ETEC K99、987P抗体PPA-ELISA检测方法的建立及基因工程菌K88-K99高密度发酵工艺的研究

发布时间：2021-12-30 23:53

　　为了能够快速检测ETEC菌毛蛋白K99及测定其免疫效价，以纯化的大肠埃希菌K99菌毛蛋白为包被抗原，建立了检测大肠埃希菌K99IgG抗体的间接ELISA方法。确定了间接ELISA的最适反应条件，即抗原包被的ELISA板4℃过夜，最适抗原包被浓度为4.94μg/mL，兔抗体稀释倍数为1:50，猪抗体稀释倍数为1：200，确定最佳封闭液为100g/L脱脂奶粉，最佳封闭时间为0.5h，血清反应时间为1h，二抗最适浓度梯度为1:2000，反应时间为37℃0.5h，底物室温反应时间为37℃10min，阴阳性临界值兔血清为0.25、猪血清为0.35。以纯化的大肠埃希菌987P菌毛蛋白为包被抗原，建立了检测大肠埃希菌987PIgG抗体的间接ELISA方法。确定了间接ELISA的最适反应条件，即抗原包被的ELISA板4℃过夜，最适抗原包被浓度为27.44μg/mL，自制兔抗血清稀释倍数为1:10，猪抗体稀释倍数为1：200，确定最佳封闭液为100g/L脱脂奶粉，最佳封闭时间为0.5h，血清反应时间为1.5h，二抗最适浓度梯度为1:2000，反应时间为37℃0.5h，底物室温反应时间为37℃20min，... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

纯化K99菌毛蛋白的5DS-PAGE电泳分析

纯化587P崖毛蛋白的}}PAGE申脉分析

蛋白表达效果

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3559212