鉴别猪流行性腹泻病毒变异与经典毒株的单克隆抗体的制备与鉴定

发布时间：2021-12-30 22:55

　　猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）引起的猪流行性腹泻是危害养猪（Sus scrofa）生产的具有高度接触传染性的重要肠道传染病,血清学检测技术是临床调查PEDV感染状态及该病毒相关研究的重要手段,然而目前尚无鉴别PEDV变异毒株与经典毒株的血清学检测技术。单克隆抗体（monoclonal antibody, McAb）是血清学检测或诊断技术研究的重要实验材料,为了制备鉴别PEDV变异毒株与经典毒株的单克隆抗体,应用DNAMAN和DNAStar7.1软件比较分析了PEDV变异毒株与经典毒株的纤突（spike, S）蛋白核苷酸序列与氨基酸序列,筛选并合成了变异毒株与经典毒株S蛋白氨基酸序列之间的差异序列55IGENQGVNSTWYCAGRHPTAS75。将该多肽偶联钥孔戚血蓝蛋白（keyhole limpet haemocyanin, KLH）后免疫BALB/c小鼠（Mus musculus）,利用细胞融合技术,经过3次克隆筛选和间接酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA... 

【文章来源】：农业生物技术学报. 2020,28(06)北大核心CSCD

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【部分图文】：

PEDV变异毒株与经典毒株S蛋白氨基酸序列的比对分析

IFA检测显示，在PEDV变异毒株感染的Vero-81细胞的胞浆内可见绿色荧光，而阴性对照细胞的胞浆内无绿色荧光(图5)。该结果表明，McAb 3#与PEDV变异毒株发生了特异性结合。进一步通过IFA，用抗PEDV-N蛋白单克隆抗体A7和McAb 3#分别检测感染经典弱毒株CV777和变异毒株HBQY2016的Vero-81细胞，发现单克隆抗体A7与变异毒株HBQY2016或经典弱毒株CV777均能够结合，在感染细胞的细胞浆内出现绿色荧光。然而McAb 3#仅在变异株感染细胞的细胞浆内出现清晰的荧光信号，在感染经典毒株细胞的细胞浆内无荧光信号(图6)。该结果表明，McAb 3#可以区分PEDV变异毒株和经典毒株，提示以此抗体为实验材料，可以进一步开展鉴别PEDV变异毒株与经典毒株感染的血清学检测技术的研究。图3 3#杂交瘤细胞诱生的腹水抗体效价

3#杂交瘤细胞诱生的腹水抗体效价

【参考文献】：
期刊论文
[1]猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 张庆桥,王一鹏,魏艳秋,米建华,赵雪,孙立旦,宋勤叶.  中国兽医杂志. 2019(01)
[2]猪流行性腹泻病毒HBMC2012株的分离鉴定及其致病性研究[J]. 朱卫霞,郭海勇,陈立功,李艳琴,宋勤叶,李潭清,赵丹萍.  中国预防兽医学报. 2016(12)



本文编号：3559121