Wnt/β-catenin信号通路相关基因在绒山羊绒毛周期性再生及着色过程中的表达分析
发布时间：2022-01-02 00:00
本论文旨在通过检测Wnt/β-catenin信号通路相关基因mRNA在绒山羊绒毛周期性再生及着色过程中的表达，为进一步探究并阐明Wnt/β-catenin信号通路在绒毛周期性再生及着色过程中的作用及分子机理奠定基础。本论文克隆Wnt/β-catenin信号通路中与毛干长度相关的基因Wnt3，并对其核苷酸、编码氨基酸序列进行生物信息学分析及原核表达；采取实时荧光定量技术对Wnt/β-catenin信号通路上游基因Wnt3、β-catenin、Lef1/Tcf3及Dkk1基因mRNA在白色绒山羊绒毛生长不同时期及黑、白色绒山羊绒毛生长旺盛期时体侧部皮肤组织中的相对表达量进行测定；采用实时荧光定量技术对Wnt/β-catenin信号通路中与毛色相关的靶基因MITF、ASIP及TYR家族基因mRNA在黑、白绒山羊绒毛生长旺盛时体侧部皮肤组织中的表达量进行检测。试验结果如下：（1）绒山羊Wnt3基因CDS区全长1068bp，共编码355个氨基酸；不同物种间Wnt3基因CDS区序列相似性极高（90%以上）；编码多肽分子式为C1733H2688N508O510S29,分子量约为40kDa，等电点为7...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 调控毛囊生长发育信号通路研究进展
1.1 前言
1.2 毛囊生理学
1.3 调控毛囊发育相关通路研究进展
1.3.1 Wnt/β-catenin 信号通路
1.3.2 BMP 信号通路
1.3.3 SHH 信号通路
1.3.4 Notch 信号通路
1.4 研究问题的提出及拟解决的问题
1.4.1 研究问题的提出
1.4.2 本文拟研究的问题
第二章 Wnt3 基因 CDS 区克隆、生物信息分析及原核表达
2.1 材料与试剂
2.1.1 试验材料
2.1.2 实验试剂与菌株
2.1.3 主要实验仪器
2.2 Wnt3 基因 CDS 区克隆
2.2.1 皮肤组织 RNA 的提取及质量、浓度检测
2.2.2 第一链 cDNA 的合成
2.2.3 Wnt3 基因 CDS 区克隆引物设计
2.2.4 RT-PCR 扩增绒山羊 Wnt3 基因 CDS 区
2.2.5 绒山羊 Wnt3 基因 CDS 区的电泳检测
2.2.6 绒山羊 Wnt3 基因 CDS 区克隆及测序
2.2.7 Wnt3 基因 CDS 区及编码蛋白质生物信息学分析
2.3 绒山羊 Wnt3 基因编码蛋白的原核表达
2.3.1 Wnt3 原核表达引物的设计
2.3.2 重组质粒的构建
2.3.3 绒山羊 Wnt3 基因编码蛋白的诱导原核表达及检测
2.4 结果与分析
2.4.1 皮肤组织总 RNA 的提取
2.4.2 Wnt3 基因 CDS 区的克隆
2.4.3 绒山羊 Wnt3 基因及其编码氨基酸生物信息学分析
2.4.4 Wnt3 基因的原核表达
2.5 讨论
2.6 小结
第三章 Wnt/β-catenin 信号通路上游基因在绒毛周期性再生及着色过程中表达分析
3.1 材料和方法
3.1.1 样品采集
3.1.2 主要试剂与仪器
3.1.3 皮肤组织总 RNA 提取及 cDNA 第一链合成
3.1.4 Wnt/β-catenin 通路上游基因在不同月份绒山羊皮肤组织中的表达
3.1.5 Wnt/β-catenin 通路上游基因在不同毛色绒山羊皮肤组织中的表达
3.1.6 数据统计分析
3.2 结果与分析
3.2.1 Wnt/β-catenin 信号通路上游基因在不同月份绒山羊皮肤中的表达
3.2.2 Wnt/β-catenin 信号通路上游基因在不同毛色绒山羊皮肤中的表达
3.3 讨论
3.3.1 Wnt/β-catenin 信号通路在绒山羊绒毛周期性再生的作用
3.3.2 Wnt/β-catenin 信号通路在绒山羊绒毛着色过程中的作用
3.4 小结
第四章 MITF、ASIP 及 TYR 家族基因在黑色和白色绒山羊皮肤组织中的表达
4.1 材料和方法
4.1.1 试验材料
4.1.2 主要试剂与仪器
