猪链球菌2型脑膜炎株小RNA rss04和rss05对毒力的影响及毒力相关基因
发布时间：2021-12-23 03:27
猪链球菌（Streptococcus suis, SS）是猪的重要病原菌,可引起猪的脑膜炎、败血症、关节炎及急性死亡。SS2的毒力最强,流行最广。为进一步了解SS致病机制,深入探讨了小RNA（sRNA）rssO4与rss05对SS2脑膜炎分离株P1/7的影响。应用比较基因组学方法,揭示SS2脑膜炎分离株SC070731特有一个105K基因岛及新的毒力相关基因。1. sRNA rssO4和rss05对SS2脑膜炎分离株P1/7毒力的影响本课题组前期对P1/7转录组测序发现29个sRNAs,为探究sRNA对SS毒力的影响,挑选出分别在猪脑脊液中上调表达的sRNA rssO4和在猪血液中上调表达的sRNA rssO5深入研究。利用温度敏感型穿梭质粒pSET4s定点敲除P1/7的rss04和rss05基因,成功构建缺失株△rssO4和△rssO5,以及互补株C-rssO4和C-rssO5.斑马鱼毒力试验显示,两个缺失株毒力显著低于野毒株和相应互补株；猪全血存活试验表明,与野生株相比,缺失株△rssO5在猪全血中的存活能力显著降低（*P<0.05）,而△rssO4与野生株目比差异不显著；H...
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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?和互补株，缺失株Ａｒｓｓ０４?（Ｐ?＜?０．０１）的毒力比Ａｒｓｓ０５?（Ｐ?＜?０．０５）减弱得更加明显；??而互补株Ｃ－ｒｓｓ０４和Ｃ－ｒｓｓＭ的毒力与野生株相当（图３－７）。??３．７全血存活试验??分别将野毒株Ｐ１／７、缺失株与新鲜无茵的猪全血作用４ｈ。Ｗ化的ＣＦＵ作为１００％，??４ｈ后的ＣＦＵ与之相比较，计算存活率。Ｗ?Ｐ１／７的存活率为１００％，将各缺失株与之??相比较（图３－８Ａ），缺失株Ａｒｓｓ０５在猪全血中的存活能力下降了约３０％，变化明显；??而Ａｒｓｓ０４的存活能力没有明显变化。??在相同条件下，野生株、缺失株与ＴＨＢ相互作用的结果分析（图３－８Ｂ）表明，??缺失株的生长率相对于野毒株，并没有明显差异。从而说明缺失株在猪全血中表型的??变化，并不是由于生长缺陷造成的。??Ａ?Ｂ??Ｓｕｒｖｉｖａｌ?ｉｎ?ｐｉｇ?ｂｌｏｏｄ?Ｇｒｏｗｔｈ?ｉｎ?ＴＨＢ??ｆｃ?１－５＊１?３〇ｉ??％?２５－?一?Ｔ．??１?１－０－?ＨＩ?２０－?ｉｌｌ?ｆｌ?：??圓广１?１５．?■?＼??｝。．５．｜．．．?ｉ?．１??一＿ｉｐＬ?ｏ－ＵＵｍ—Ｌ?，??
