抗腺病毒五邻体单抗的制备及双抗夹心ELISA方法的建立

发布时间：2021-12-30 18:13

　　肠道腺病毒主要诱发婴幼儿急性痢疾，是如今诱发导致婴幼儿病毒性腹泻的仅次于轮状病毒的病原体。如腺病毒40和41型腺病毒，该病毒被确认为主要因素依然引起小儿腹泻。因此针对该病毒进行快速、灵敏的检测方法是预防该疾病的和控制该病的关键所在，本研究制备了抗腺病毒五邻体单克隆抗体，并对其生物特性进行了研究分析和鉴定，创立了双抗夹心ELISA方法，为该病毒的检测及防控供给了有用的检测措施。具体研究情况如下：抗腺病毒五邻体单克隆抗体的制备及鉴定：采用基因工程表达抗原所表达的腺病毒五邻体作为抗原对BALB/c小鼠进行免疫，三后免疫小鼠脾淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，并以腺病毒五邻体蛋白为筛选抗原对融合后的杂交瘤细胞进行间接ELISA筛选。获得了5株稳定分泌抗腺病毒五邻体单抗的细胞株，标记为3C4、4C4、4D7、4F2和4H3。4D7免疫球蛋白亚类为IgG2a，其余4株为IgG1。对5株细胞连续3个月体外传代实验和小鼠腹水连续传代实验，5株细胞都能持续稳定分泌单克隆抗体，上清及小鼠腹腔腹水效价在细胞培养中的间接ELISA，细胞培养上清中稳定在2000左右，小鼠腹腔腹水效价稳定维持在200000以上，且与引发... 

【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
SUMMARY
英汉对照表
前言
第一章 文献综述
    1. 腺病毒的基本特征
        1.1 病毒的分类
        1.2 病毒的结构和功能
        1.3 腺病毒的受体
        1.4 病毒的转录和复制
    2. 腺病毒的感染与致病性
        2.1 腺病毒的感染
        2.2 流行病学
        2.3 致病机理
        2.4 临床表现
    3. 腺病毒的检测方法
        3.1 细胞培养
        3.2 电镜
        3.3 抗原检测
        3.4 组织病理学
        3.5 核酸测定
    4. 抗腺病毒治疗
        4.1 合成类药物抗腺病毒
        4.2 中药抗腺病毒
        4.3 抗腺病毒单克隆抗体
    5. 单克隆抗体研究进展
        5.1 传统的杂交瘤技术
        5.2 单克隆抗体制备技术的最新进展
        5.3 单克隆抗体的应用
        5.4 展望
第二章 抗腺病毒五邻体单克隆抗体的制备及鉴定
    1. 材料
        1.1 菌株、腺病毒五邻体抗原、细胞及实验动物
        1.2 主要仪器设备
        1.3 主要试剂
        1.4 试剂配制
    2. 实验方法
        2.1 免疫动物
        2.2 抗体筛选间接ELISA检测方法的建立
        2.3 细胞融合
        2.4 阳性杂交瘤细胞株的筛选与克隆
        2.5 单克隆抗体制备
        2.6 单克隆抗体的纯化
        2.7 单克隆抗体生物学特性鉴定
    3. 结果
        3.1 单克隆抗体筛选间接ELISA方法的建立
        3.2 细胞融合及其杂交瘤细胞株的建立
        3.3 单抗的纯化
        3.4 单克隆抗体的SDS-PAGE鉴定结果
        3.5 单克隆抗体生物学特性鉴定结果
        3.6 单克隆抗体亚类测定
        3.7 抗原识别位点分析
        3.8 稳定性分析
        3.9 杂交瘤细胞染色体计数
    4. 讨论
第三章 腺病毒五邻体双抗体夹心ELISA检测方法的建立
    1. 材料
        1.1 主要试剂及其配制
        1.2 主要仪器及其设备
    2. 实验方法
        2.1 单克隆抗体的浓缩
        2.2 酶标抗体的制备
        2.3 双抗夹心法建立
        2.4 双抗夹心法特异性鉴定
    3. 实验结果
        3.1 捕获抗体及酶标抗体最适工作浓度的确定
        3.2 双抗夹心法特异性鉴定
    4. 讨论
第四章 结论
参考文献
个人简介
在研期间发表论文
导师简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]5种病毒性脑炎相关RNA病毒多重RT-PCR检测方法的初步建立[J]. 孔祥军,申镇维,吴蕊,李宝辉,陈虎,何继红,赵连利,于庆杰,姬春雪.  中国生物制品学杂志. 2014(01)
[2]免疫组织化学技术常见问题分析及改进措施[J]. 徐彤.  中外医学研究. 2013(18)
[3]黄芪甲苷体外抗腺病毒作用研究[J]. 商蕾,曲章义,宁莉莉,王迎晨,魏凤香,高虹,鲁伟君.  中国药理学通报. 2013(06)
[4]80例成人腺病毒B组55型感染临床分析[J]. 谢杨新,涂波,陈威巍,周志平,聂为民,王传力,秦恩强,李文刚,赵敏.  传染病信息. 2013(01)
[5]单克隆抗体制备技术的改进[J]. 李丽英.  内江科技. 2013(02)
[6]McAb制备及其表达系统的研究进展[J]. 刘瀛,汤仁仙,付琳琳,孔德龙.  医学综述. 2013(01)
[7]穿心莲内酯磺化物体外抗腺病毒药效学研究[J]. 平静,王思源,谢宁,陈晓,王雪峰.  中国实验方剂学杂志. 2012(21)
[8]中药及其活性成分抗腺病毒研究进展[J]. 商蕾,曲章义,魏凤香,鲁伟君.  中草药. 2012(10)
[9]南京地区2010～2011年度呼吸道感染患儿腺病毒的流行病学研究[J]. 高小倩,金玉,谢志萍,高寒春,谢乐云,张健,段招军.  病毒学报. 2012(05)
[10]哈尔滨地区住院患者呼吸道病毒感染的病原学研究[J]. 黄冬娟,孙颖,齐桂云,唐艳红,王瑞琨,郭薇媛,曲章义.  哈尔滨医科大学学报. 2012(02)



本文编号：3558728