鸭瘟强毒株和弱毒株在感染鸭体内的动态分析研究

发布时间：2021-12-25 04:39

　　鸭病毒性肠炎（Duck Viral Enteritis，DVE），又名鸭瘟（Duck Plague，DP），是由鸭肠炎病毒（Duck enteritis virus，DEV）引起的常见于鸭、鹅和其他雁形目禽类的一种急性、热性、败血性、高度接触性传染病。主要特征是损伤血管、引起消化道黏膜出血坏死、淋巴器官和实质性脏器出现退行性病变。发病率和死亡率都很高，给养鸭业带来了巨大损失。目前预防和控制DVE的主要措施是疫苗免疫，而研究病毒在动物机体中的分布与增殖规律是阐明病毒致病机理和免疫机理的重要基础，因此有必要建立分子生物学方法研究DEV强毒和弱毒在感染鸭体内的动态分布规律，以阐明DEV强毒的致病机理，同时为进一步合理、有效利用疫苗预防鸭瘟提供依据。本试验根据DEV CSC强毒株及其传代致弱毒株DEV p80的基因序列差异，建立了检测鸭瘟强、弱毒通用型和鸭瘟强、弱毒鉴别型两种SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。结果显示，两种方法建立的标准曲线均具有良好的线性关系，相关系数均为1.0，熔解曲线分析均为特异性单峰，Tm分别为80.5±0℃、81.5±0℃，并且与正常鸭组织以及其他禽源病毒... 

