玉米赤霉烯酮诱导大鼠Leydig细胞凋亡及自噬保护作用

发布时间：2022-01-05 22:00

　　玉米赤霉烯酮（Zearalenone, ZEA）是一种非甾体雌激素样作用的霉菌毒素,它广泛存在于世界各地谷类食品中。ZEA具有生殖毒性、遗传毒性和免疫毒性等。然而关于ZEA暴露对雄性动物睾丸间质细胞（Leydig cells）凋亡和自噬的研究报道较少,为探究ZEA雄性生殖毒性的机理,本实验以分离的大鼠原代睾丸间质细胞建立模型,对ZEA在体外诱导Leydig细胞凋亡与自噬、诱导凋亡的信号转导通路以及自噬与凋亡的关系进行了研究。主要研究内容如下：1.ZEA诱导Leydig细胞凋亡。以0,2.5,5,10,20μg/mL的ZEA处理原代Leydig细胞12h, MTT法检测ZEA抑制Leydig细胞的活力影响；Hochest33258染色和透射电镜观察细胞核形态的变化；Annexin V-FITC/PI双荧光染色法定量检测ZEA对Leydig细胞凋亡的变化。结果显示,不同浓度的ZEA处理Leydig细胞12h后,细胞活率极显著低于对照组（p<0.01）;20μg/mL的ZEA处理后12h后,细胞核发生明显的固缩、染色质凝聚等凋亡特征；电子显微镜观察到ZEA处理的Leydig细胞发生染色... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
符号说明
上篇 文献综述
    第一章 细胞凋亡和自噬
        1 细胞凋亡
            1.1 内源性途径
            1.2 外源性途径
            1.3 Caspase家族/Bcl-2家族
        2 细胞自噬
            2.1 自噬的过程
            2.2 自噬过程的调控
        3 凋亡与自噬
    第二章 玉米赤霉烯酮研究进展
        1 ZEA的简介
            1.1 ZEA的结构
            1.2 ZEA的污染状况
        2 ZEA的一般毒性
            2.1 生殖发育毒性
            2.2 免疫毒性
            2.3 遗传毒性
            2.4 ZEA对肿瘤发生的影响
            2.5 ZEA的细胞毒性
        3 ZEA的雄性生殖毒性及其机理
下篇 实验部分
    第三章 ZEA诱导大鼠LEYDIG细胞凋亡
        1 材料
            1.1 实验动物
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
        2 方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 Leydig细胞原代培养
            2.3 分离大鼠Leydig细胞的计数与活率鉴定
            2.4 分离大鼠Leydig细胞的纯度鉴定
            2.5 MTT法
            2.6 Hochest 33258染色
            2.7 透射电镜观察
            2.8 流式细胞术检测凋亡
            2.9 统计学分析
        3 结果与分析
            3.1 细胞活率及纯度
            3.2 ZEA对大鼠睾丸间质细胞活力的影响
            3.3 Hoches 33258染色
            3.4 透射电镜观察
            3.5 流式细胞术定量测定细胞凋亡
        4 讨论
        5 小结
    第四章 ZEA诱导LEYDIG细胞凋亡信号转导通路
        1 材料
            1.1 实验动物
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
        2 方法
            2.1 免疫印迹
            2.2 JC-1测定线粒体膜电位
            2.3 统计学分析
        3 结果与分析
            3.1 线粒体膜电位额变化
            3.2 ZEA对Leydig细胞中的Bax和Bcl-2表达的影响
            3.3 细胞色素C的释放
            3.4 Caspase级联反应在ZEA诱导大鼠Leydig细胞凋亡中的作用
            3.5 Z-VAD-fmk对Leydig细胞的保护作用
            3.6 Z-VAD-fmk对Leydig细胞凋亡的影响
            3.7 Z-VAD-fmk对ZEA诱导Lyedig细胞Caspase-9,-3活性的影响
            3.8 Z-VAD-fmk对ZEA诱导Lyedig细胞PARP活性影响
        4 讨论
        5 小结
    第五章 ZEA诱导大鼠LEYDIG细胞自噬
        1 材料
            1.1 主要试剂
            1.2 主要仪器
        2 方法
            2.1 酸性囊泡(AVOs)镜检观察
            2.2 AO染色后FCM定量分析AVOs
            2.3 ZEA处理后对Leydig细胞自噬相关蛋白表达的影响
            2.4 ZEA处理后的Leydig细胞中自噬LC3转移与定位
            2.5 透射电镜观察自噬泡
        3 结果
            3.1 AVOs镜检观察
            3.2 AO染色后FCM定量分析
            3.3 ZEA处理Leydig细胞后标志性自噬蛋白的表达
            3.4 ZEA处理后的Leydig细胞中自噬LC3转移与定位
            3.5 透射电镜观察ZEA处理Leydig细胞机构变化
        4 讨论
        5 小结
    第六章 自噬在ZEA诱导LEYDIG细胞凋亡中的作用
        1 材料
            1.1 主要试剂
            1.2 主要仪器
        2 方法
            2.1 RAP和CQ对ZEA处理的Leydig细胞LC3蛋白的影响
            2.2 自噬延迟凋亡的作用
        3 结果
            3.1 自噬诱导剂RAP对ZEA处理的Leydig细胞LC3蛋白的影响
            3.2 自噬抑制剂CQ对ZEA处理的Leydig细胞LC3蛋白的影响
            3.3 自噬延迟凋亡的作用
        4 讨论
        5 小结
结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录


【参考文献】：
期刊论文
[1]2012年上半年中国霉菌毒素普查报告[J]. 王金勇,刘颖莉.  中国畜牧杂志. 2012(18)
[2]玉米赤霉烯酮对小鼠免疫器官的毒性作用[J]. 梁梓森,马勇江,刘长永,邓衔柏,剡海阔,范小龙.  中国兽医科学. 2010(03)
[3]2009年中国饲料和原料中霉菌毒素污染情况调查总结报告[J]. 张丞,刘颖莉.  饲料广角. 2010(04)
[4]日粮中添加玉米赤霉烯酮对仔猪生产性能和免疫功能影响的研究[J]. 赵虎,杨在宾,杨维仁,姜淑贞,张桂国,季方,陈家钟.  山东农业大学学报(自然科学版). 2009(04)
[5]2007年中国饲料和原料中霉菌毒素污染情况调查报告[J]. 张丞,刘颖莉.  饲料广角. 2008(02)
[6]玉米赤霉烯酮对畜禽的毒害作用研究进展[J]. 钱利纯,尹兆正.  黑龙江畜牧兽医. 2005(09)
[7]小麦和玉米中玉米赤霉烯酮污染情况初探（Ⅰ）[J]. 李荣涛,谢刚,付鹏程,罗建伟,陈兰,吴军里.  粮食储藏. 2004(05)



本文编号：3571152