鸭坦布苏病毒生物学特性、基因组特征、诊断方法以及感染性克隆的研究
发布时间：2022-01-10 18:05
鸭坦布苏病毒感染于2010年在我国首次爆发,迅速席卷了整个养鸭密集地区,给我国养鸭业造成了巨大损失,目前该病已成为我国主要鸭病之一。本研究从病毒的生物学特性、基因组测序与进化分析、实验室诊断方法的建立以及感染性克隆的构建等四个方面对鸭坦布苏病毒进行了相关研究。1、病毒分离鉴定与特性分析从全国各地发病的鸭群中分离到十多株鸭坦布苏病毒,通过理化特性分析,发现该病毒不能凝集鸡、鸭、鹅和鸽的红细胞,对氯仿和去氧胆酸钠敏感,对酸敏感,不耐热,MgCL2起不到保护作用。通过电镜观察,我们发现该病毒为圆形或椭圆形粒子,大小约为50nm。该病毒可通过鸡胚或鸭胚进行分离,胚体在72h～120h内死亡,胚体水肿,胚肝出血、坏死明显。该病毒在DEF、Vero、DF-1、BHK-21等细胞上生长良好、病变明显。不同毒株对CEF的适应性存在较大差异,有的毒株盲传3代就可适应CEF,而有的毒株盲传6代仍不适应。动物回归试验显示,通过脑内、颈部皮下和点眼滴鼻口服三种途径均能复制出该病典型的症状和病变,但这三种途径发病快慢有所差别,脑内接种最快,点眼滴鼻口服最慢。2、基因组测序与进化分析我们通过随机引物以及参考其他黄...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：109 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
符号说明
氨基酸的简写符号
综述一 鸭坦布苏病毒感染研究进展
参考文献
综述二 黄病毒基因组结构与功能的研究进展
参考文献
综述三 正链RNA病毒反向遗传操作技术研究进展
参考文献
第一章 鸭坦布苏病毒的分离鉴定及特性分析
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 病毒分离
2.2 病毒特性分析
3 讨论
3.1 病毒的分离鉴定
3.2 病毒特性分析
参考文献
第二章 鸭坦布苏病毒的基因组测序和进化分析
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 随机引物扩增BZ-10株
2.2 BZ-10株基因组测序
2.3 其他5株病毒基因组测序
2.4 鸭坦布苏病毒基因组特征
2.5 鸭坦布苏病毒进化地位分析
2.6 鸭坦布苏病毒E蛋白结构与进化分析
2.7 不同鸭坦布苏病毒株的血清交叉中和试验
3 讨论
参考文献
第三章 鸭坦布苏病毒实验室诊断方法的建立
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 RT-PCR检测方法
2.2 荧光定量PCR检测方法
2.3 间接ELISA检测方法的建立
3 讨论
参考文献
第四章 鸭坦布苏病毒感染性克隆的构建
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 基因片段扩增
2.2 全长cDNA克隆的构建
2.3 RNA体外转染DF-1细胞
2.4 RT-PCR方法鉴定
2.5 间接免疫荧光试验鉴定
2.6 酶切鉴定
2.7 子代病毒的接种鸡胚
2.8 子代病毒在DF-1上的TCID_(50)
3 讨论
参考文献
全文总结
附录
附录1：实验用6株鸭坦布苏病毒的多聚蛋白氨基酸序列比对
附录2：DNA Marker的分子量
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录
【参考文献】：
期刊论文
[1]鹅源坦布苏病毒的分离及初步鉴定[J]. 施少华,傅光华,万春和,程龙飞,陈红梅,黄振洲,黄瑜. 中国兽医杂志. 2012(12)
[2]鸭坦布苏病毒E基因的克隆表达及初步应用[J]. 杨少艳,于可响,王华,史玉颖,马秀丽,李建亮,崔言顺. 浙江农业学报. 2012(05)
[3]鹅源黄病毒的分离和初步鉴定[J]. 袁生,李金平,王敏儒,白挨泉,蒲文珺,张济培,彭巧丽,王辉,陈志伟,张浩吉. 中国畜牧兽医. 2012(09)
[4]鹅黄病毒JS804株的生物学特性[J]. 钮慧敏,李银,黄欣梅,赵东敏,刘宇卓,张敬峰,刘飞,李彤彤,周晓波,李祥瑞. 江苏农业学报. 2012(02)
[5]虫媒黄病毒NS5蛋白的生物学功能研究进展[J]. 周希珍,赵慧,高岚,秦成峰. 军事医学. 2012(01)
[6]新型黄病毒在种鹅中垂直传播的研究[J]. 赵冬敏,黄欣梅,刘宇卓,张敬峰,李银. 南方农业学报. 2012(01)
[7]鸭坦布苏病毒研究进展[J]. 朱丽萍,颜世敢. 中国预防兽医学报. 2012(01)
