犬MSC对皮肤和关节损伤的修复作用及其机制研究

发布时间：2022-01-05 23:05

　　间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是在体内间质中存在的成体干细胞。在适当的体内或体外条件下,MSCs可以分化成多种细胞类型。皮肤和关节损伤是犬的常发疾病,给犬带来病痛,严重影响犬的生活质量。干细胞治疗作为一种新兴治疗手段在组织再生和损伤组织修复方面表现出良好治疗效果,而MSCs是目前应用最广泛的成体干细胞。为研究MSCs对犬的皮肤创伤和关节损伤的修复作用,本研究开展了以下实验:1.骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs）和脐带间充质干细胞（Umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs）生物学特性研究。本实验通过Ficoll密度梯度分离法分离获得BM-MSCs,采用Ⅰ型胶原酶消化法从脐带华通胶中分离获得UC-MSCs,对分离获得的两种细胞进行离体培养和生物学特性的研究。结果发现,BM-MSCs和UC-MSCs的生长特性相似,细胞均呈贴壁生长、形态为长梭形,排列有明显方向性、呈漩涡状或网状、折光性强,传至第9代仍保持良好的生长活性,群体倍增时间随... 

【文章来源】：佛山科学技术学院广东省

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
本文常用英文缩写词
前言
    1 MSCs的研究进展
        1.1 MSCs的基本生物学特性
        1.2 犬MSCs的来源与制备
            1.2.1 骨髓来源MSCs
            1.2.2 脂肪来源MSCs
            1.2.3 胎盘来源MSCs
        1.3 MSCs治疗的优势
    2 MSCs对皮肤创伤治疗的研究进展
    3 MSCs对骨关节炎治疗的研究进展
        3.1 骨关节炎(Osteoarthritis,OA)
        3.2 MSCs治疗OA的作用途径
            3.2.1 MSCs通过促进软骨及周边组织的恢复改善OA
            3.2.2 MSCs通过旁分泌作用抑制炎症反应来改善OA
    4 MSCs对其它一些疾病治疗的研究进展
    5 MSCs存在问题和展望
第一章 犬骨髓和脐带间充质干细胞的生物学特性研究
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 实验动物和材料
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器设备
            2.1.4 主要溶液的配制
        2.2 方法
            2.2.1 犬BM-MSCs的制备
            2.2.2 犬UC-MSCs的制备
            2.2.3 不同代数的犬BM-MSCs和 UC-MSCs生长曲线绘制
            2.2.4 犬BM-MSCs和 UC-MSCs的鉴定
    3 结果
        3.1 犬BM-MSCs的生长特性
        3.2 犬UC-MSCs的生长特性
        3.3 第3、6、9 代犬BM-MSCs和 UC-MSCs的增殖情况
        3.4 犬BM-MSCs的鉴定
            3.4.1 犬BM-MSCs可诱导分化成脂细胞
            3.4.2 犬BM-MSCs可诱导分化成骨细胞
            3.4.3 犬BM-MSCs的CD34、CD44 免疫荧光鉴定结果
        3.5 犬UC-MSCs的鉴定
            3.5.1 犬UC-MSCs可诱导分化成成脂细胞和成骨细胞
            3.5.2 犬UC-MSCs的CD34、CD44 免疫荧光鉴定结果
    4 讨论
        4.1 BM-MSCs和 UC-MSCs分离方法
        4.2 BM-MSCs和 UC-MSCs的生物学特性
第二章 犬BM-MSCs移植修复皮肤创伤的研究
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 手术器械及实验药品
            2.1.3 主要试剂
            2.1.4 主要仪器设备
        2.2 方法
            2.2.1 犬BM-MSCs的制备
            2.2.2 犬皮肤创伤模型的建立
            2.2.3 犬BM-MSCs的局部注射治疗
            2.2.4 创口评估
        2.3 统计学分析
    3 结果
        3.1 犬局部注射BM-MSCs后创面的观察
        3.2 伤口面积及愈合速度比较
    4 讨论
第三章 三种不同来源MSCs及其外泌体对软骨细胞增殖的影响
