猪DECR1和GPR81基因转录调控的研究
发布时间：2021-12-23 04:15
猪肉品质作为猪育种工作中的重要经济性状之一,已经成为育种工作者关注的重点。众所周知,脂肪性状是影响猪肉品质的重要因素,对其进行深入研究将有助于我们找到改善猪肉品质的方法。为此,本试验对影响脂肪性状的两个基因的转录调控机制进行了初步研究,以揭开其转录调控原理的面纱,为下一步的研究奠定基础。本试验主要从以下几个方面对DECR1基因和GPR81基因的转录调控机制进行了研究：（1）通过QT-PCR技术对GPR81基因在大白猪的各个组织表达情况进行定量研究,得出GPR81基因在脂肪、肝脏以及肾脏组织中高表达,其中脂肪组织中表达量最高,其他组织中微量表达或不表达。（2）通过NCBI和EBI数据库查询得到DECR1、GPR81基因5’端上游大约2000bp的调控序列,并对其进行PCR克隆,分别获得2099bp、1798bp的序列。利用生物信息学技术分别对这两个基因的5’端上游转录调控区域进行了预测分析,发现DECR1基因5’端上游转录调控区域内存在AP1、SP1、MZF1等多种常见的转录因子结合位点。对CpG岛分布情况分析,发现没有CpG岛存在；在GPR81基因5’端上游转录调控区域发现有GATA-...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
常用中英文縮略词表
第一章 文献综述
1 前言
2 真核生物基因转录因子的研究进展
2.1 转录因子的结构及分类
2.2 转录因子的研究方法
2.3 利用生物信息学技术对转录因子的预测
3 真核生物基因启动子的研究
4 DECR1基因的研究进展
5 GPR81基因的研究进展
6 研究的目的及意义
第二章 实验材料和方法
1 实验材料
1.1 主要的生化试剂和药品
1.2 细胞、菌株和载体及猪基因组DNA
1.3 试剂盒
1.4 组织表达谱分析的样品
1.5 主要的仪器、设备及耗材
1.6 缓冲液和常用试剂的配制
1.7 主要的生物学软件和网站
2 实验方法
2.1 猪GPR81基因组织表达谱分析
2.2 猪DECR1基因和GPR81基因5'端上游调控区域的克隆和生物信息学分析
2.3 猪DECR1基因和GPR81基因近端启动子缺失分析
2.4 进一步对DECR1和GPR81基因启动子进行缺失载体的构建
2.5 定点突变的验证试验
2.6 超表达实验对DECR1基因和GPR81基因5’端上游调控区域转录调控的分析鉴定
2.7 siRNA对DECR1基因5’端上游调控区域转录调控的分析
第三章 实验结果与分析
1 猪GPR81基因组织表达谱分析
1.1 组织总RNA的提取
1.2 反转录的cDNA结果检测
1.3 猪GPR81基因在猪不同组织中的表达结果
2 猪DECR1和GPR81基因5'端上游调控区域的克隆和生物信息学分析
2.1 猪DECR1和GPR81基因5'端上游调控区域的克隆
2.2 猪DECR1和GPR81基因5'端上游调控区域的生物信息学预测
3 猪DECR1基因和GPR81基因近端启动子缺失分析
3.1 猪DECR1、GPR81基因启动子不同缺失片段的构建
3.2 DECR1和GPR81基因启动子缺失片段在不同细胞中活性分析
3.3 第二次对DECR1和GPR81基因启动子进行缺失载体的构建
3.4 DECR1和GPR81基因的第二次构建的缺失片段的活性分析
4 DECR1基因、GPR81基因定点突变分析鉴定
5 超表达实验对DECR1和GPR81基因5'UTR转录调控的分析
5.1 猪GATA1基因CDS全长的克隆及双酶切鉴定
5.2 超表达SP1对DECR1基因5'UTR转录活性的分析鉴定
5.3 超表达猪的GATA1转录因子对GPR81基因启动子活性的影响
5.4 猪PPARγ2基因的超表达对GPR81基因启动子转录活性的影响