4.1.3 皮肤组织总 RNA 提取及 cDNA 第一链合成
4.1.4 MITF、ASIP 及 TYR 家族等基因在不同毛色绒山羊皮肤组织中的表达
4.1.5 数据统计分析
4.2 结果与分析
4.2.1 皮肤组织 RNA 的提取
4.2.2 MITF、ASIP 及 TYR 家族基因在不同毛色绒山羊皮肤组织中的表达
4.3 讨论
4.3.1 MITF 基因 mRNA 表达量与绒毛颜色关系
4.3.2 ASIP 基因 mRNA 表达量与绒毛颜色关系
4.3.3 TYR 家族基因 mRNA 表达与绒毛颜色关系
4.4 小结
结论
5.1 结论
5.2 需要进一步研究的问题
参考文献
附录
附录 1 皮肤组织 RNA 的提取
附录 2 cDNA 第一链合成
附录 3 凝胶回收
附录 4 感受态细胞制备
附录 5 TA 克隆
附录 6 质粒提取
附录 7 诱导原核表达
附录 8 SDS-PAGE 凝胶电泳
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]过表达Wnt3基因抑制肝前体细胞凋亡[J]. 张锡峰,胡代曦,张超,钟沁,冯涛,黄佳祎. 南方医科大学学报. 2014(01)
[2]论我国山羊绒产业发展的思路与对策[J]. 程广燕. 中国畜牧杂志. 2011(16)
[3]毛囊黑素谱系细胞中β-catenin在毛囊周期中的表达[J]. 邓芳,郭海英,连小华,杨恬. 第三军医大学学报. 2011(08)
[4]内蒙古绒山羊毛囊发育不同时期皮肤中BMP4基因的表达[J]. 吴江鸿,张文广,李金泉,闫祖威. 黑龙江畜牧兽医. 2009(23)
[5]中国绒山羊业发展现状、前景与对策[J]. 周占琴. 中国畜牧杂志. 2008(04)
[6]内蒙古罕山白绒山羊毛囊生长规律的研究[J]. 金凤,李金泉,刘东军,乌云格日乐,韩强. 中国草食动物. 2008(01)
[7]骨形态发生蛋白2（BMP2）基因在内蒙古绒山羊不同时期皮肤毛囊中的表达[J]. 苏蕊,李金泉,张文广,尹俊,赵珺,常子丽. 中国农业科学. 2008(02)
[8]Agouti在不同颜色被毛羊驼皮肤组织中的表达[J]. 姜俊兵,赵志军,贺俊平,谢建山,董常生. 畜牧与兽医. 2007(04)
[9]我国山羊绒生产现状及山羊绒标准中存在的问题浅析[J]. 郭天芬,王欣荣,高雅琴. 畜牧兽医科技信息. 2007(01)
[10]内蒙古绒山羊105d胎儿皮肤的基因表达[J]. 尹俊,李金泉,郭志成,李长青,张燕军. 畜牧兽医学报. 2005(11)
硕士论文
[1]Wnt通路关键基因在绒山羊绒毛生长一个周期中的表达研究[D]. 刘维.内蒙古农业大学 2010
本文编号：3563072
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 调控毛囊生长发育信号通路研究进展
1.1 前言
1.2 毛囊生理学
1.3 调控毛囊发育相关通路研究进展
1.3.1 Wnt/β-catenin 信号通路
1.3.2 BMP 信号通路
1.3.3 SHH 信号通路
1.3.4 Notch 信号通路
1.4 研究问题的提出及拟解决的问题
1.4.1 研究问题的提出
1.4.2 本文拟研究的问题
第二章 Wnt3 基因 CDS 区克隆、生物信息分析及原核表达
2.1 材料与试剂
2.1.1 试验材料
2.1.2 实验试剂与菌株
2.1.3 主要实验仪器
2.2 Wnt3 基因 CDS 区克隆
2.2.1 皮肤组织 RNA 的提取及质量、浓度检测
2.2.2 第一链 cDNA 的合成
2.2.3 Wnt3 基因 CDS 区克隆引物设计
2.2.4 RT-PCR 扩增绒山羊 Wnt3 基因 CDS 区
2.2.5 绒山羊 Wnt3 基因 CDS 区的电泳检测
2.2.6 绒山羊 Wnt3 基因 CDS 区克隆及测序
2.2.7 Wnt3 基因 CDS 区及编码蛋白质生物信息学分析
2.3 绒山羊 Wnt3 基因编码蛋白的原核表达
2.3.1 Wnt3 原核表达引物的设计
2.3.2 重组质粒的构建
2.3.3 绒山羊 Wnt3 基因编码蛋白的诱导原核表达及检测
2.4 结果与分析
2.4.1 皮肤组织总 RNA 的提取
