Scriptaid对水牛体细胞克隆效率的影响及其相关分子机理的研究

发布时间：2021-12-31 05:51

　　体细胞克隆技术是一种具有广阔应用前景的家畜遗传改良技术,故而成为当今生物技术的研究热点。然而,目前体细胞克隆的效率还很低,主要表现在克隆胚胎发育率低,移植后妊娠率低、流产率高、胎盘异常或出生儿体重过大等问题,使得体细胞克隆技术在实际生产应用中受到限制。有研究表明,异常的表观遗传修饰是克隆胚胎效率低的主要原因,而组蛋白乙酰化和DNA甲基化修饰是表观遗传修饰的两个重要方面。因此,本研究系统探讨了组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid对水牛体细胞核移植重构胚发育潜能及胚胎表观遗传修饰的影响及其对克隆胚胎合子基因激活的影响,同时研究了Scriptaid对水牛转基因效果的影响,以期进一步提高水牛体细胞克隆和转基因克隆的效率。具体的研究结果如下。1.本研究首先采用醋酸地衣红染色法确定了水牛卵母细胞不同成熟培养时间的核相分布情况,然后利用细胞免疫组化技术和定量PCR技术分别分析水牛卵母细胞组蛋白乙酰化修饰的情况,并探讨Scriptaid对卵母细胞组蛋白乙酰化修饰的影响,从而建立一种检测水牛卵母细胞组蛋白乙酰化修饰相关蛋白和基因表达的技术方法。结果显示：体外成熟培养0h时大约91.8%的卵母细胞处于... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

