乳酸乳球菌usp45基因的功能研究及其在表达载体构建中的应用

发布时间：2022-01-04 20:57

　　本课题组前期研究发现，乳酸乳球菌Lactococcus lactis1.2472组成型大量表达一类胞外分泌蛋白，分子量约为50kDa。质谱分析显示，该类蛋白中分值最高的是一种名为Usp45的蛋白，编码基因为usp45基因（登录号：M60178.1）。目前，该蛋白功能未知；但其分泌信号肽常用于构建分泌型表达载体。本实验对乳酸乳球菌usp45基因进行原核表达，研究该基因及其编码蛋白的功能，并利用基因的相关序列构建乳酸菌整合型表达载体；为以乳酸菌作为黏膜免疫递送载体的研究奠定基础。首先，本论文从乳酸乳球菌Lactococcus lactis1.2472基因组中PCR扩增1371bp长度的usp45基因，与pMD-18T Simple载体连接获得克隆质粒pT-usp45。BamH I/EcoR I双酶切鉴定并测序鉴定正确后，将usp45基因克隆入原核表达载体pET-28a，获得表达质粒pET-28a-usp45。将pET-28a-usp45转入E.coli BL21（DE3）获得重组菌，经由IPTG诱导表达分子量约50kDa的蛋白。SDS-PAGE分析和Westen blot鉴定确认该蛋白即为... 

【文章来源】：吉林农业大学吉林省

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一篇 乳酸菌作为黏膜靶位递送载体研究进展
    1.1 LAB 作为有益的传递载体
    1.2 乳球菌（L．lactis）作为活的递送载体
    1.3 乳酸杆菌（Lactobacillus spp.）作为活性载体
    1.4 小结
第二篇 实验内容
    第一章 usp45 基因的克隆与原核表达
        1.1 材料
        1.2 方法
        1.3 结果与分析
        1.4 讨论
        1.5 小结
    第二章 Usp45 蛋白的大量表达与层析纯化
        2.1 材料
        2.2 方法
        2.3 结果与分析
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第三章 Usp45 蛋白的结构预测与功能研究
        3.1 材料
        3.2 方法
        3.3 结果与分析
        3.4 讨论
        3.5 小结
    第四章 Usp45 基因相关序列在表达载体构建中的应用
        4.1 材料
        4.2 方法
        4.3 结果与分析
        4.4 讨论
        4.5 小结
结论
参考文献
作者简介
致谢



本文编号：3569047