新城疫病毒通过PKR/PERK和GADD34-PP1调控eIF2α的磷酸化和翻译起始效率的研究
发布时间：2022-01-11 06:34
新城疫（Newcastle disease,ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）引起的,在家禽和野生鸟类广泛传播的疾病。NDV属于副粘病毒科（Paramyxovirinae）、禽腮腺炎病毒属（Avulavirus）,为单股负链、不分节段的RNA病毒。真核翻译起始因子2α（Eukaryotic Initiation Factor 2α,eIF2α）Ser51位点磷酸化抑制蛋白翻译起始,是细胞应对各种应激采取的保护策略。例如,细胞发生内质网未折叠蛋白积累,病毒感染,氨基酸饥饿等。宿主细胞内有四种能引起eIF2α磷酸化的激酶:PKR（double-stranded RNA-dependent protein kinase）,PERK（PKR-like ER kinase）,GCN（general control non-derepressible-2）,HRI（heme-regulated inhibitor）。RNA病毒感染细胞,促使干扰素分泌增加,诱导PKR上调表达。病毒增值产生的dsRNA激活PKR,进而磷酸化eIF2α,导致蛋白翻译关闭。大量...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 引言
1.1 新城疫病毒概述
1.2 真核翻译起始因子eIF2α
1.2.1 蛋白翻译的调控
1.2.2 eIF2α 激酶
1.2.3 PERK
1.2.4 PKR
1.2.5 eIF2α 磷酸酶
第二章 NDV对蛋白翻译效率的影响
2.1 材料
2.1.1 毒株和细胞
2.1.2 抗体和主要试剂
2.1.3 主要仪器
2.2 实验方法
2.2.1 病毒感染
2.2.2 收集细胞样品
2.2.3 Puromycin标记
2.2.4 SDS-PAGE和Western Blotting分析
2.3 实验结果
2.3.1 NDV感染He La细胞在感染后期导致蛋白翻译逐步关闭
2.3.2 NDV感染DF-1 细胞在感染后期导致蛋白翻译逐渐关闭
2.4 讨论
第三章 eIF2α 磷酸激酶PKR/PERK对蛋白翻译起始的调控
3.1 材料
3.1.1 毒株和细胞
3.1.2 抗体和主要试剂
3.1.3 主要仪器
3.2 实验方法
3.2.1 病毒感染
3.2.2 收集细胞样品
3.2.3 转染方法
3.2.4 Puromycin标记
3.2.5 SDS-PAGE和Western Blotting分析
3.3 实验结果
3.3.1 NDV感染He La细胞引起eIF2α 磷酸化
3.3.2 eIF2α 磷酸化影响蛋白翻译
3.3.3 NDV感染He La细胞激活eIF2α 上游激酶PKR
3.3.4 PKR参与eIF2α 的磷酸化
3.3.5 NDV感染He La细胞引起PERK剪切
3.3.6 PERK不参与eIF2α 磷酸化
3.4 讨论
第四章 eIF2α 磷酸酶GADD34-PP1对蛋白翻译起始的影响
4.1 材料
4.1.1 毒株和细胞
4.1.2 抗体和主要试剂
4.1.3 主要仪器
4.2 实验方法
4.2.1 病毒感染
4.2.2 转染方法
4.2.3 收集细胞样品
4.2.4 Puromycin标记
4.2.5 SDS-PAGE和Western Blotting分析
4.2.6 间接免疫荧光（IFA）检测
4.3 实验结果
4.3.1 NDV感染后期ATF4和GADD34表达上调
4.3.2 GADD34上调表达促进eIF2α 去磷酸化
4.3.3 NDV感染后期PP1发生降解
4.3.4 PP1通过泛素-蛋白酶体途径降解
4.3.5 PP1/PP2A抑制剂促进eIF2α 的磷酸化以及抑制蛋白翻译
4.4 讨论
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3582286
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 引言
1.1 新城疫病毒概述
1.2 真核翻译起始因子eIF2α
1.2.1 蛋白翻译的调控
1.2.2 eIF2α 激酶
1.2.3 PERK
1.2.4 PKR
1.2.5 eIF2α 磷酸酶
第二章 NDV对蛋白翻译效率的影响
2.1 材料
2.1.1 毒株和细胞
2.1.2 抗体和主要试剂
2.1.3 主要仪器
2.2 实验方法
2.2.1 病毒感染
2.2.2 收集细胞样品
2.2.3 Puromycin标记
2.2.4 SDS-PAGE和Western Blotting分析
2.3 实验结果
2.3.1 NDV感染He La细胞在感染后期导致蛋白翻译逐步关闭
2.3.2 NDV感染DF-1 细胞在感染后期导致蛋白翻译逐渐关闭
2.4 讨论
第三章 eIF2α 磷酸激酶PKR/PERK对蛋白翻译起始的调控
3.1 材料
3.1.1 毒株和细胞
3.1.2 抗体和主要试剂
3.1.3 主要仪器
3.2 实验方法
3.2.1 病毒感染
3.2.2 收集细胞样品
3.2.3 转染方法
3.2.4 Puromycin标记
3.2.5 SDS-PAGE和Western Blotting分析
3.3 实验结果
3.3.1 NDV感染He La细胞引起eIF2α 磷酸化
3.3.2 eIF2α 磷酸化影响蛋白翻译
3.3.3 NDV感染He La细胞激活eIF2α 上游激酶PKR
3.3.4 PKR参与eIF2α 的磷酸化
3.3.5 NDV感染He La细胞引起PERK剪切
3.3.6 PERK不参与eIF2α 磷酸化
3.4 讨论
第四章 eIF2α 磷酸酶GADD34-PP1对蛋白翻译起始的影响
4.1 材料
4.1.1 毒株和细胞
4.1.2 抗体和主要试剂
4.1.3 主要仪器
4.2 实验方法
4.2.1 病毒感染
4.2.2 转染方法
4.2.3 收集细胞样品
4.2.4 Puromycin标记
4.2.5 SDS-PAGE和Western Blotting分析
4.2.6 间接免疫荧光（IFA）检测
4.3 实验结果
4.3.1 NDV感染后期ATF4和GADD34表达上调
4.3.2 GADD34上调表达促进eIF2α 去磷酸化
4.3.3 NDV感染后期PP1发生降解
4.3.4 PP1通过泛素-蛋白酶体途径降解
4.3.5 PP1/PP2A抑制剂促进eIF2α 的磷酸化以及抑制蛋白翻译
4.4 讨论
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历
本文编号：3582286
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