[8]鸭黄病毒BZ株的生物学特性研究[J]. 马秀丽,于可响,高凤,李玉峰,黄兵,吴静,秦卓明. 中国家禽. 2011(21)
[9]一种黄病毒引起鸭产蛋下降的诊断报告[J]. 张蓉蓉,温国元,罗青平,杨峻,王红琳,罗玲,艾地云,邵华斌. 湖北农业科学. 2011(19)
[10]鸭产蛋下降-死亡综合征的临床诊断与病原的初步鉴定[J]. 赵圆圆,李传峰,朱良强,詹松鹤,王汉清,魏建忠,秦爱建,刘光清,王桂军. 扬州大学学报(农业与生命科学版). 2011(03)
本文编号：3581174
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：109 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
符号说明
氨基酸的简写符号
综述一 鸭坦布苏病毒感染研究进展
参考文献
综述二 黄病毒基因组结构与功能的研究进展
参考文献
综述三 正链RNA病毒反向遗传操作技术研究进展
参考文献
第一章 鸭坦布苏病毒的分离鉴定及特性分析
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 病毒分离
2.2 病毒特性分析
3 讨论
3.1 病毒的分离鉴定
3.2 病毒特性分析
参考文献
第二章 鸭坦布苏病毒的基因组测序和进化分析
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 随机引物扩增BZ-10株
2.2 BZ-10株基因组测序
2.3 其他5株病毒基因组测序
2.4 鸭坦布苏病毒基因组特征
2.5 鸭坦布苏病毒进化地位分析
2.6 鸭坦布苏病毒E蛋白结构与进化分析
2.7 不同鸭坦布苏病毒株的血清交叉中和试验
3 讨论
参考文献
第三章 鸭坦布苏病毒实验室诊断方法的建立
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 RT-PCR检测方法
2.2 荧光定量PCR检测方法
2.3 间接ELISA检测方法的建立
3 讨论
参考文献
第四章 鸭坦布苏病毒感染性克隆的构建
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果与分析
2.1 基因片段扩增
2.2 全长cDNA克隆的构建
2.3 RNA体外转染DF-1细胞
2.4 RT-PCR方法鉴定
2.5 间接免疫荧光试验鉴定
2.6 酶切鉴定
2.7 子代病毒的接种鸡胚
2.8 子代病毒在DF-1上的TCID_(50)
3 讨论
参考文献
全文总结
附录
附录1：实验用6株鸭坦布苏病毒的多聚蛋白氨基酸序列比对
附录2：DNA Marker的分子量
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录
【参考文献】：
期刊论文
[1]鹅源坦布苏病毒的分离及初步鉴定[J]. 施少华,傅光华,万春和,程龙飞,陈红梅,黄振洲,黄瑜. 中国兽医杂志. 2012(12)
[2]鸭坦布苏病毒E基因的克隆表达及初步应用[J]. 杨少艳,于可响,王华,史玉颖,马秀丽,李建亮,崔言顺. 浙江农业学报. 2012(05)
[3]鹅源黄病毒的分离和初步鉴定[J]. 袁生,李金平,王敏儒,白挨泉,蒲文珺,张济培,彭巧丽,王辉,陈志伟,张浩吉. 中国畜牧兽医. 2012(09)
[4]鹅黄病毒JS804株的生物学特性[J]. 钮慧敏,李银,黄欣梅,赵东敏,刘宇卓,张敬峰,刘飞,李彤彤,周晓波,李祥瑞. 江苏农业学报. 2012(02)
[5]虫媒黄病毒NS5蛋白的生物学功能研究进展[J]. 周希珍,赵慧,高岚,秦成峰. 军事医学. 2012(01)
[6]新型黄病毒在种鹅中垂直传播的研究[J]. 赵冬敏,黄欣梅,刘宇卓,张敬峰,李银. 南方农业学报. 2012(01)
[7]鸭坦布苏病毒研究进展[J]. 朱丽萍,颜世敢. 中国预防兽医学报. 2012(01)
[8]鸭黄病毒BZ株的生物学特性研究[J]. 马秀丽,于可响,高凤,李玉峰,黄兵,吴静,秦卓明. 中国家禽. 2011(21)
[9]一种黄病毒引起鸭产蛋下降的诊断报告[J]. 张蓉蓉,温国元,罗青平,杨峻,王红琳,罗玲,艾地云,邵华斌. 湖北农业科学. 2011(19)
[10]鸭产蛋下降-死亡综合征的临床诊断与病原的初步鉴定[J]. 赵圆圆,李传峰,朱良强,詹松鹤,王汉清,魏建忠,秦爱建,刘光清,王桂军. 扬州大学学报(农业与生命科学版). 2011(03)
本文编号：3581174
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