【文章来源】：中国兽医药品监察所北京市

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 引言
    1.1 鸭病毒性肠炎研究进展
        1.1.1 历史
        1.1.2 病原学
        1.1.3 流行病学
        1.1.4 分子生物学进展
        1.1.5 诊断方法
        1.1.6 疫苗预防
    1.2 荧光定量 PCR 研究进展
        1.2.1 实时荧光定量 PCR 技术简介
        1.2.2 实时荧光定量 PCR 的分类
        1.2.3 实时荧光定量 PCR 的几个重要概念
        1.2.4 SYBR Green 实时荧光定量 PCR 原理
        1.2.5 在动物传染病诊断上的应用
    1.3 技术路线
    1.4 本研究目的与意义
第二章 鸭肠炎病毒 SYBR GreenⅠ实时荧光定量 PCR 检测方法的建立
    摘要
    2.1 试验材料
        2.1.1 病毒和菌株
        2.1.2 试验动物
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要试剂配制方法
        2.1.5 主要仪器设备
        2.1.6 试验用材料
    2.2 试验方法
        2.2.1 病毒繁殖
        2.2.2 引物设计
        2.2.3 模板制备
        2.2.4 标准品的制备
        2.2.5 荧光定量引物的设计与合成
        2.2.6 标准曲线的绘制
        2.2.7 特异性试验
        2.2.8 重复性试验
        2.2.9 敏感性试验
    2.3 结果
        2.3.1 gD 基因 PCR 扩增结果
        2.3.2 gI 基因 PCR 扩增结果
        2.3.3 标准质粒 pMD18T-gD 鉴定结果
        2.3.4 标准质粒 pMD18T-gI 鉴定结果
        2.3.5 标准质粒 pMD18T-gD、pMD18T-gI 的测序结果
        2.3.6 荧光定量引物的验证
        2.3.7 标准曲线的绘制
        2.3.8 特异性实验
        2.3.9 重复性实验
        2.3.10 敏感性实验
    2.4 讨论
    2.5 结论
第三章 DEV 强、弱毒在感染鸭体内的动态分布研究
    摘要
    3.1 试验材料
        3.1.1 毒株
        3.1.2 试验动物
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 主要试剂配制方法
        3.1.5 主要仪器
        3.1.6 试验用材料
    3.2 试验方法
        3.2.1 试验动物处理
        3.2.2 样品采集及处理方法
        3.2.3 样品 DNA 的提取
        3.2.4 样品 DNA 检测
        3.2.5 试验结果的数据分析
    3.3 结果
        3.3.1 DEV 强毒 CSC 株在接种鸭体内的动态分布
        3.3.2 DEV 弱毒 p80 株在免疫鸭体内的动态分布
    3.4 讨论
        3.4.1 关于 DEV 强毒 CSC 株在感染鸭体内的动态分布和增殖规律
        3.4.2 关于 DEV 弱毒 p80 株在免疫鸭体内的动态分布和增殖规律
    3.5 结论
第四章 DEV 强毒 CSC 株在 p80 株免疫鸭泄殖腔排毒规律的研究
    摘要
    4.1 试验材料
        4.1.1 毒株
        4.1.2 试验动物
        4.1.3 主要试剂
        4.1.4 主要试剂配制方法
        4.1.5 主要仪器
        4.1.6 试验用材料
    4.2 试验方法
        4.2.1 试验动物处理
        4.2.2 样品采集及处理方法
        4.2.3 样品 DNA 的提取
        4.2.4 样品 DNA 的检测
        4.2.5 试验结果的数据分析
    4.3 结果
        4.3.1 DEVp80 弱毒免疫鸭攻毒 14 d 后死亡情况
        4.3.2 泄殖腔排毒情况
    4.4 讨论
        4.4.1 DEVp80 弱毒免疫鸭攻毒 14 d 后死亡情况
        4.4.2 DEVp80 弱毒免疫鸭攻毒后排毒量检测
    4.5 结论
第五章 结论
参考文献
致谢
附录
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 吴忆春.  动物医学进展. 2013(02)
[2]应用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法检测人工感染雏鸭体内DEV NP基因表达水平[J]. 杨颖,夏梦,殷俊磊,杜海燕,周碧君,文明.  浙江农业学报. 2011(04)
[3]鸭瘟病毒疫苗株在免疫SPF鸭体内的生长动力学检测[J]. 张新富,胡永浩,柳金雄,陈普成,邬丽,姜永萍,陈化兰.  中国兽医科学. 2011(05)
[4]SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测禽呼肠孤病毒δC和δNS基因方法的建立[J]. 熊文婕,谢芝勋,唐熠,谢丽基,刘加波,庞耀姗,邓显文,谢志勤.  广西农业科学. 2010(04)
[5]荧光定量RT-PCR鉴别IBDV超强毒株与经典疫苗毒株[J]. 汪振兴,李树清,孙建和.  上海交通大学学报(农业科学版). 2009(02)
[6]鸡传染性法氏囊病病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 王永强,祁小乐,高宏雷,高玉龙,宇文延青,林欢,秦立廷,宋修庆,王笑梅.  中国预防兽医学报. 2009(01)
[7]应用TaqMan-MGB探针FQ-PCR探讨鸭瘟弱毒苗在鸭体内的分布及排泄规律[J]. 齐雪峰,程安春,汪铭书,杨晓燕,郭宇飞,陈孝跃.  中国兽医学报. 2008(07)
[8]短发夹结构RNA对口蹄疫病毒2B基因瞬时表达的抑制[J]. 崔丽瑾,王兴龙,任林柱,伍晓慧,郎需龙,张辉,梅英武,李晓燕,卜朝阳.  中国兽医学报. 2008(05)
[9]小干扰RNA（siRNA）对马立克氏病淋巴瘤细胞chTERT基因表达的抑制[J]. 邹亚学,孙莹,潘风光,郑梅竹,艾永兴,张玉静.  中国兽医学报. 2008(02)
[10]鸭瘟病毒部分基因的克隆与序列分析[J]. 李玉峰,欧阳文军,周秋平,黄兵,马秀丽,宋敏训,杨汉春.  中国兽医杂志. 2007(03)

博士论文
[1]表达AIV H7HA和H9HA基因重组鸭瘟病毒载体的构建与DNA疫苗研究[D]. 邢明伟.东北林业大学 2007
[2]鸭肠炎病毒部分基因组序列的克隆与分析[D]. 陈淑红.东北农业大学 2006
[3]鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株部分生物学特性的研究及荧光实时定量PCR检测方法的建立和应用[D]. 郭宇飞.四川农业大学 2005



本文编号：3551805