猪流行性腹泻病毒河南株生物学特性研究及FQ-PCR检测方法的建立
发布时间：2022-01-12 03:34
猪流行性腹泻（porcineepidemic diarrhea，PED）是由尼多目（Nidovirales）冠状病毒科（Coronaviridae family）冠状病毒属（Coronaviridae genus）α-冠状病毒中的猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的猪的一种急性、高度传染性肠道疾病。自2010年冬季以来，由PEDV引起的猪流行性腹泻疫病在全国大部分养猪省份暴发和流行，给我国养猪业造成了巨大经济损失。有研究表明PED流行毒株是不同与以往经典毒株的变异株，但对于其抗原性、致病性及对该病的快速鉴别诊断方法等方面还未见相关全面系统的研究。为了研究河南省PEDV的分子变异情况、细胞培养特性及特异、快速的鉴别诊断方法，该研究选择本实验室已建立的RT-PCR方法检测出的具有代表性的PEDV阳性样品，对其S1基因进行序列测定和遗传进化分析；利用细胞培养技术在Vero细胞、ST细胞和PK-15细胞中摸索PEDV培养条件，分别在这3种细胞中进行了PEDV细胞增殖所需的胰酶浓度、接种时间及接种剂量的试验，筛选出最适宜PEDV细胞增殖的条件；大量比对GenBank中PEDV M基因序列，选取高度...
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图AS1-1基因序列的扩增结果；图BS1-2基因序列的扩增结果
2.2 S1 基因酶切鉴定结果PEDV重组质粒EcoR I单酶切，琼脂糖凝胶电泳后特异性条带大小约为1 400 bp、1 066bp，与预期扩增片段相符，图1-2。图 A 图 B 图 C 2 结果与分析2.1 S1 基因的 RT-PCR 扩增结果
97.9%～99.8%，氨基酸同源性为97.0%～99.6%。2012年10株分毒株相互之间核苷酸同源性为97.9%～99.8%，氨基酸同源性为97.0%～99.6%；2013年6株分毒株相互之间核苷酸同源性为98.5%～99.7%，氨基酸同源性为98.0%～99.5%。结果表明河南省2012年的PEDV的S1基因与2013年的S1基因相比同源率较高，没有发生大的变异，见图1-3、1-4、1-5。图1-3 16株PEDV S1基因推导核苷酸序列之间的同源性比较Fig. 1-3 homology comparison is derive from 16 strains of PEDV S1 gene between the nucleotide sequence
【参考文献】：
期刊论文
[1]2012年河南省猪流行性腹泻病毒分离株S1基因遗传变异分析[J]. 陈慧娟,吴志明,闫若潜,赵雪丽,赵明军,周兵强,孔刚锐,闫志玲,程俊贞,靳利粉. 中国畜牧兽医. 2014(03)
[2]2010～2012年华中地区猪流行性腹泻病毒分子特征和遗传进化分析[J]. 郑逢梅,霍金耀,赵军,常洪涛,王晓梦,陈陆,王川庆. 病毒学报. 2013(02)
[3]猪病毒性腹泻分子流行病学调查[J]. 刘云波,赵洪翠,王志成,武刚,何启盖. 中国畜牧兽医. 2013(02)
[4]2011年猪流行性腹泻病毒的遗传变异分析[J]. 刘孝珍,陈建飞,时洪艳,张鑫,石达,刘胜旺,冯力. 中国预防兽医学报. 2012(03)
[5]猪流行性腹泻病毒引起疾病的诊断与防治研究进展[J]. 王娟,吕茂杰,郁宏伟,杨保收. 畜禽业. 2011(09)
[6]猪流行性腹泻综合防治[J]. 李家艳. 四川畜牧兽医. 2011(08)
[7]猪流行性腹泻的流行特点及其防治措施[J]. 林忠武. 福建畜牧兽医. 2011(04)
[8]猪流行性腹泻流行规律及防治对策[J]. 洪云华. 安徽农学通报(上半月刊). 2011(01)
[9]猪腹泻的病因分析与防治原则[J]. 陈志新. 畜牧与饲料科学. 2010(08)
[10]猪流行性腹泻的防控[J]. 荣海宇,王红利. 畜牧与饲料科学. 2010(08)
硕士论文
[1]猪流行性腹泻病毒地方株LJB/03株分离鉴定[D]. 张桂红.东北农业大学 2008
本文编号：3584021
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图AS1-1基因序列的扩增结果；图BS1-2基因序列的扩增结果
2.2 S1 基因酶切鉴定结果PEDV重组质粒EcoR I单酶切，琼脂糖凝胶电泳后特异性条带大小约为1 400 bp、1 066bp，与预期扩增片段相符，图1-2。图 A 图 B 图 C 2 结果与分析2.1 S1 基因的 RT-PCR 扩增结果
97.9%～99.8%，氨基酸同源性为97.0%～99.6%。2012年10株分毒株相互之间核苷酸同源性为97.9%～99.8%，氨基酸同源性为97.0%～99.6%；2013年6株分毒株相互之间核苷酸同源性为98.5%～99.7%，氨基酸同源性为98.0%～99.5%。结果表明河南省2012年的PEDV的S1基因与2013年的S1基因相比同源率较高，没有发生大的变异，见图1-3、1-4、1-5。图1-3 16株PEDV S1基因推导核苷酸序列之间的同源性比较Fig. 1-3 homology comparison is derive from 16 strains of PEDV S1 gene between the nucleotide sequence
【参考文献】：
期刊论文
[1]2012年河南省猪流行性腹泻病毒分离株S1基因遗传变异分析[J]. 陈慧娟,吴志明,闫若潜,赵雪丽,赵明军,周兵强,孔刚锐,闫志玲,程俊贞,靳利粉. 中国畜牧兽医. 2014(03)
[2]2010～2012年华中地区猪流行性腹泻病毒分子特征和遗传进化分析[J]. 郑逢梅,霍金耀,赵军,常洪涛,王晓梦,陈陆,王川庆. 病毒学报. 2013(02)
[3]猪病毒性腹泻分子流行病学调查[J]. 刘云波,赵洪翠,王志成,武刚,何启盖. 中国畜牧兽医. 2013(02)
[4]2011年猪流行性腹泻病毒的遗传变异分析[J]. 刘孝珍,陈建飞,时洪艳,张鑫,石达,刘胜旺,冯力. 中国预防兽医学报. 2012(03)
[5]猪流行性腹泻病毒引起疾病的诊断与防治研究进展[J]. 王娟,吕茂杰,郁宏伟,杨保收. 畜禽业. 2011(09)
[6]猪流行性腹泻综合防治[J]. 李家艳. 四川畜牧兽医. 2011(08)
[7]猪流行性腹泻的流行特点及其防治措施[J]. 林忠武. 福建畜牧兽医. 2011(04)
[8]猪流行性腹泻流行规律及防治对策[J]. 洪云华. 安徽农学通报(上半月刊). 2011(01)
[9]猪腹泻的病因分析与防治原则[J]. 陈志新. 畜牧与饲料科学. 2010(08)
[10]猪流行性腹泻的防控[J]. 荣海宇,王红利. 畜牧与饲料科学. 2010(08)
硕士论文
[1]猪流行性腹泻病毒地方株LJB/03株分离鉴定[D]. 张桂红.东北农业大学 2008
本文编号：3584021
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3584021.html
