家兔4种具有相似呼吸道病变疾病的多重PCR检测方法建立

发布时间：2022-01-06 11:57

　　家兔呼吸道传染病发病率高,波及范围广,造成的经济损失大,尤以兔肺炎克雷伯氏菌病（Klebsiella pneumonia disease,KPD）、兔瘟（兔出血症、Rabbit hemorrhagic disease,RHD）、兔多杀性巴氏杆菌病（Pasteurellosis）和兔支气管败血波氏杆菌病（Bordetellosis）发病率高,危害大。由于它们具有相似的临床表现与病理变化,给准确诊断带来了困难。为了能及时、准确、快速诊断家兔这4种具有相似病变的疾病,本实验建立了一种能够同时检测这4种病原的MPCR方法。根据GenBank中的肺炎克雷伯菌（KP.）的16S rRNA V2可变区基因、兔瘟病毒（RHDV）的VP60基因、多杀性巴氏杆菌（P. multocida）的ktm1基因和支气管败血波氏杆菌（B. bronchiseptica）的ptxA基因,设计4对引物,序列分别为P1：AGCACAGAGAGCTTG; P2:ACTTTGGTCTTGCGAC; P3: TCGCTCAACAACTACTCG; P4:TAGTTGCAGCTCTTGCCT; P5: ATCCGCTATTTAC... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一部分 文献综述
    1. 国内家兔养殖现状
    2. 家兔呼吸道疾病的病因
        2.1 生物性因素
            2.1.1 兔肺炎克雷伯氏菌
            2.1.2 兔瘟病毒(兔出血症病毒)
            2.1.3 兔多杀性巴氏杆菌
            2.1.4 兔支气管败血波氏杆菌
            2.1.5 兔致病性金黄色葡萄球菌
            2.1.6 兔肺炎链球菌
            2.1.7 兔粘液瘤病毒
        2.2 非生物性因素
    3. 家兔主要呼吸道疾病的临床表现与病理变化
    4. 家兔呼吸道疾病的诊断方法
    5. 多重PCR(MPCR)技术概述
第二部分 实验部分
    1. 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌株和毒株
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 主要设备
            1.1.4 试验动物
        1.2 模板和引物制备
            1.2.1 细菌及病毒培养
            1.2.2 细菌DNA模板的提取
            1.2.3 病毒RNA提取和cDNA模板合成
            1.2.4 引物设计和制备
        1.3 多重PCR(MPCR)检测方法的优化和确立
            1.3.1 单重PCR检测方法的优化和确立
            1.3.2 多重PCR(MPCR)检测方法的优化和确立
        1.4 多重PCR(MPCR)方法的特异性和灵敏度试验
            1.4.1 单重PCR方法的特异性试验
            1.4.2 多重PCR(MPCR)方法的特异性试验
            1.4.3 单重PCR方法的灵敏度试验
            1.4.4 多重PCR(MPCR)方法的灵敏度试验
        1.5 多重PCR(MPCR)方法的临床检测试验
            1.5.1 人工感染家兔病料制备
            1.5.2 病料模板的提取
            1.5.3 多重PCR(MPCR)方法检测病料
    2. 结果
        2.1 多重PCR(MPCR)检测方法的优化和确立
            2.1.1 单重PCR检测方法的优化和确立
            2.1.2 多重PCR(MPCR)检测方法的优化
        2.2 多重PCR(MPCR)方法的特异性和灵敏度试验
            2.2.1 单重PCR方法的特异性试验
            2.2.2 多重PCR(MPCR)方法的特异性试验
            2.2.3 单重PCR方法的灵敏度试验
            2.2.4 多重PCR(MPCR)方法的灵敏度试验
        2.3 多重PCR(MPCR)方法临床检测实验
    3. 讨论
        3.1 家兔呼吸道疾病危害及其诊断
        3.2 多重PCR(MPCR)技术及其应用
        3.3 多重PCR(MPCR)引物的设计
        3.4 多重PCR(MPCR)反应条件的优化
    4. 结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]兔肺炎球菌病的诊治[J]. 李铁,何兰玲,王正华.  养殖技术顾问. 2014(01)
[2]不同SSR标记检测技术及其在花生栽培种遗传多样性分析中的应用[J]. 王燕龙,单雷,付春,徐平丽,姜言生,柳展基,曲志才,唐桂英.  植物遗传资源学报. 2014(01)
[3]兔支气管败血波氏杆菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用[J]. 钱微,刘燕,肖琛闻,韦强,季权安,鲍国连,姚火春.  农业生物技术学报. 2013(04)
[4]兔葡萄球菌病的类型及防治方法[J]. 刘宇.  畜牧兽医科技信息. 2013(03)
[5]儿童呼吸道易感病原菌多重PCR检测方法的建立[J]. 冯燕玲,薛冠华,徐文健,王晓燕,王洛平,金春华,孙红妹.  中国生物制品学杂志. 2012(12)
[6]动物源性甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的研究进展[J]. 庞璐,徐进,林兰,崔生辉,杨昭鹏.  中国药事. 2012(11)
[7]多重生物检测技术研究进展[J]. 张平平,王浩然,郭兆彪,杨瑞馥,周蕾.  军事医学. 2012(09)
[8]兔F型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其致病性[J]. 张娜,李书光,陈金龙,王金良,胡琳琳,沈志强.  中国兽医科学. 2012(07)
[9]猪源多杀性巴氏杆菌PCR鉴定方法的建立[J]. 黄海燕,王印,彭娟,宋勇,蒋梅,钟霏,李丽瑞.  畜牧兽医学报. 2012(07)
[10]金黄色葡萄球菌检测方法的研究进展[J]. 李彦媚,李纯厚,赵喜红,徐泽智,徐振波.  安徽农业科学. 2012(16)

硕士论文
[1]PRRS、PCVD and CSF病毒多重PCR方法的建立及其应用研究[D]. 谢玉洁.安徽农业大学 2008
[2]兔瘟病理学研究[D]. 宁玲忠.湖南农业大学 2007
[3]多重PCR诊断猪5种繁殖障碍性疾病的方法研究[D]. 曹洪志.四川农业大学 2007
[4]兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及某些生物学特性研究[D]. 范志宇.南京农业大学 2007



本文编号：3572409