马立克病病毒编码的miR-M11-5p宿主靶基因的筛选与鉴定
发布时间：2021-12-29 01:56
作为α疱疹病毒的重要成员,马立克病病毒（MDV）感染鸡可引起免疫抑制及快速发作的T细胞淋巴瘤,即马立克病（MD）。此前发现MDV基因组编码大量病毒miRNA,可能在病毒复制、潜伏感染及肿瘤发生中起重要作用。基因敲除miR-M11-5p可显著增强MDV致病性及致瘤性,表明其可能是MD肿瘤抑制因子。为进一步揭示miR-M11-5p介导的调控机制,本研究利用鸡胚成纤维细胞（CEF）总RNA的cDNA为模板,通过hybrid-PCR扩增miR-M11-5p的候选宿主靶基因片段,然后连接至pMD19-T载体、转化至E.coli JM109中构建cDNA文库。对文库菌落进行PCR鉴定、测序分析以及Blast序列对比,共获得77个候选宿主靶基因,其中37个miRNA结合靶点位于候选靶基因的3′-UTR中。进一步通过双荧光素酶报告试验、miR-M11-5p过表达以及RT-qPCR分析,最终鉴定鸡MAFB、LOC776816和RFX7为miR-M11-5p的宿主靶基因。本研究为进一步阐明miR-M11-5p在MDV肿瘤发生中的调控机制奠定了重要基础。
【文章来源】：畜牧兽医学报. 2019,50(05)北大核心CSCD
【文章页数】：13 页
【部分图文】：
图１ｈｙｂｒｉｄ－ＰＣＲ产物凝胶电泳分析Ｍ．ＤＬ２０００ＤＮＡ相对分子质量标准Ｍ．ＤＬ２０００ＤＮＡｍａｒｋｅｒ
５期刘豪丽等：马立克病病毒编码的ｍｉＲ－Ｍ１１－５ｐ宿主靶基因的筛选与鉴定误差线代表三次独立的重复试验；＊．差异性显著（Ｐ＜０．０５）Ｅｒｒｏｒｂａｒｓａｒｅｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｔｈｒｅｅｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ．＊．Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５）图５ＲＴ－ｑＰＣＲ分析ｍｄｖ１－ｍｉＲ－Ｍ１１－５ｐ过表达ＣＥＦ细胞中的靶基因ｍＲＮＡ水平Ｆｉｇ．５ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｔａｒｇｅｔｍＲＮＡｇｅｎｅｓｉｎｍｉＲ－Ｍ１１－５ｐｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｅｄＣＥＦｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙＲＴ－ｑＰＣＲ族的成员。有研究表明，转录因子ＲＦＸ７可限制自然杀伤（ＮＫ）细胞的代谢并促进其维持和免疫，ＲＦＸ７的缺失可导致ＮＫ细胞维持和体内免疫力的降低［２２］。ｍｉＲ－Ｍ１１－５ｐ靶向并抑制ＲＦＸ７基因表达，可能在ＭＤ肿瘤发生过程中细胞吞噬、免疫力发挥重要的负调控作用。综上所述，本研究的数据进一步佐证了笔者之前对ｍｉＲ－Ｍ１１－５ｐ是ＭＤ肿瘤抑制因子的推测，但其抑癌的分子机制仍有待进一步的深入研究。４结论通过ｈｙｂｒｉｄ－ＰＣＲ构建了ｍｉＲ－Ｍ１１－５ｐ的候选靶基因ｃＤＮＡ文库。通过基因克隆和测序分析，从文库中初步获得７７个候选宿主靶基因，其中３７个ｍｉＲＮＡ结合位点位于ｍＲＮＡ基因３′－ＵＴＲ中。通过双荧光素酶报告试验、ｍｉＲＮＡ过表达及ＲＴ－ｑＰＣＲ分析，最终鉴定ＭＡＦＢ、ＲＦＸ７和Ｌ
【参考文献】：
期刊论文
[1]Transcriptional factors, Mafs and their biological roles[J]. Mariko Tsuchiya,Ryoichi Misaka,Kosaku Nitta,Ken Tsuchiya. World Journal of Diabetes. 2015(01)
