lpxL和lpxM基因对O1、O78血清型禽致病性大肠杆菌毒力的影响
发布时间：2021-12-27 19:47
禽致病性大肠杆菌（Avian pathogenic Escherichia coli,APEC）是引起禽大肠杆菌病重要的病原体,可引起多种禽类发病,形成局部或全身典型的感染症状、病变,给养殖业造成了巨大损失。APEC的抗原结构复杂多样,其中O抗原常作为APEC血清型分型依据,且以O1、O2、O78等优势致病血清型为主。脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）是大肠杆菌细胞壁表面的主要组分,同时也是APEC致病的重要毒力因子,由脂质A、核心多糖和O抗原侧链等不连续的结构区域组成。LPS分子的合成和运输是细菌正常生存的必需条件。脂质A与致病力密切相关,是LPS分子中内毒素活性的基团。脂质A的结构完整性对于APEC的致病性具有重要作用,其合成过程中所涉及的毒力基因目前成为了国内外研究的热点。本研究以APEC优势血清型O1 E516株和O78 E522株为研究对象,针对脂质A合成过程中的两个后期酰基转移酶LpxL和LpxM,通过λ噬菌体Red同源重组技术分别构建了 APEC E516、E522 lpxL和lpxM基因缺失株及回补株,比较其与野生株的生物学特性,进一步分析了lpxL...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１革兰氏阴性菌的细胞膜结构Ｗ??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｃａｒｔｏｏｎ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｇｒａｍ－ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｅｌｌ?ｅｎｖｅｌｏｐｅ＾６】??
第１章／ｐｘＬ、基因缺失株和回补株的构建??ＲｅＥ５１６Ａ／ｐｘＺ、ＲｅＥ５１６Ａ／ｐｘＭ、ＲｅＥ５２２Ａ／／？ｘＺ?和?ＲｅＥ５２２Ａ／／，ｘＭ〇??１．２．３遗传稳定性分析??将获得的缺失株和回补株分别进行连续传代，通过ＰＣＲ鉴定及测序结果比对，分??析菌株的遗传稳定性。??１．３结果??１．３．１?Ｅ５１６、Ｅ５２２菌株血清型鉴定结果??Ｅ５１６与单因子血清０１特异性凝集，对照单因子血清无自凝，确定Ｅ５１６毒株为??０１血清型；Ｅ５２２与单因子血清０７８特异性凝集，对照单因子血清无自凝，确定Ｅ５２２??毒株为０７８血清型。??０．２缺失株和回补株的构建??１．３．２．１?／／；ａ－Ｉ和／／ｕ＇Ｍ基因和氯霉素片段的扩增??／ｐｘＺ、／ｐｘＭ基因在ＡＰＥＣ?Ｅ５１６和Ｅ５２２菌株中均高度保守，序列同源性１００％。以??Ｅ５１６为模板，用引物ＬＬＡ／ＬＬＢ扩增／ｐｘＬ基因，引物ＬＭＡ／ＬＭＢ扩增／ｐｘＭ基因，ＰＣＲ??产物经１％琼脂糖电泳鉴定得到约７００?ｂｐ左右条带，符合预期的基因６８４?ｂｐ?（图??２－２，?１?道）和／ｐｘＭ基因?７１５?ｂｐ?（图?２－２，２?道）。??Ｍ?１?２??Ｍ：?２００?ｂｐ?ＤＮ?Ａ?Ｍａｒｋｅｒ??（引物?ＬＬＡ／ＬＬＢ）??２：?／／７ｘＡ／＿Ａ！｜因片段??１?（引物?ｌｍａ／ｌｍｂ?）??图２－２?和／／；ｘＷ基因的扩增结果??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ／／？．ｖＺ．，?ＩｐｘＭｂｙ?ＰＣＲ??３９??
图２－３氯霉素基因的扩增结果??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃａｔ?ｂｙ?ＰＣＲ??
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡源大肠杆菌的分离鉴定及耐药特性分析[J]. 吴海滨,杨娟,周杰珑,吴培福. 黑龙江畜牧兽医. 2017(10)
[2]kpsE和kpsD双基因缺失显著降低肠道外致病性大肠杆菌的毒力[J]. 高清清,夏乐,刘娟华,高崧,刘秀梵. 微生物学报. 2016(10)
[3]抗革兰氏阴性菌去乙酰化酶LpxC抑制剂设计[J]. 张力夫,阎世英. 青岛大学学报(自然科学版). 2016(02)
[4]猪链球菌2型不同mrp基因型与毒力的关系[J]. 杜德超,于岩飞,马彩凤,姚火春,陆承平,张炜. 微生物学通报. 2016(01)
[5]禽大肠杆菌毒力因子的研究进展[J]. 刘红玉,王君玮,王娟,李玉清,黄秀梅,曲志娜. 中国动物检疫. 2013(10)
[6]禽致病性大肠杆菌研究进展[J]. 马兴树,范翠蝶,夏玉龙. 中国畜牧兽医. 2013(02)
[7]我国部分地区禽病原性大肠杆菌的分离与鉴定[J]. 高崧,刘秀梵,张如宽,焦新安,文其乙,吴长新,唐一鸣,朱晓波,李琮,陈娟,崔力兵,崔洪平. 畜牧兽医学报. 1999(02)
硕士论文
[1]禽致病性大肠杆菌的分离鉴定和分离株毒力基因与致病性相关性研究[D]. 董向磊.扬州大学 2014
[2]禽病原性大肠杆菌E516株与尿道致病性大肠杆菌U56株毒力基因相关性与体内外表达差异的研究[D]. 高清清.扬州大学 2010
本文编号：3552617
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１革兰氏阴性菌的细胞膜结构Ｗ??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｃａｒｔｏｏｎ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｇｒａｍ－ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｅｌｌ?ｅｎｖｅｌｏｐｅ＾６】??