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 主要试剂用品
            2.1.3 主要仪器设备
        2.2 方法
            2.2.1 犬AC的制备
            2.2.2 Ⅱ型胶原的免疫组织化学染色鉴定
            2.2.3 UC-MSCs来源的外泌体的制备
            2.2.4 三种来源MSCs及 EXO对 AC增殖的影响
            2.2.5 UC-MSCs来源的外泌体与非外泌体部分对软骨细胞增殖影响
    3 结果
        3.1 AC的生长特性
        3.2 Ⅱ型胶原的免疫组织化学染色鉴定
        3.3 三种来源MSCs及两种不同来源EXO对 AC增殖的影响
        3.4 UC-MSC来源的EXO与 EXOCM对软骨细胞增殖影响
    4 讨论
        4.1 MSCs能显著促进AC的增殖
        4.2 MSCs的外泌体及非外泌体部分均能促进AC的增殖
第四章 犬UC-MSCs移植治疗膝关节软骨损伤的疗效观察
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器设备
            2.1.4 主要溶液配制
        2.2 方法
            2.2.1 犬UC-MSCs的制备
            2.2.2 犬OA模型的建立
            2.2.3 膝关节腔内注射UC-MSCs治疗OA
            2.2.4 体温检测
            2.2.5 采血
            2.2.6 MRI、B超、X线等影像学方法观察试验犬患肢情况
            2.2.7 病理学组织观察
        2.3 统计学分析
    3 结果
        3.1 饮食及运动情况
        3.2 体温变化情况
        3.3 血常规检测结果
        3.4 生化指标检测结果
        3.5 炎性因子检测结果
        3.6 MRI检查结果
        3.7 B超检查结果
        3.8 X线检查结果
        3.9 病理学组织观察
            3.9.1 膝关节组织的肉眼观察
            3.9.2 石蜡切片对比观察新生软骨组织
            3.9.3 扫描电镜观察软骨和髌骨组织结果
    4 讨论
        4.1 UC-MSC能通过促进软骨修复治疗OA
        4.2 UC-MSC能通过抑制炎症反应治疗OA
全文总结
参考文献
攻读学位期间发表的论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]间充质干细胞来源外泌体在骨性关节炎中的应用[J]. 朱海,刘璠.  江苏医药. 2017(16)
[2]间充质干细胞疗法应用于宠物临床的现状及问题（英文）[J]. 方佳,魏于栋,张仕强,吕长荣,赵善廷,华进联.  农业生物技术学报. 2016(09)
[3]人源脐带间充质干细胞移植治疗大鼠佐剂骨关节炎的对照研究[J]. 蒋峰,杨孝兵,张帆,寿旗扬,徐志国.  浙江医学. 2016(09)
[4]犬间充质干细胞的研究进展和临床应用[J]. 李岩,张钰堃,曹贵方.  畜牧与饲料科学. 2015(10)
[5]人脐带源和胎盘源间充质干细胞的生物学特性比较[J]. 李艳琪,王洪一,姚尧,张宇,刘洋,吴祖泽,靳继德.  军事医学. 2015(06)
[6]间充质干细胞分离方法的研究与进展[J]. 蔡金宏,林春博,杨渊.  中国组织工程研究. 2014(45)
[7]干细胞移植治疗脊髓损伤:问题与前景[J]. 李脉,敖丽娟.  中国组织工程研究. 2014(37)
[8]人脐带、胎盘绒毛膜来源间充质干细胞的生物学特性比较研究[J]. 韩之波,杨舟鑫,池颖,王有为,王涛,及月茹,杨萍,孟磊,韩忠朝.  中国实验血液学杂志. 2012(03)
[9]犬创伤的临床症状与治疗[J]. 李世海,纪建东,高翊.  养殖技术顾问. 2012(02)
[10]一种简单的人脐带间充质干细胞分离培养方法[J]. 庞荣清,何洁,李福兵,赵晶,阮光萍,王桂华,瞿良,李黎,蔡学敏,潘兴华.  中华细胞与干细胞杂志(电子版). 2011(02)

博士论文
[1]磁粒子标记骨髓间充质干细胞经动脉移植治疗犬脑梗死的MR成像研究[D]. 鲁珊珊.南京医科大学 2013
[2]骨髓间充质干细胞移植促进皮肤创伤愈合的实验研究[D]. 房林.中国协和医科大学 2010

硕士论文
[1]影像技术对实验性犬膝关节骨关节炎诊断价值的研究[D]. 刘健莹.黑龙江八一农垦大学 2016
[2]炎症细胞因子在膝骨性关节炎患者血清和关节液中的表达及意义[D]. 苏志辉.长江大学 2016
[3]脂肪间充质干细胞移植治疗犬心肌梗死后心力衰竭的实验研究[D]. 夏菁.中国人民解放军军医进修学院 2006



本文编号：3571212