宿主因子TMUB1参与流感病毒复制调控的机制研究
发布时间：2022-01-07 21:55
流感病毒属于正黏病毒科,流感病毒属。流感病毒是重要的人兽共患性病原,可引起人和多种动物感染和发病。流感病毒的高变异性极易引起流感大流行和跨种间传播,对人类的生命安全构成重大的威胁。因此,抗流感病毒药物研发具有重要的意义。通过全基因组siRNA文库以及报告性流感病毒可以实现对参与流感病毒复制调控的宿主因子的高通量筛选,为抗流感病毒药物研发提供潜在的靶点。本实验室前期通过全基因组siRNA文库以及H5N1 NA-Venus报告病毒筛选出参与流感病毒复制调控的宿主因子。结合siRNA文库筛选标准,确定了宿主因子跨膜和泛素样结构域蛋白1（Transmembrane and ubiquitin-like domain-containing 1,TMUB1）。在本研究中,通过蚀斑实验证实利用siRNA干扰下调TMUB1表达以及利用CRISPR/Cas9技术敲除TMUB1均可显著抑制流感病毒复制。为了探究TMUB1影响流感病毒生活周期的具体阶段,本研究通过Western杂交检测TMUB1对流感病毒感染后不同时间点病毒蛋白表达的影响,发现TMUB1敲除后在病毒感染4 h时可显著抑制各个病毒蛋白的表达,...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
下调TMUB1表达抑制H5N1NA-Venus报告病毒的感染率
中国农业科学院硕士学位论文 第二章 TMUB1 促进流感病毒复制为了验证两条 TMUB1 siRNA 的干扰效率，首先将两条 TMUB1 siRNA 以及 NC siRNA 转染A549 细胞，然后利用 Western 杂交检测 TMUB1 蛋白的表达情况，结果显示，与对照组相比，两条 TMUB1 siRNA 均能显著下调 TMUB1 蛋白表达水平（图 2-2a）；利用 qRT-PCR 检测 TMUB1mRNA 的转录，结果显示，与对照组相比，两条 TMUB1 siRNA 均能显著下调 TMUB1 mRNA 的转录水平（图 2-2b）。为了排除 TMUB1 siRNA 转染对细胞的影响，检验了两条 TMUB1 siRNA干扰后，对 A549 细胞活力的影响。结果显示，与对照组相比，两条 TMUB1 siRNA 干扰下调 TMUB1表达后对细胞活力无显著影响（图 2-2c）。
图 2-2 下调 TMUB1 表达对细胞活力无影响Fig. 2-2 Knockdown of TMUB1 has no effect on cell viability（a）Western 杂交显示两条 TMUB1 siRNA 下调 TMUB1 蛋白表达水平；（b）q RT-PCR 表明两条 TMUB1 siRNA下调 TMUB1 m RNA 转录水平；（c）下调 TMUB1 表达对细胞活力无影响在上述研究基础上，利用两条 TMUB1 siRNA 以及 NC siRNA 对 A549 细胞进行干扰，分别感染不同亚型的流感病毒 WSN、H5N1、H9N2，在病毒感染后 24 h 和 48 h 收取含有病毒的细胞上清，进行蚀斑滴定。结果显示，与对照组相比，两条 TMUB1 siRNA 干扰下调 TMUB1 表达后，均能显著抑制不同亚型流感病毒的复制（图 2-3）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Cloning and Characterization of DULP,a Novel Ubiquitin-Like Molecule from Human Dendritic Cells[J]. Guoyan Liu1,2,Shuxun Liu1,2,Ping Li1,Ling Tang1,Yanmei Han1,Huazhang An1,Jiangyan Li1,Xiankun Dai1,Nan Li1,Xuetao Cao1 and Yizhi Yu1,31Institute of Immunology and State Key Laboratory of Medical Immunology,Second Military Medical University,Shanghai 200433,China;2Guoyan Liu and Shuxun Liu contributed equally to this study;. Cellular & Molecular Immunology. 2009(01)
本文编号：3575339
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
下调TMUB1表达抑制H5N1NA-Venus报告病毒的感染率
中国农业科学院硕士学位论文 第二章 TMUB1 促进流感病毒复制为了验证两条 TMUB1 siRNA 的干扰效率，首先将两条 TMUB1 siRNA 以及 NC siRNA 转染A549 细胞，然后利用 Western 杂交检测 TMUB1 蛋白的表达情况，结果显示，与对照组相比，两条 TMUB1 siRNA 均能显著下调 TMUB1 蛋白表达水平（图 2-2a）；利用 qRT-PCR 检测 TMUB1mRNA 的转录，结果显示，与对照组相比，两条 TMUB1 siRNA 均能显著下调 TMUB1 mRNA 的转录水平（图 2-2b）。为了排除 TMUB1 siRNA 转染对细胞的影响，检验了两条 TMUB1 siRNA干扰后，对 A549 细胞活力的影响。结果显示，与对照组相比，两条 TMUB1 siRNA 干扰下调 TMUB1表达后对细胞活力无显著影响（图 2-2c）。
图 2-2 下调 TMUB1 表达对细胞活力无影响Fig. 2-2 Knockdown of TMUB1 has no effect on cell viability（a）Western 杂交显示两条 TMUB1 siRNA 下调 TMUB1 蛋白表达水平；（b）q RT-PCR 表明两条 TMUB1 siRNA下调 TMUB1 m RNA 转录水平；（c）下调 TMUB1 表达对细胞活力无影响在上述研究基础上，利用两条 TMUB1 siRNA 以及 NC siRNA 对 A549 细胞进行干扰，分别感染不同亚型的流感病毒 WSN、H5N1、H9N2，在病毒感染后 24 h 和 48 h 收取含有病毒的细胞上清，进行蚀斑滴定。结果显示，与对照组相比，两条 TMUB1 siRNA 干扰下调 TMUB1 表达后，均能显著抑制不同亚型流感病毒的复制（图 2-3）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Cloning and Characterization of DULP,a Novel Ubiquitin-Like Molecule from Human Dendritic Cells[J]. Guoyan Liu1,2,Shuxun Liu1,2,Ping Li1,Ling Tang1,Yanmei Han1,Huazhang An1,Jiangyan Li1,Xiankun Dai1,Nan Li1,Xuetao Cao1 and Yizhi Yu1,31Institute of Immunology and State Key Laboratory of Medical Immunology,Second Military Medical University,Shanghai 200433,China;2Guoyan Liu and Shuxun Liu contributed equally to this study;. Cellular & Molecular Immunology. 2009(01)
本文编号：3575339
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