淫羊藿甙对关节软骨细胞增殖、分泌及MAPKs通路的影响

发布时间：2022-01-03 15:31

　　关节软骨类疾病作为一类严重影响动物及人类健康的疾病,成为当今医学、科学及社会普遍关注的问题。这类疾病的发生发展主要是由于各种致病因子作用于机体,导致软骨组织损伤所致,但因为关节部位的特殊解剖学结构,使得当前预防和治疗该病较为棘手。淫羊藿甙作为淫羊藿的主要单体之一,现代科学研究发现其能够通过激活细胞MAPKs通路而促进成骨细胞及软骨细胞的增殖、分化,抑制细胞凋亡,从而对骨损伤具有着明显的改善作用。但淫羊藿甙对关节软骨细胞的作用及作用机制尚完全清楚,因此本试验借助细胞培养、组织学、免疫组织化学、流式细胞仪等技术来研究淫羊藿甙对关节软骨细胞增殖、凋亡及NO/NOS、MMP-13分泌的影响。同时运用Western-Blot技术探究淫羊藿甙对关节软骨细胞MAPKs通路的作用及调控机理,从而为临床应用淫羊藿甙防治软骨细胞类疾病提供相应的科学依据。本试验以健康猪的膝关节为材料,利用酶消化法分离培养了猪的关节软骨细胞,建立了猪关节软骨细胞的高效体外培养方法。同时利用细胞学、HE染色、Ⅱ型胶原免疫组化及超微结构观察等方法对分离培养的细胞进行了鉴定,发现采用酶消化法分离培养的细胞长势良好,形态、密度正常,... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
前言
    1 淫羊藿甙作用的研究进展
    2 关节软骨类疾病的研究概述
        2.1 NO/NOS在软骨细胞中的作用
        2.2 MMP-13在软骨细胞中的作用
    3 MAPKs通路的研究进展
        3.1 ERK1/2信号通路
        3.2 p38MAPK信号通路
        3.3 JNK信号通路
    本研究目的及意义
材料与方法
    1 材料
        1.1 ICA
        1.2 试验用软骨
        1.3 主要试剂耗材
        1.4 主要溶液
        1.5 主要仪器设备
    2 方法
        2.1 ICA的配制
        2.2 原代猪关节软骨细胞的分离培养
        2.3 原代猪关节软骨细胞的鉴定
        2.4 ICA对关节软骨细胞增殖影响的测定
        2.5 ICA对关节软骨细胞周期影响的检测
        2.6 ICA对关节软骨细胞凋亡影响的检测
        2.7 ICA对关节软骨细胞分泌NO及NOS影响的检测
        2.8 ICA对关节软骨细胞分泌MMP-13影响的检测
        2.9 ICA对关节软骨细胞MAPKs通路作用的检测
        2.10 数据统计与处理
试验结果
    1 原代猪关节软骨细胞的分离培养
        1.1 原代细胞的培养
        1.2 传代细胞的培养
    2 原代猪关节软骨细胞的鉴定
        2.1 软骨细胞HE染色
        2.2 软骨细胞甲苯胺蓝染色
        2.3 软骨细胞Ⅱ型胶原免疫组化
        2.4 软骨细胞超微结构观察
    3 ICA对关节软骨细胞增殖的影响
    4 ICA对关节软骨细胞周期的影响
    5 ICA对关节软骨细胞凋亡的影响
    6 ICA对关节软骨细胞分泌NO及NOS的影响
    7 ICA对关节软骨细胞分泌MMP-13的影响
    8 ICA对关节软骨细胞MAPKs通路的作用
        8.1 蛋白质的定量(BCA定量法)
        8.2 MAPKs(ERK1/2、P38)通路蛋白的表达
讨论
    1 猪关节软骨细胞的原代分离培养
    2 ICA对关节软骨细胞增殖的影响
    3 ICA对关节软骨细胞周期及凋亡的影响
    4 ICA对关节软骨细胞分泌NO、NOS及MMP-13的影响
    5 ICA对关节软骨细胞MAPKs的作用
    6 ICA对关节软骨细胞调控的可能机制
结论
附录1 流式细胞仪检测关节软骨细胞周期
附录2 流式细胞仪检测关节软骨细胞凋亡
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]淫羊藿甙对小鼠免疫功能影响的研究[J]. 刘婧,言莹,史冰楠,王德海.  黑龙江畜牧兽医. 2012(19)
[2]淫羊藿苷影响软骨细胞基质分泌和基因表达的体内研究[J]. 郭筵,吴瑕,张璇,李东晓,肖玉梅,樊渝江,张兴栋.  中药药理与临床. 2012(02)
[3]淫羊藿免疫药理学研究进展[J]. 邹萍.  中国中医药科技. 2010(03)
[4]淫羊藿甙对去卵巢大鼠骨组织核心结合因子α1表达的影响[J]. 钱国锋,杨浩,张秀珍.  中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志. 2009(02)
[5]淫羊藿甙对成骨细胞凋亡的影响[J]. 张立娟,雷涛,张秀珍.  同济大学学报(医学版). 2008(01)
[6]淫羊藿属植物化学成分及药理研究进展[J]. 谢娟平,孙文基.  海峡药学. 2006(05)
[7]淫羊藿甙逆转地塞米松抑制成骨细胞分化及其机制[J]. 刘尚全,杨颖,周丽斌,尚文斌,唐金凤,李凤英,陈名道.  中华内分泌代谢杂志. 2006(03)
[8]淫羊藿甙对OVX大鼠成骨细胞Smad4 mRNA的作用[J]. 雪原,齐清会,王沛,倪虹,马信龙,郑伦,郭世绂.  天津医药. 2006(04)
[9]骨关节炎的诊治与研究进展[J]. 吕厚山,孙铁铮,刘忠厚.  中国骨质疏松杂志. 2004(01)
[10]软骨细胞培养、增殖、分化、凋亡及永生化[J]. 许理忠,王拥军,施杞.  颈腰痛杂志. 2003(01)



本文编号：3566518