2.4.2 Wnt3 基因 CDS 区的克隆
2.4.3 绒山羊 Wnt3 基因及其编码氨基酸生物信息学分析
2.4.4 Wnt3 基因的原核表达
2.5 讨论
2.6 小结
第三章 Wnt/β-catenin 信号通路上游基因在绒毛周期性再生及着色过程中表达分析
3.1 材料和方法
3.1.1 样品采集
3.1.2 主要试剂与仪器
3.1.3 皮肤组织总 RNA 提取及 cDNA 第一链合成
3.1.4 Wnt/β-catenin 通路上游基因在不同月份绒山羊皮肤组织中的表达
3.1.5 Wnt/β-catenin 通路上游基因在不同毛色绒山羊皮肤组织中的表达
3.1.6 数据统计分析
3.2 结果与分析
3.2.1 Wnt/β-catenin 信号通路上游基因在不同月份绒山羊皮肤中的表达
3.2.2 Wnt/β-catenin 信号通路上游基因在不同毛色绒山羊皮肤中的表达
3.3 讨论
3.3.1 Wnt/β-catenin 信号通路在绒山羊绒毛周期性再生的作用
3.3.2 Wnt/β-catenin 信号通路在绒山羊绒毛着色过程中的作用
3.4 小结
第四章 MITF、ASIP 及 TYR 家族基因在黑色和白色绒山羊皮肤组织中的表达
4.1 材料和方法
4.1.1 试验材料
4.1.2 主要试剂与仪器
4.1.3 皮肤组织总 RNA 提取及 cDNA 第一链合成
4.1.4 MITF、ASIP 及 TYR 家族等基因在不同毛色绒山羊皮肤组织中的表达
4.1.5 数据统计分析
4.2 结果与分析
4.2.1 皮肤组织 RNA 的提取
4.2.2 MITF、ASIP 及 TYR 家族基因在不同毛色绒山羊皮肤组织中的表达
4.3 讨论
4.3.1 MITF 基因 mRNA 表达量与绒毛颜色关系
4.3.2 ASIP 基因 mRNA 表达量与绒毛颜色关系
4.3.3 TYR 家族基因 mRNA 表达与绒毛颜色关系
4.4 小结
结论
5.1 结论
5.2 需要进一步研究的问题
参考文献
附录
附录 1 皮肤组织 RNA 的提取
附录 2 cDNA 第一链合成
附录 3 凝胶回收
附录 4 感受态细胞制备
附录 5 TA 克隆
附录 6 质粒提取
附录 7 诱导原核表达
附录 8 SDS-PAGE 凝胶电泳
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]过表达Wnt3基因抑制肝前体细胞凋亡[J]. 张锡峰,胡代曦,张超,钟沁,冯涛,黄佳祎. 南方医科大学学报. 2014(01)
[2]论我国山羊绒产业发展的思路与对策[J]. 程广燕. 中国畜牧杂志. 2011(16)
[3]毛囊黑素谱系细胞中β-catenin在毛囊周期中的表达[J]. 邓芳,郭海英,连小华,杨恬. 第三军医大学学报. 2011(08)
[4]内蒙古绒山羊毛囊发育不同时期皮肤中BMP4基因的表达[J]. 吴江鸿,张文广,李金泉,闫祖威. 黑龙江畜牧兽医. 2009(23)
[5]中国绒山羊业发展现状、前景与对策[J]. 周占琴. 中国畜牧杂志. 2008(04)
[6]内蒙古罕山白绒山羊毛囊生长规律的研究[J]. 金凤,李金泉,刘东军,乌云格日乐,韩强. 中国草食动物. 2008(01)
[7]骨形态发生蛋白2（BMP2）基因在内蒙古绒山羊不同时期皮肤毛囊中的表达[J]. 苏蕊,李金泉,张文广,尹俊,赵珺,常子丽. 中国农业科学. 2008(02)
[8]Agouti在不同颜色被毛羊驼皮肤组织中的表达[J]. 姜俊兵,赵志军,贺俊平,谢建山,董常生. 畜牧与兽医. 2007(04)
[9]我国山羊绒生产现状及山羊绒标准中存在的问题浅析[J]. 郭天芬,王欣荣,高雅琴. 畜牧兽医科技信息. 2007(01)
[10]内蒙古绒山羊105d胎儿皮肤的基因表达[J]. 尹俊,李金泉,郭志成,李长青,张燕军. 畜牧兽医学报. 2005(11)
硕士论文
[1]Wnt通路关键基因在绒山羊绒毛生长一个周期中的表达研究[D]. 刘维.内蒙古农业大学 2010
本文编号：3563072
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