猪CCAR1基因细胞定位、表达特性及对细胞增殖的影响

发布时间：2021-12-28 02:15

　　旨在获得猪CCAR1基因的完整CDS序列,研究其亚细胞定位和表达特性,探究其对细胞增殖的影响和作用机制。本研究以1日龄马身猪肾组织cDNA为模板,采用RT-PCR技术分段扩增猪CCAR1基因的CDS区,通过测序和序列拼接获得完整CDS区;采用细胞免疫荧光技术检测CCAR1在PK15细胞中的定位;采用qRT-PCR技术检测猪CCAR1基因的时空表达规律;采用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除PK15细胞的CCAR1基因,通过qRT-PCR、Western blot以及CCK8（cell counting kit 8）技术检测CCAR1基因敲除对细胞增殖能力及细胞增殖和凋亡相关基因表达的影响。结果表明,猪CCAR1基因的完整CDS区长3 459 bp（MH301308.1）,在PK15细胞的细胞质和细胞核中均有表达。大白猪和马身猪不同组织CCAR1的表达谱基本相似,在所检测的组织中均有表达,均表现为在肾和小肠中表达量最高,在脾、肝、小脑和肌肉中呈中度表达,在心和皮下脂肪中低表达;CCAR1基因在大白猪和马身猪初生、3月龄和6月龄3个年龄阶段的两种骨骼肌中也均有表达。CRISPR/Cas... 

【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(11)北大核心CSCD

【文章页数】：14 页

【部分图文】：

RT-PCR扩增结果

经预测,CCAR1蛋白包括5个保守结构域,分别为S1-Like结构域、SPOR super结构域、DBC1结构域、SAP结构域以及SMC_N super结构域(图2);跨膜结构预测发现该蛋白不属于跨膜蛋白(图3);磷酸化位点预测结果表明,CCAR1蛋白存在丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸共3个磷酸化位点,发生在3个 位置上磷酸化修饰的氨基酸残基数分别为36、30和6(图4);亚细胞定位结果表明,73.9%定位于细胞核,13.0%定位于细胞骨架,8.7%定位于线粒体,4.3%定位于细胞质膜(图5)。图3 CCAR1跨膜预测结果

为确定CCAR1在细胞中的表达定位,本研究采用免疫荧光技术在PK15细胞系中检测其亚细胞定位,结果表明,CCAR1蛋白在细胞质和细胞核中均有表达(图6)。图5 CCAR1亚细胞定位预测结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]凋亡相关因子CCAR1、Par-4在胃腺癌中的表达及临床意义[J]. 吕蓉蓉,齐洁敏,陈龙.  承德医学院学报. 2018(06)
[2]Wnt信号通路对细胞增殖的调控[J]. 张宁芳,高鹏飞,成志敏,乐宝玉,郭晓红,李步高,曹果清.  生命科学. 2018(05)
[3]利用CRISPR/Cas9技术构建CREB基因敲除细胞系并探讨CREB对APP基因表达的调控作用[J]. 郭姗姗,张冰莹,何文欣,石晓光,刘昆梅,孙涛,崔建奇.  中国细胞生物学学报. 2017(09)
[4]CARP-1（Cell Division Cycle and Apoptosis Regulator Protein 1）的生物功能和表达模式探究[J]. 贾宝林.  生物化工. 2016(02)

博士论文
[1]CCAR-1通过调节unc-52/perlecan的RNA选择性剪接影响半桥粒结构[D]. 傅容.苏州大学 2017

硕士论文
[1]CCAR-1在中国卤虫胚胎滞育解除过程中的作用[D]. 贾宝林.辽宁师范大学 2016



本文编号：3553202