篇 研究内容
    第三章 副猪嗜血杆菌菌体蛋白双向电泳图谱的建立及分析
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 试验材料
            1.2 试验方法
        2 结果
            2.1 14A7-2和20A3-2菌株的生长曲线
            2.2 菌株毒力的鉴定
            2.3 菌体蛋白浓度测定的结果
            2.4 副猪嗜血杆菌毒力菌株14A7-2与非毒力菌株20A3-2 2-DE图谱及分析
            2.5 差异蛋白点的质谱鉴定结果
        3 讨论
            3.1 蛋白样品的制备
            3.2 IPG胶条的长度
            3.3 IPG胶条的pH范围
            3.4 蛋白样品的上样量
            3.5 染色方法
            3.6 质谱鉴定和分析的差异蛋白质
        参考文献
    第四章 副猪嗜血杆菌主要差异蛋白点的验证
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 试验材料
            1.2 试验方法
        2 结果
            2.1 furp、q和abc基因的克隆
            2.2 序列测定结果
            2.3 重组蛋白的诱导表达
            2.4 重组蛋白的纯化
            2.5 免疫血清的效价
            2.6 菌体蛋白的免疫印迹
        3 讨论
        参考文献
全文总结
附录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]副猪嗜血杆菌ompP2基因的结构特征及其与毒力的联系[J]. 赵倩,汤承,杨发龙,邵国青,岳华.  中国科学:生命科学. 2010(06)
[2]ABC转运蛋白的结构与转运机制[J]. 王华丙,张振义,包锐,陈宇星.  生命的化学. 2007(03)
[3]副猪嗜血杆菌病研究进展[J]. 华升,梅书棋,曾德芳,徐涤平,李勇.  动物医学进展. 2006(11)
[4]双向电泳-质谱技术筛选肝癌血清标记物[J]. 冯钜涛,刘银坤,MOHAMAD RADWAN ALMOFTI,代智,周海君,宋海燕,陆豪杰,汤钊猷.  生物化学与生物物理进展. 2005(07)
[5]差异蛋白质组学及其应用[J]. 何大澄,肖雪媛.  北京师范大学学报(自然科学版). 2002(04)

硕士论文
[1]副猪嗜血杆菌的分离鉴定及其在模拟体内发病条件下培养的蛋白组学研究[D]. 杨显超.南京农业大学 2011
[2]副猪嗜血杆菌外膜蛋白图谱的建立及D15免疫原性鉴定[D]. 郭一.华中农业大学 2009
[3]副猪嗜血杆菌体内诱导抗原的研究及真核表达文库的构建[D]. 陈鑫.华中农业大学 2008
[4]SCOTS技术的建立及在副猪嗜血杆菌功能基因筛选中的应用[D]. 胡军勇.华中农业大学 2008



本文编号：3544236