家鸡OC-116Z的抗体制备及晶体培养
发布时间：2022-01-07 03:58
禽类蛋壳是鸟类在进化过程中形成的，对后代的繁衍有着保护作用，对孵化幼鸡也有着重要的意义。OC-116（卵功能蛋白）是由子宫合成并分泌的一种基质蛋白，主要存在于蛋清和蛋壳的壳膜以及栅栏层中。研究表明OC-116蛋白中间肽段有形成β-折叠的趋势，而这种折叠结构间接地控制晶体成核方向和方解石与磷酸钙生长以及磷蛋白与羟基磷灰石结晶的互作等。而目前关于OC-116蛋白的物理结构及功能还尚不清楚。本实验依据原鸡OC-116基因序列克隆仙居鸡OC-116全长编码基因并构建了OC-116蛋白相应的原核表达载体。对OC-116的中间段（即OC-116Z）进行诱导表达并纯化获得重组蛋白、制备其多克隆抗体；此外，还进一步探索了OC-116Z蛋白的稳定性、聚合情况等理化性质，为后续研究OC-116蛋白的结构及功能奠定基础。主要结果如下：1.参照原鸡（Gallus. gallus）OC-116编码基因序列并依据功能区域设计3对引物，分段克隆了3个基因片段；测序正确后通过酶切连接最终拼接得到OC-116全长编码基因；并构建了相应的原核表达载体，经诱导表达发现OC-116的N端（OC-116N）基本无表达，中段肽段...
【文章来源】：浙江农林大学浙江省
【文章页数】：103 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
OC-116三个基因片段的PCR扩增结果
图 2.1 OC-116 三个基因片段的 PCR 扩增结果Fig. 2.1 PCR products of gene(OC-116)M：DL2000 DNA Marker；1~3,4~5 和 6~7 分别为克隆得到的 OC-116N, OC-116Z 和 OC-116C 基因片段理论上，OC-116N/Z/C 三个基因片段大小分别为 1200 bp、1005 bp 和 103bp；由图 2.1 可知，经过 PCR 获得的基因片段大小均在 1000~2000bp，其中 1~的片段均大于 4~5，6~7 的条带相对最小，符合理论上 OC-116N/Z/C 目的基因的大小且克隆得到的基因片段浓度也达到了后续试验的要求，因此对其凝胶电泳条带进行凝胶回收。2）OC-116N/Z/C 基因片段与质粒 pEGFP-N1 酶切后的电泳结果
家鸡 OC-116Z 的抗体制备及晶体培养表 2.17 凝胶回收后 OC-116N/Z/C 基因片段与质粒 pEGFP-N1 酶切产物的 OD 值测定结果Table 2.17 OD measurement results of gene fragments and plasmid digested测量值 λ=230 λ=260 λ=280 260/280 260/230 ng/ulOC-116N 0.601 0.346 0.196 1.77 0.58 17.3OC-116Z 0.470 0.179 0.107 1.67 0.38 8.9OC-116C 0.185 0.224 0.128 1.75 1.21 11.2pEGFP-N1 0.183 0.467 0.239 1.95 2.55 23.43）质粒 pEGFP-N1 和目的基因连接前的电泳
本文编号：3573766
【文章来源】：浙江农林大学浙江省
【文章页数】：103 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
OC-116三个基因片段的PCR扩增结果
图 2.1 OC-116 三个基因片段的 PCR 扩增结果Fig. 2.1 PCR products of gene(OC-116)M：DL2000 DNA Marker；1~3,4~5 和 6~7 分别为克隆得到的 OC-116N, OC-116Z 和 OC-116C 基因片段理论上，OC-116N/Z/C 三个基因片段大小分别为 1200 bp、1005 bp 和 103bp；由图 2.1 可知，经过 PCR 获得的基因片段大小均在 1000~2000bp，其中 1~的片段均大于 4~5，6~7 的条带相对最小，符合理论上 OC-116N/Z/C 目的基因的大小且克隆得到的基因片段浓度也达到了后续试验的要求，因此对其凝胶电泳条带进行凝胶回收。2）OC-116N/Z/C 基因片段与质粒 pEGFP-N1 酶切后的电泳结果
家鸡 OC-116Z 的抗体制备及晶体培养表 2.17 凝胶回收后 OC-116N/Z/C 基因片段与质粒 pEGFP-N1 酶切产物的 OD 值测定结果Table 2.17 OD measurement results of gene fragments and plasmid digested测量值 λ=230 λ=260 λ=280 260/280 260/230 ng/ulOC-116N 0.601 0.346 0.196 1.77 0.58 17.3OC-116Z 0.470 0.179 0.107 1.67 0.38 8.9OC-116C 0.185 0.224 0.128 1.75 1.21 11.2pEGFP-N1 0.183 0.467 0.239 1.95 2.55 23.43）质粒 pEGFP-N1 和目的基因连接前的电泳
本文编号：3573766
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