【文章页数】：121 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 表观遗传修饰在哺乳动物卵母细胞和核移植胚胎中的研究进展
    1 核移植技术的研究进展
        1.1 影响动物核移植效率的因素
        1.2 影响核移植效率的分子机制
    2 组蛋白修饰和DNA甲基化的研究进展
        2.1 组蛋白修饰(histone modifications)
        2.2 DNA甲基化(DNA methylation)
    3 提高核移植重编程的方法
        3.1 改变组蛋白乙酰化水平
        3.2 改变DNA甲基化水平
        3.3 母源向合子型转换
        3.4 蛋白交换
        3.5 蛋白酶体的抑制
    4 组蛋白乙酰化修饰在哺乳动物卵母细胞成熟过程中的研究
        4.1 组蛋白乙酰化修饰在卵母细胞成熟过程中的变化规律
        4.2 组蛋白乙酰化修饰在哺乳动物卵母细胞中的功能调节
    5 转基因动物的生产方法
        5.1 原核注射法
        5.2 体细胞克隆法
        5.3 胚胎干细胞介导法
        5.4 胞质注射法
    6 核移植技术的应用前景
        6.1 拯救濒危动物
        6.2 胚胎移植前优良胚胎选择成为可能
        6.3 生产转基因动物
        6.4 研究生殖细胞表观修饰的机制
    7 展望
第二章 水牛卵母细胞组蛋白乙酰化修饰相关蛋白与基因表达水平的分析
    摘要
    前言
    1 试验材料与方法
        1.1 试验材料
        1.2 试验方法
        1.3 试验设计
        1.4 数据统计与分析
    2 试验结果
        2.1 水牛卵母细胞在体外成熟过程中核相分布的情况
        2.2 水牛卵母细胞体外成熟过程中各个时期组蛋白(H3K18)乙酰化修饰的变化规律
        2.3 水牛卵母细胞体外成熟过程中各个时期组蛋白乙酰化修饰相关基因表达水平的变化情况
    3 分析与讨论
    4. 结论
第三章 Scriptaid处理水牛核移植胚胎对其发育能力及组蛋白乙酰化修饰的影响
    摘要
    前言
    1 试验材料和方法
        1.1 试验材料
        1.2 试验方法
        1.3 试验设计
        1.4 数据统计与分析
    2 试验结果
        2.1 不同浓度的Scriptaid对水牛核移植胚胎发育能力的影响
        2.2 Scriptaid处理不同的时间对水牛核移植胚胎发育能力的影响
        2.3 Scriptaid处理水牛核移植胚胎对其组蛋白H3K18乙酰化修饰的影响
        2.4 Scriptaid处理水牛核移植胚胎对胚胎整体DNA甲基化修饰的影响
        2.5 Scriptaid处理水牛核移植胚胎对胚胎组蛋白乙酰化修饰相关基因表达的影响
        2.6 Scriptaid处理水牛核移植胚胎对胚胎整体DNA甲基化修饰相关基因表达的影响
        2.7 Scriptaid处理水牛核移植胚胎对胚胎发育相关基因表达的影响
    3. 分析与讨论
    4 结论
第四章 Scriptaid对水牛核移植胚胎合子基因激活的影响
    摘要
    前言
    1 试验材料和方法
        1.1 试验材料
        1.2 试验方法
        1.3 试验设计
        1.4 数据统计与分析
    2 试验结果
        2.1 水牛体外受精胚胎发育阻滞时期的确定
        2.2 Scriptaid处理对水牛核移植胚胎核仁超微结构的影响
        2.3 Scriptaid处理水牛核移植胚胎对核蛋白RNA Pol Ⅱ表达的影响
        2.4 Scriptaid处理水牛核移植重构胚对胚胎核仁纤维蛋白表达的影响
        2.5 Scriptaid对水牛核移植胚胎合子基因启动的标志基因表达的影响
    3 分析与讨论
    4 结论
第五章 Scriptaid处理水牛转基因供体细胞及核移植胚胎对其转基因效率的影响
    摘要
    前言
    1 试验材料与方法
        1.1 试验材料
        1.2 试验方法
        1.3 试验设计
        1.4 数据分析
    2 试验结果
        2.1 Scriptaid处理对转PRL基因水牛胎儿成纤维细胞形态和GFP蛋白表达的影响
        2.2 Scriptaid处理对转PRL基因水牛胎儿成纤维细胞GFP基因表达水平的影响
        2.3 Scriptaid处理对转PRL基因水牛胎儿成纤维细胞中GFP-阳性细胞数的影响
        2.4 Scriptaid处理对转PRL基因水牛胎儿成纤维细胞中EF-1A启动子区的甲基化状态的影响
        2.5 Scriptaid处理对水牛转基因核移植胚胎发育能力的影响
        2.6 Scriptaid处理对水牛转基因核移植胚胎移植效果的影响
    3 分析与讨论
    4 结论
参考文献
附件
附图
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致谢
攻读博士期间发表文章


【参考文献】：
期刊论文
[1]TSA促进转基因猪体细胞核移植胚胎发育和外源基因表达[J]. 孔庆然,朱江,黄波,郇延军,王峰,石永乾,刘仲凤,武美玲,刘忠华.  遗传. 2011(07)
[2]Delay of ZGA initiation occurred in 2-cell blocked mouse embryos[J]. JIA JING QIU,WU WEN ZHANG,ZHI Li WU,YI HONG WANG,MIN QIAN,YI PING LIInstitute,of Biochemistry and Cell Biology,Shanghai Institutes for Biological Sciences. Chinese Academy of Sciences,200031 Shanghai,ChinaSchool of Life Science,East China Normal University. 200062 Shanghai,China.  Cell Research. 2003(03)
[3]卵丘细胞对牛卵母细胞体外成熟和体外受精的影响[J]. 杨膺白,卢克焕.  广西农业大学学报. 1994(01)

博士论文
[1]卵母细胞体外成熟及人胚胎玻璃化冷冻的研究[D]. 冯贵雪.广西大学 2006

硕士论文
[1]水牛供体细胞组蛋白乙酰化与核移植胚胎发育能力相关性的研究[D]. 罗婵.广西大学 2007



本文编号：3559732