抗体免疫选择压作用下新城疫病毒HN基因和F基因的演化及其抗原性的比较分析

发布时间：2022-01-06 11:13

　　将TZ060107株新城疫病毒（NDV）在CEF细胞上传代，对其HN基因和F基因分别进行扩增、克隆、测序。测序结果表明，所扩增的HN基因全长1801bp，编码区由1716bp组成，共编码571个氨基酸；所扩增的F基因全长是1725bp，编码区由1662bp组成，共编码553个氨基酸。第一个循环，TZ060107株新城疫病毒（NDV）在含有抗TZ060107抗体的鸡胚成纤维细胞（CEF）上传代，分3个独立系列连传50代，同时设3个不带抗体的独立系列也连传50代，每10代扩增HN基因和F基因并测序。第二轮循环所用的起始毒株是第50代中变异最大的A1-50系列毒株。将A1-50接种10日龄SPF鸡胚，用该尿囊液制成油乳剂灭活苗。免疫SPF鸡，2周后再次免疫，第二次免疫十天后采集抗血清。对抗血清进行病毒中和试验，根据中和试验结果确定最适血清添加浓度为1:20，用该浓度添加血清到有抗体组形成免疫选择压。将A1-50毒株在含有抗A1-50抗体的CEF培养上分3个独立系列连传50代，分别为a1、a2、a3。同时设3个不带抗体的独立传代系列作为对照，分别为b1、b2、b3。对第60、70、80、90、... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 病原和生物学特性
        1.1.1 形态结构
        1.1.2 理化性质
        1.1.3 培养特性
        1.1.4 生物学特性
        1.1.5 抗原性和毒力
    1.2 基因组结构和功能
        1.2.1 基因组结构
        1.2.2 基因组结构蛋白
    1.3 致病性
        1.3.1 致病性的概述
        1.3.2 致病性的分子基础
    1.4 流行病学
        1.4.1 流行病学概况和特点
        1.4.2 易感动物
        1.4.3 传播途径和流行方式
        1.4.4 我国新城疫流行趋势
    1.5 免疫
        1.5.1 新城疫免疫
        1.5.2 免疫和疫苗的关系
    1.6 免疫选择压对病毒的影响
        1.6.1 RNA 病毒的易变异性
        1.6.2 免疫选择压发挥作用的客观指标
        1.6.3 免疫选择压相关的研究成果
        1.6.4 免疫选择压对病毒抗原性的影响
    1.7 本研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 病毒
        2.1.2 SPF 鸡和 SPF 鸡胚
        2.1.3 主要分子生物学试剂和试剂盒
        2.1.4 细胞培养相关材料
        2.1.5 引物
    2.2 方法
        2.2.1 病毒和细胞
        2.2.2 抗NDVA1 -50 单因子血清的制备
        2.2.3 最适血清添加浓度的确定
        2.2.4 病毒在 CEF 细胞上的传代
        2.2.5 病毒 HN基因和 F 基因的扩增克隆测序
        2.2.6 病毒间的交叉HI 试验
3 结果
    3.1 最适血清添加浓度的确定
    3.2 PCR 结果（见图 3-1 和图 3-2）
    3.3 抗体选择压作用下 HN 基因和 F基因的变异结果
        3.3.1 HN 基因和 F 基因的遗传稳定性
        3.3.2 后 50代 HN 基因和 F 基因核苷酸序列比较结果（详见附录）
        3.3.3 抗体选择压下新城疫病毒 HN 基因的变异
        3.3.4 抗体选择压下新城疫病毒 F基因的变异
    3.4 交叉 HI试验结果和抗原性变化
        3.4.1 第一组实验结果
        3.4.2 第二组实验结果
4 讨论
    4.1 抗体选择压作用下 H N 基因的变异
    4.2 抗体选择压作用下 F基因的变异
    4.3 新城疫病毒抗原性的变异
5. 结论
附图
参考文献
个人简介
硕士期间发表论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]抗体选择压作用下H9N2亚型禽流感病毒NA基因的变异[J]. 杜燕,娄本红,武专昌,赵鹏,崔治中.  病毒学报. 2012(01)
[2]猪繁殖与呼吸综合征病毒在抗体免疫选择压下的变异[J]. 赵鹏,马诚太,崔治中.  中国科学:生命科学. 2010(10)
[3]细胞培养上新城疫病毒HN基因在抗体免疫选择压作用下的抗原表位变异[J]. 巩艳艳,崔治中.  中国科学（C辑:生命科学）. 2009(12)
[4]抗体选择压作用下H9N2亚型禽流感病毒HA基因的变异[J]. 娄本红,朱秀同,孙贝贝,崔治中.  微生物学报. 2009(07)
[5]新城疫病毒贵州分离株F基因的克隆和序列分析[J]. 伍祥龙,温贵兰,袁翠霞,周碧君,文明,李永明.  动物医学进展. 2008(07)
[6]鸡新城疫的流行特点及防治[J]. 王占林.  现代畜牧兽医. 2008(07)
[7]新城疫疫苗的研究进展[J]. 葛鑫,路学华,刘怀然,闫丽辉,刘培欣,孔宪刚,冯新畅.  黑龙江畜牧兽医. 2008(02)
[8]鸡胚中新城疫强毒的分离、鉴定与生物学特性研究[J]. 孙淑红,崔治中.  畜牧兽医学报. 2007(07)
[9]鸡新城疫疫苗研究进展[J]. 王贺民,秦素琴,魏涛.  中国家禽. 2006(18)
[10]新城疫病毒HN和F基因遗传变异相关性的研究[J]. 秦卓明,马保臣,何叶峰,王友令,崔治中,徐怀英,袁小远.  微生物学报. 2006(02)



本文编号：3572347