猪圆环病毒2型ORF2基因在昆虫细胞中的表达及其免疫特性研究

发布时间：2021-12-23 06:30

　　猪圆环病毒相关疾病（PCVAD）是由猪圆环病毒2型（PCV2）引起的重要传染病之一,临床上可以引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎和肾病综合征（PDNS）、呼吸道疾病、繁殖障碍和先天震颤等多种疾病,给全球的养猪业带来了巨大经济损失。Cap蛋白是PCV2的主要免疫原性蛋白,具有多个表位,是研究PCV2血清学诊断方法和疫苗免疫的重要蛋白。本研究构建了表达PCV2Cap蛋白的重组杆状病毒和昆虫细胞系,并进行了免疫特性研究,为PCV2亚单位疫苗的研究奠定了重要基础。具体研究内容如下：1.表达PCV2Cap蛋白的重组杆状病毒的构建和鉴定本研究以密码子优化的PCV2ORF2基因为基础,设计了6对引物,通过PCR扩增了多种ORF2片段,分别克隆到昆虫杆状病毒表达系统的pFastBac供体质粒上,经PCR、双酶切和测序鉴定得到正确的重组供体质粒。再用该重组供体质粒转化DH10Bac感受态细菌,经两轮蓝白斑筛选和PCR鉴定后,得到了正确的重组Bacmid。在脂质体介导下,用重组Bacmid转染Sf9昆虫细胞,得到了7种重组杆状病毒,SDS-PAGE、Westernblot、间接免疫荧光、夹心... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：97 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PCV2和PCVl基因组编码情况

第一章猪圆环病毒2型研究进展大的开放阅读框，PCV2-0RF1含有945个碱基，PCV1-0RF1含有939个的Rep蛋白与病毒的复制相关，两者的氨基酸序列同源性为86%;而两者同源性则比较低，其中核苷酸序列同源性为67%，氨基酸序列同源性仅为，在PCV2的复制起点存在着近乎一致的特殊结构，即与病毒滚环复制circle replication, RCR)相关的莲环结构[24]，具体结构见图 1-3。-XT.

猪圆环病毒2型0RF2基因在昆虫细胞中的表达及其免疫特性研究的主要结构蛋白，由233个氨基酸构成，分子量约为28KDa。Cap蛋白首先由awagitgul等_证实，他用杆状病毒表达系统得到的Cap蛋白与天然病毒的Cap蛋白小一致；同时纯化的Cap蛋白能够自组装为病毒样颗粒（Vims like particle, VLP)。外，LiuQ等人[3i]利用大肠杆菌表达的0RF2来制备特异性多抗，Western blot分析实0RF2编码PCV的Cap蛋白；通过免疫焚光分析及位点突变分析的研究表明，CV2 Cap蛋白的N端包含一个由41个氨基酸构成的核定位信号序列，其中位于12-18及34-41位的氧基酸残基对PCV2 Cap蛋白的精确定位起着至关重要的作用。最近，eza Khayat等人[9°]解析出了 PCV2病毒样粒子的晶体结构，加深了对Cap蛋白结的了解，具体结构见图1-4。


本文编号：3547974