[2]马立克氏病病毒编码的microRNA:从基因组学到功能研究[J]. 罗俊,滕蔓,樊剑鸣,王方雨,周玲,邓瑞广,张改平. 中国科学:生命科学. 2010(06)
博士论文
[1]Mid基因簇miRNAs在马立克病病毒致病中的潜在功能研究[D]. 滕蔓.甘肃农业大学 2017
[2]马立克氏病病毒miRNA的体内动态表达谱及对病毒基因的自我调控[D]. 赵朴.西北农林科技大学 2016
本文编号：3555167
【文章来源】：畜牧兽医学报. 2019,50(05)北大核心CSCD
【文章页数】：13 页
【部分图文】：
图１ｈｙｂｒｉｄ－ＰＣＲ产物凝胶电泳分析Ｍ．ＤＬ２０００ＤＮＡ相对分子质量标准Ｍ．ＤＬ２０００ＤＮＡｍａｒｋｅｒ
５期刘豪丽等：马立克病病毒编码的ｍｉＲ－Ｍ１１－５ｐ宿主靶基因的筛选与鉴定误差线代表三次独立的重复试验；＊．差异性显著（Ｐ＜０．０５）Ｅｒｒｏｒｂａｒｓａｒｅｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｔｈｒｅｅｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｒｅｐｌｉｃａｔｅｓ．＊．Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５）图５ＲＴ－ｑＰＣＲ分析ｍｄｖ１－ｍｉＲ－Ｍ１１－５ｐ过表达ＣＥＦ细胞中的靶基因ｍＲＮＡ水平Ｆｉｇ．５ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｔａｒｇｅｔｍＲＮＡｇｅｎｅｓｉｎｍｉＲ－Ｍ１１－５ｐｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｅｄＣＥＦｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙＲＴ－ｑＰＣＲ族的成员。有研究表明，转录因子ＲＦＸ７可限制自然杀伤（ＮＫ）细胞的代谢并促进其维持和免疫，ＲＦＸ７的缺失可导致ＮＫ细胞维持和体内免疫力的降低［２２］。ｍｉＲ－Ｍ１１－５ｐ靶向并抑制ＲＦＸ７基因表达，可能在ＭＤ肿瘤发生过程中细胞吞噬、免疫力发挥重要的负调控作用。综上所述，本研究的数据进一步佐证了笔者之前对ｍｉＲ－Ｍ１１－５ｐ是ＭＤ肿瘤抑制因子的推测，但其抑癌的分子机制仍有待进一步的深入研究。４结论通过ｈｙｂｒｉｄ－ＰＣＲ构建了ｍｉＲ－Ｍ１１－５ｐ的候选靶基因ｃＤＮＡ文库。通过基因克隆和测序分析，从文库中初步获得７７个候选宿主靶基因，其中３７个ｍｉＲＮＡ结合位点位于ｍＲＮＡ基因３′－ＵＴＲ中。通过双荧光素酶报告试验、ｍｉＲＮＡ过表达及ＲＴ－ｑＰＣＲ分析，最终鉴定ＭＡＦＢ、ＲＦＸ７和Ｌ
【参考文献】：
期刊论文
[1]Transcriptional factors, Mafs and their biological roles[J]. Mariko Tsuchiya,Ryoichi Misaka,Kosaku Nitta,Ken Tsuchiya. World Journal of Diabetes. 2015(01)
[2]马立克氏病病毒编码的microRNA:从基因组学到功能研究[J]. 罗俊,滕蔓,樊剑鸣,王方雨,周玲,邓瑞广,张改平. 中国科学:生命科学. 2010(06)
博士论文
[1]Mid基因簇miRNAs在马立克病病毒致病中的潜在功能研究[D]. 滕蔓.甘肃农业大学 2017
[2]马立克氏病病毒miRNA的体内动态表达谱及对病毒基因的自我调控[D]. 赵朴.西北农林科技大学 2016
本文编号：3555167
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3555167.html
