鉴别蓝舌病野毒感染ELISA检测方法的建立与初步应用

发布时间：2022-01-07 22:10

　　利用原核表达系统表达并纯化获得蓝舌病病毒NS3蛋白。以NS3重组蛋白作为包被抗原,经过对包被浓度、样品稀释度以及二抗工作浓度和作用时间等一系列条件的优化,建立了一种鉴别蓝舌病野毒感染的间接ELISA抗体检测方法。结果显示,该方法的检测灵敏度可达1∶1 280,批内、批间变异系数均小于10%,具有良好的重复性。与商业化的蓝舌病试剂盒对比检测的结果显示,两者的蓝舌病阳性样品符合率为100%,本试验建立的间接ELISA方法可以区分蓝舌病自然感染和疫苗免疫动物。 

【文章来源】：中国兽医学报. 2020,40(08)北大核心CSCD

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

重组表达载体pCold-NS3双酶切扩增片段

利用建立的检测方法对26份已知BTV阴性血清和24份免疫血清进行检测,计算检测结果的平均值 x ˉ = 0.187, 标准方差(s)=0.011,通过公式进一步计算得到阳性阈值PC=0.220,阴性阈值NC=0.209。从而确定检测方法的判定标准:样品D450 nm值≥0.220判为阳性,即BTV感染;D450 nm值≤0.209判为阴性,BTV灭活疫苗接种或BTV阴性,可通过商品化的蓝舌病抗体检测试剂盒进一步确定;0.209<D450nm值<0.220判为可疑,需通过再一次试验进行判定。图3 Western blot结果

Western blot结果

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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本文编号：3575359