【参考文献】：
期刊论文
[1]dRNA-seq原理及其在原核生物转录组学研究中的应用[J]. 侯志伟,王赟,高宏,侯圣伟. 遗传. 2013(08)
[2]抑制性消减杂交技术分析猪链球菌2型毒力相关基因[J]. 齐翀,刘军,祝令伟,王文东,孟福强,冯书章. 中国兽医学报. 2009(05)
[3]Comparative analysis of whole genome structure of Streptococcus suis using whole genome PCR scanning[J]. XIONG ZhaoHui1*, WEI CanDong1*, YANG Jian1, PENG JunPing1, XU XingYe1, WANG Yu2 & JIN Qi1,3 1 State Key Lab for Molecular Virology and Genetic Engineering, Institute for Viral Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 100176, China; 2 Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 100050, China; 3 Institute of Pathogen Biology, Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100730, China. Science in China（Series C:Life Sciences）. 2008(01)
[4]猪链球菌全基因组序列比较分析[J]. 魏武,丁国徽,王晓婧,孙景春,屠康,郝沛,王川,曹志伟,石铁流,李亦学. 科学通报. 2006(07)
[5]四川省一起伴中毒性休克综合征的人感染猪链球菌2型暴发[J]. 杨维中,余宏杰,景怀琦,徐建国,陈志海,祝小平,汪华,刘学成,王世文,刘伦光,祖荣强,罗隆泽,向妮娟,刘红露,钟文君,刘莉,孟玲,袁珩,高永军,杜化茂,欧阳宾,叶长芸,金冬,吕强,崔志刚,黄燕,张守印,安向东,黄婷,周兴余,冯燎,庞启迪,舒跃龙,王宇. 中华流行病学杂志. 2006(03)
[6]安全高效的新型食品保存剂的研究进展[J]. 李红缨,杨辉荣,欧国勇. 江苏化工. 2001(04)
[7]猪链球菌2型的致病特性与毒力因子[J]. 何孔旺,陆承平. 中国兽医科技. 2000(09)
[8]猪链球菌1998分离株病原特性鉴定[J]. 姚火春,陈国强,陆承平. 南京农业大学学报. 1999(02)
本文编号：3547685
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－１无痕缺失原理图??Ｆｉｇ．?３－１?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｓｔｒａｔｅｇｙ?ｏｆ?ｇｅｎｅ?ｋｎｏｃｋ－ｏｕｔ?ｂｙ?ａｌｌｅ＂ｃ?Ｋｐｌａｃｅｍｅｎｔ??
ｆｅ．ｗ?；．．巧．■?聽圓??图３－３Ａ?ｐＳＥＴ４ｓ：ＴＭ０４双酶切鉴定?图３－３Ｂ?ｐＳＥＴ４ｓ：：ｒｓｓ０５双酶切鉴定??Ｆｉｇ．?３－３Ａ?Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ?ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ?Ｆｉｇ．?３－３Ｂ?Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ?ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ??ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｌａｓｍｉｄ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｌａｓｍｉｄ??１：?ｐＳＥＴ４ｓ：：阿Ｓ０４用戶Ｗ?Ｉ和防ｏＲ?Ｉ双酶切?１：?ｐＳＥＴ４ｓ：：＂ｊ０４用戶Ｗ?Ｉ和抗加Ｉ双酶切??Ｍ：?ＤＬ５０００?ｍａｒｋｅｒ?Ｍ：?ＤＬ５０００?ｍａｒｋｅｒ??３．３基因缺失株筛选及鉴定??巧引物Ｒｓｓ０４ＣＵ／Ｄ和Ｒｓｓ０５ＣＵ／Ｄ对无Ｓｐｃ抗性的候选缺失株进行ＰＣＲ鉴定（图３－４Ａ??和３－４Ｂ），初步筛选目的菌株。用引物ＲＳＳ０４ＣＵ／Ｄ扩增野毒株片段大小应为７９卿３，而??缺失株Ａｒｓｓ０４扩增出的片段大小应为２８０ｂｐ；用引物ＲＳＳ０５ＣＵ／Ｄ扩增野毒株片段大小应??为６８０ｂｐ，而缺失株Ａｒｓｓ０５扩增出的片段大小应为３９６ｂｐ。ＰＣＲ产物通过琼脂糖凝胶电??泳显示出的结果相符。并且分别用引物ＲＳＳ０４－Ａ／Ｄ和ＲＳＳ０５－Ａ／Ｄ扩增出的４ＡＤ和５?ＡＤ片??段送到公司测序，测序结果表明扩增的基因组片段中不含有缺失的目的基因，并且两??端同源臂中的基因无突变，缺失株Ａｒｓｓ０４和Ａｒｓｓ０５构建成功。缺失株Ａｒｓｓ０４和Ａｒｓｓ０５在??ＴＨＢ液体培养基中连续传１０代
