朊病毒感染脑组织低丰度细胞因子筛选及其与朊病毒病相关性初探

发布时间：2022-01-01 18:04

　　朊病毒感染后可观察到中枢神经系统炎症细胞的活化和多种细胞因子的含量升高,但一些低丰度和不常见的细胞因子却鲜有报道。为了评估朊病毒感染过程中罕见细胞因子的潜在变化,我们利用Luminex方法分析筛选了感染不同羊瘙痒因子的小鼠脑组织17种细胞因子的含量。结果发现干扰素诱导的蛋白10（IP10）、角质形成细胞趋化因子（KC）和巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）在朊病毒感染小鼠脑组织中含量上调,随后利用三种细胞因子的商品化ELISA试剂盒和特异性免疫组织化学方法进行了验证。通过特异性荧光定量PCR方法检测IP10、M-CSF和KC,发现三种细胞因子在朊病毒感染小鼠终末期脑组织中的转录水平异常升高,应用数字PCR技术确认了IP10在多种羊瘙痒因子感染小鼠脑组织中转录水平上调。对朊病毒感染后不同时间点采集的脑组织进行动态分析发现,三种细胞因子的含量随病程呈时间依赖性增加,在感染终末期动物脑组织中IP10含量的增加尤为明显。此外,研究发现45例散发型克-雅病患者脑脊液中IP10的含量虽然组内差异较大,但整体明显高于非朊病毒病患者。为揭示IP10与朊病毒病之间的关系及其在中枢神经系统的分布规律,我们利... 

【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省

【文章页数】：110 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

ELISA方法分析IP10、KC、M-CSF在不同朊病毒感染小鼠脑组织中的水平（n=3）

结果与分析49种Balb/c小鼠，且具有统计学差异。上述结果提示IP10、KC、M-CSF在朊病毒感染终末期动物模型脑组织中的转录水平显著升高（图3-2A）。为了进一步的验证朊病毒感染后细胞因子IP10、KC、M-CSF转录水平的变化，我们选取了在荧光定量PCR检测中转录水平变化最显著的IP10按照实验步骤2.2.8进行数字PCR的检测，结果显示，以双蒸水为基线，IP10在健康对照组的平均拷贝数为0.1cp/μL，在羊瘙痒症感染因子139A和ME7感染C57BL/6小鼠终末期的脑组织中的平均拷贝数分别为2.31cp/μL和9.91cp/μL，IP10在朊病毒感染小鼠终末期脑组织的转录水平显著升高，具有统计学差异（图3-2B）。图3-2RT-PCR及数字PCR方法分析IP10、KC、M-CSF在不同朊病毒毒株感染小鼠模型中转录水平（n=3）Fig.3-2ComparativeanalysisofthebraintranscriptionallevelsofIP10,KCandM-CSFinvariousscrapieinfectedmousemodelswithReal-timePCR(A)andDigitalPCR(B)（n=3）.

结果与分析51图3-3免疫组织化学分析IP10、KC、M-CSF在羊瘙痒因子139A感染小鼠脑组织中的分布特征（100倍，n=3，白色箭头为阳性信号）Fig.3-3IHCassaysofthedistributionsofIP10(A),KC(B)andM-CSF(C)incorticalregionsof139A-infectedmousemodels(100×,n=3,Thewhitearrowisapositivesignal).3.1.5朊病毒感染过程中脑组织IP10、KC、M-CSF的动态表达水平为进一步验证朊病毒感染过程中IP10、KC、M-CSF的动态变化规律，本研究选取了羊瘙痒因子139A、ME7感染C57小鼠第86天、117天、147天、183天的脑组织进行分析，同时利用Luminex200方法和ELISA进行平行检测。Luminex检测结果显示，在羊瘙痒因子139A、ME7感染C57小鼠的第86天、117天、147天、183天脑组织中IP10的含量持续升高，117天时脑组织IP10的含量呈现显著升高的趋势，147天时ME7感染的脑组织和183天时139A感染的脑组织中含量虽有下降，但

【参考文献】：
期刊论文
[1]散发性克-雅氏病患者脑脊液中抗炎性细胞因子IL-4水平的检测[J]. 樊丽超,赵节绪,王东升,左秀美,南善姬.  中风与神经疾病杂志. 2006(06)



本文编号：3562559