6 SIRNA对DECR1基因5’端上游调控区域转录调控的分析
第四章 讨论
1 猪DECR1基因的分析讨论
1.1 猪DECR1基因转录调控区域生物信息学分析与讨论
1.2 猪DECR1基因转录因子SP1的讨论
2 猪GPR81基因的分析讨论
2.1 猪GPR81基因转录调控区域生物信息学分析与讨论
2.2 猪GPR81基因组织表达谱分析讨论
2.3 猪GPR81基因转录因子PPARγ2的分析讨论
第五章 小结
1 实验结论
2 下一步计划
参考文献
致谢
本文编号：3547762
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
常用中英文縮略词表
第一章 文献综述
1 前言
2 真核生物基因转录因子的研究进展
2.1 转录因子的结构及分类
2.2 转录因子的研究方法
2.3 利用生物信息学技术对转录因子的预测
3 真核生物基因启动子的研究
4 DECR1基因的研究进展
5 GPR81基因的研究进展
6 研究的目的及意义
第二章 实验材料和方法
1 实验材料
1.1 主要的生化试剂和药品
1.2 细胞、菌株和载体及猪基因组DNA
1.3 试剂盒
1.4 组织表达谱分析的样品
1.5 主要的仪器、设备及耗材
1.6 缓冲液和常用试剂的配制
1.7 主要的生物学软件和网站
2 实验方法
2.1 猪GPR81基因组织表达谱分析
2.2 猪DECR1基因和GPR81基因5'端上游调控区域的克隆和生物信息学分析
2.3 猪DECR1基因和GPR81基因近端启动子缺失分析
2.4 进一步对DECR1和GPR81基因启动子进行缺失载体的构建
2.5 定点突变的验证试验
2.6 超表达实验对DECR1基因和GPR81基因5’端上游调控区域转录调控的分析鉴定
2.7 siRNA对DECR1基因5’端上游调控区域转录调控的分析
第三章 实验结果与分析
1 猪GPR81基因组织表达谱分析
1.1 组织总RNA的提取
1.2 反转录的cDNA结果检测
1.3 猪GPR81基因在猪不同组织中的表达结果
2 猪DECR1和GPR81基因5'端上游调控区域的克隆和生物信息学分析
2.1 猪DECR1和GPR81基因5'端上游调控区域的克隆
2.2 猪DECR1和GPR81基因5'端上游调控区域的生物信息学预测
3 猪DECR1基因和GPR81基因近端启动子缺失分析
3.1 猪DECR1、GPR81基因启动子不同缺失片段的构建
3.2 DECR1和GPR81基因启动子缺失片段在不同细胞中活性分析
3.3 第二次对DECR1和GPR81基因启动子进行缺失载体的构建
3.4 DECR1和GPR81基因的第二次构建的缺失片段的活性分析
4 DECR1基因、GPR81基因定点突变分析鉴定
5 超表达实验对DECR1和GPR81基因5'UTR转录调控的分析
5.1 猪GATA1基因CDS全长的克隆及双酶切鉴定
5.2 超表达SP1对DECR1基因5'UTR转录活性的分析鉴定
5.3 超表达猪的GATA1转录因子对GPR81基因启动子活性的影响
5.4 猪PPARγ2基因的超表达对GPR81基因启动子转录活性的影响
6 SIRNA对DECR1基因5’端上游调控区域转录调控的分析
第四章 讨论
1 猪DECR1基因的分析讨论
1.1 猪DECR1基因转录调控区域生物信息学分析与讨论
1.2 猪DECR1基因转录因子SP1的讨论
2 猪GPR81基因的分析讨论
2.1 猪GPR81基因转录调控区域生物信息学分析与讨论
2.2 猪GPR81基因组织表达谱分析讨论
2.3 猪GPR81基因转录因子PPARγ2的分析讨论
第五章 小结
1 实验结论
2 下一步计划
参考文献
致谢
本文编号：3547762
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