第１章／ｐｘＬ、基因缺失株和回补株的构建??ＲｅＥ５１６Ａ／ｐｘＺ、ＲｅＥ５１６Ａ／ｐｘＭ、ＲｅＥ５２２Ａ／／？ｘＺ?和?ＲｅＥ５２２Ａ／／，ｘＭ〇??１．２．３遗传稳定性分析??将获得的缺失株和回补株分别进行连续传代，通过ＰＣＲ鉴定及测序结果比对，分??析菌株的遗传稳定性。??１．３结果??１．３．１?Ｅ５１６、Ｅ５２２菌株血清型鉴定结果??Ｅ５１６与单因子血清０１特异性凝集，对照单因子血清无自凝，确定Ｅ５１６毒株为??０１血清型；Ｅ５２２与单因子血清０７８特异性凝集，对照单因子血清无自凝，确定Ｅ５２２??毒株为０７８血清型。??０．２缺失株和回补株的构建??１．３．２．１?／／；ａ－Ｉ和／／ｕ＇Ｍ基因和氯霉素片段的扩增??／ｐｘＺ、／ｐｘＭ基因在ＡＰＥＣ?Ｅ５１６和Ｅ５２２菌株中均高度保守，序列同源性１００％。以??Ｅ５１６为模板，用引物ＬＬＡ／ＬＬＢ扩增／ｐｘＬ基因，引物ＬＭＡ／ＬＭＢ扩增／ｐｘＭ基因，ＰＣＲ??产物经１％琼脂糖电泳鉴定得到约７００?ｂｐ左右条带，符合预期的基因６８４?ｂｐ?（图??２－２，?１?道）和／ｐｘＭ基因?７１５?ｂｐ?（图?２－２，２?道）。??Ｍ?１?２??Ｍ：?２００?ｂｐ?ＤＮ?Ａ?Ｍａｒｋｅｒ??（引物?ＬＬＡ／ＬＬＢ）??２：?／／７ｘＡ／＿Ａ！｜因片段??１?（引物?ｌｍａ／ｌｍｂ?）??图２－２?和／／；ｘＷ基因的扩增结果??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ／／？．ｖＺ．，?ＩｐｘＭｂｙ?ＰＣＲ??３９??
图２－３氯霉素基因的扩增结果??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃａｔ?ｂｙ?ＰＣＲ??
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡源大肠杆菌的分离鉴定及耐药特性分析[J]. 吴海滨,杨娟,周杰珑,吴培福. 黑龙江畜牧兽医. 2017(10)
[2]kpsE和kpsD双基因缺失显著降低肠道外致病性大肠杆菌的毒力[J]. 高清清,夏乐,刘娟华,高崧,刘秀梵. 微生物学报. 2016(10)
[3]抗革兰氏阴性菌去乙酰化酶LpxC抑制剂设计[J]. 张力夫,阎世英. 青岛大学学报(自然科学版). 2016(02)
[4]猪链球菌2型不同mrp基因型与毒力的关系[J]. 杜德超,于岩飞,马彩凤,姚火春,陆承平,张炜. 微生物学通报. 2016(01)
[5]禽大肠杆菌毒力因子的研究进展[J]. 刘红玉,王君玮,王娟,李玉清,黄秀梅,曲志娜. 中国动物检疫. 2013(10)
[6]禽致病性大肠杆菌研究进展[J]. 马兴树,范翠蝶,夏玉龙. 中国畜牧兽医. 2013(02)
[7]我国部分地区禽病原性大肠杆菌的分离与鉴定[J]. 高崧,刘秀梵,张如宽,焦新安,文其乙,吴长新,唐一鸣,朱晓波,李琮,陈娟,崔力兵,崔洪平. 畜牧兽医学报. 1999(02)
硕士论文
[1]禽致病性大肠杆菌的分离鉴定和分离株毒力基因与致病性相关性研究[D]. 董向磊.扬州大学 2014
[2]禽病原性大肠杆菌E516株与尿道致病性大肠杆菌U56株毒力基因相关性与体内外表达差异的研究[D]. 高清清.扬州大学 2010
本文编号：3552617
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3552617.html
