绵羊DLK1-GTL2印记区域miRNAs对DLK1基因亲和力的研究

发布时间：2022-01-05 12:13

　　DLK1-GTL2印记区域在人、小鼠等多个物种的胚胎发育过程起重要作用,而该区域发现的一个A/G突变被认为是导致美臀（Callipyge, CLPG）羊后肢肌肉肥大表型的致因突变。遗传获得父源Callipyge突变的杂合子后代才能表现出肌肉肥大表型,而同时获得父源和母源Callipyge突变的纯合子个体表型为“野生型”,这种非孟德尔式的遗传方式被称作极性超显性。根据多年的研究推断Callipyge突变发挥顺式调控和反式调控作用来调节基因表达,而这种调节及其诱发Callipyge表型的潜在机制仍然不得而知。DLK1和PEG11被认为是诱发Callipyge肌肉肥大表型的功能基因,antiPEG11转录本加工形成的miRNA对PEG11转录本切割的反式调控已经得到证实,但是针对DLK1的反式调控机制尚不清楚。Callipyge突变的纯合子个体与Callipyge突变个体相比,骨骼肌组织中DLK1蛋白水平和核酸水平的表达分别下降～10和～3倍,而鉴于miRNA基因往往在转录后水平影响靶基因的表达,因此DLK1-GTL2印记区域表达的miRNA成为参与DLK1反式调控的首要候选。本研究中以蛋白... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：107 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
缩略词表
1 前言
    1.1 研究问题的由来
    1.2 文献综述
        1.2.1 Callipyge及其研究进展
        1.2.2 DLK1-GTL2区域相关miRNA的研究进展
    1.3 研究目的和意义
2 材料与方法
    2.1 本研究的技术路线
    2.2 材料
        2.2.1 样品
        2.2.2 用于DLK1亲和力评估的DLK1-GTL2区域miRNA模拟物
        2.2.3 用于DLK1亲和力评估的DLK1的转录本序列
        2.2.4 构建GTL2表达载体的GTL2转录本序列
    2.3 方法
        2.3.1 绵羊DLK1基因的RACE扩增
        2.3.2 表达载体的构建
        2.3.3 miRNA模拟物系统的选择
        2.3.4 miRNA模拟物的分子设计
        2.3.5 模拟物序列的选择
        2.3.6 细胞培养和瞬时转染
        2.3.7 双荧光Western blotting
        2.3.8 DLK1蛋白的去糖基化处理
        2.3.9 DLK1转录本的Northern blot分析
        2.3.10 miRNA对DLK1亲和力的计算
3 结果
    3.1 绵羊DLK1基因C2转录本的表达载体的构建和鉴定
    3.2 成熟miRNA表达的设计
    3.3 DLK1-GTL2区域单个miRNA对DLK1亲和力的测定
    3.4 121个miRNA对DLK1亲和力评估结果的生物学相关性
    3.5 GTL2对DLK1的可能调控作用研究
4 讨论
    4.1 DLK1双荧光western blot检测方法的建立
    4.2 DLK1-GTL2印记区域miRNA的功能分析
    4.3 DLK1-GTL2区域的miRNA中对DLK1亲和力的研究
5 结论
    5.1 本论文的主要研究结果及结论
    5.2 本研究的创新点与特色
    5.3 本研究的不足之处及值得进一步研究的问题
6 其它工作：猪TCAP基因的克隆与表达谱分析
    6.1 文献综述
        6.1.1 骨骼肌形成过程中的肌节组装
        6.1.2 TCAP基因研究进展
    6.2 材料与方法
        6.2.1 材料
        6.2.2 方法
    6.3 结果
        6.3.1 猪TCAP基因的分子克隆和鉴定
        6.3.2 猪TCAP基因的表达谱分析
        6.3.3 猪TCAP基因多态性和等位基因频率的检测
    6.4 讨论
参考文献
致谢
附录1：p3.1M-DLK1-HA表达载体中转录形成的RNA序列
附录2：构建GTL2表达载体的绵羊GTL2序列
附录3：表1说明
附录4：表3说明



本文编号：3570327