?和互补株，缺失株Ａｒｓｓ０４?（Ｐ?＜?０．０１）的毒力比Ａｒｓｓ０５?（Ｐ?＜?０．０５）减弱得更加明显；??而互补株Ｃ－ｒｓｓ０４和Ｃ－ｒｓｓＭ的毒力与野生株相当（图３－７）。??３．７全血存活试验??分别将野毒株Ｐ１／７、缺失株与新鲜无茵的猪全血作用４ｈ。Ｗ化的ＣＦＵ作为１００％，??４ｈ后的ＣＦＵ与之相比较，计算存活率。Ｗ?Ｐ１／７的存活率为１００％，将各缺失株与之??相比较（图３－８Ａ），缺失株Ａｒｓｓ０５在猪全血中的存活能力下降了约３０％，变化明显；??而Ａｒｓｓ０４的存活能力没有明显变化。??在相同条件下，野生株、缺失株与ＴＨＢ相互作用的结果分析（图３－８Ｂ）表明，??缺失株的生长率相对于野毒株，并没有明显差异。从而说明缺失株在猪全血中表型的??变化，并不是由于生长缺陷造成的。??Ａ?Ｂ??Ｓｕｒｖｉｖａｌ?ｉｎ?ｐｉｇ?ｂｌｏｏｄ?Ｇｒｏｗｔｈ?ｉｎ?ＴＨＢ??ｆｃ?１－５＊１?３〇ｉ??％?２５－?一?Ｔ．??１?１－０－?ＨＩ?２０－?ｉｌｌ?ｆｌ?：??圓广１?１５．?■?＼??｝。．５．｜．．．?ｉ?．１??一＿ｉｐＬ?ｏ－ＵＵｍ—Ｌ?，??
【参考文献】：
期刊论文
[1]dRNA-seq原理及其在原核生物转录组学研究中的应用[J]. 侯志伟,王赟,高宏,侯圣伟. 遗传. 2013(08)
[2]抑制性消减杂交技术分析猪链球菌2型毒力相关基因[J]. 齐翀,刘军,祝令伟,王文东,孟福强,冯书章. 中国兽医学报. 2009(05)
[3]Comparative analysis of whole genome structure of Streptococcus suis using whole genome PCR scanning[J]. XIONG ZhaoHui1*, WEI CanDong1*, YANG Jian1, PENG JunPing1, XU XingYe1, WANG Yu2 & JIN Qi1,3 1 State Key Lab for Molecular Virology and Genetic Engineering, Institute for Viral Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 100176, China; 2 Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 100050, China; 3 Institute of Pathogen Biology, Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100730, China. Science in China（Series C:Life Sciences）. 2008(01)
[4]猪链球菌全基因组序列比较分析[J]. 魏武,丁国徽,王晓婧,孙景春,屠康,郝沛,王川,曹志伟,石铁流,李亦学. 科学通报. 2006(07)
[5]四川省一起伴中毒性休克综合征的人感染猪链球菌2型暴发[J]. 杨维中,余宏杰,景怀琦,徐建国,陈志海,祝小平,汪华,刘学成,王世文,刘伦光,祖荣强,罗隆泽,向妮娟,刘红露,钟文君,刘莉,孟玲,袁珩,高永军,杜化茂,欧阳宾,叶长芸,金冬,吕强,崔志刚,黄燕,张守印,安向东,黄婷,周兴余,冯燎,庞启迪,舒跃龙,王宇. 中华流行病学杂志. 2006(03)
[6]安全高效的新型食品保存剂的研究进展[J]. 李红缨,杨辉荣,欧国勇. 江苏化工. 2001(04)
[7]猪链球菌2型的致病特性与毒力因子[J]. 何孔旺,陆承平. 中国兽医科技. 2000(09)
[8]猪链球菌1998分离株病原特性鉴定[J]. 姚火春,陈国强,陆承平. 南京农业大学学报. 1999(02)
本文编号：3547685
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