猪S100A12基因转录调控及信号通路研究

发布时间：2021-12-25 04:50

　　副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis, HPS）感染引发猪副猪嗜血杆菌病,高发病率和高死亡率使其成为全球范围内危害养猪业的主要病菌之一。截至目前为止,我们对其发病分子机制及宿主应答机理认识仍不够清晰。本实验室前期对感染HPS的猪脾脏进行转录组测序,发现猪S100A8, S100A9和S100A12基因表达显著上调,用LPS及poly I:C模拟细菌及病毒刺激均能有效引起上述基因的上调表达,并且呈现相同的表达规律。为了揭示这几个基因的功能,本研究选取猪S100A12基因,对其转录调控及信号通路进行功能研究。取得了以下结果：1.运用双荧光素酶报告系统对猪S100A12的转录调控进行研究,结果表明猪S100A12基因受转录因子Sox-5负调控。2. RT-PCR方法检测猪S100A8、S100A9、S100A12和RAGE基因在成年长白猪7个组织及两个猪源细胞系的表达情况,结果表明猪S100A8, S100A9和S100A12基因在脾脏、肺脏中高表达,并且三者呈现一致的表达模式；猪RAGE基因仅在肺组织中高表达。3.在PK-15细胞中S100A12不能通过RAGE信号通路激... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略词表
1 前言
    1.1 研究问题的由来
    1.2 文献综述
        1.2.1 炎症因子
        1.2.2 S100蛋白家族研究进展
        1.2.3 RAGE蛋白研究进展
        1.2.4 S100/RAGE/NF-κB信号通路
    1.3 本研究的目的与意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 样品与细胞
        2.1.2 载体和菌株
        2.1.3 试剂与试剂盒
        2.1.4 主要仪器设备
        2.1.5 主要分子生物学软件、网站和数据库
    2.2 方法
        2.2.1 本研究的技术路线
        2.2.2 细胞培养
        2.2.3 双荧光素酶报告基因检测
        2.2.4 组织表达谱与基因过表达效果定量分析
        2.2.5 激光共聚胶显微镜观察BIFC蛋白互作
        2.2.6 倒置荧光显微镜观察SCT+SNT蛋白互作
3 结果
    3.1 Sox-5负调控猪S1OOA12基因
    3.2 猪S100A8、S100A9、S100A12和RAGE基因组织表达谱及在PK-15细胞过表达效果检测
        3.2.1 猪S100A8、S100A9、S100A12和RAGE基因组织表达谱
        3.2.2 猪S100A8、S100A9、S100A12及RAGE基因在PK-15细胞中过表达效果检测
    3.3 利用双荧光素酶报告载体pNFκB-luc检测NF-κB活性
        3.3.1 猪源细胞系PK-15
        3.3.2 鼠源细胞系C2C12
    3.4 BIFC检测RAGE下游互作蛋白
        3.4.1 RAGE下游候选互作蛋白
        3.4.2 BIFC融合载体的构建
        3.4.3 共聚焦激光扫描显微镜
        3.4.4 BIFC技术后续研究—SCT+SNT系统
4 讨论
    4.1 关于Sox-5负调控S100A12基因表达的讨论
    4.2 关于影响S100/RAGE/NF-κB信号通路的因素
        4.2.1 细胞类型与细胞密度
        4.2.2 TLR4受体
        4.2.3 RAGE蛋白配体间作用
        4.2.4 其他有机物调节
    4.3 关于RAGE下游互作蛋白讨论
        4.3.1 NCK1
        4.3.2 GrB2
        4.3.3 RHOA
    4.4 蛋白互作技术讨论
5 小结
    5.1 本研究的主要结论
    5.2 本研究的特色与创新点
    5.3 本研究的不足与进一步工作的建议
参考文献
附录
攻读学位期间发表论文
致谢



本文编号：3551821